p85琢基因在卵巢癌中表達(dá)及臨床意義研究.doc

p85琢基因在卵巢癌中表達(dá)及臨床意義研究 劉俊毅 廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院婦科，廣東廣州510800 摘要目的觀察p85基因在卵巢癌組織中的表達(dá)，探討其與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系及用于卵巢癌的早期診斷與治療的臨床意義。方法選取檢測(cè)卵巢癌組織（66例）、癌旁組織（66例）及正常卵巢組織（17例）三個(gè)不同組織作為檢測(cè)對(duì)象，采用免疫組化檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)p85基因表達(dá)產(chǎn)物及探討p85基因表達(dá)與卵巢癌臨床特征的關(guān)系。結(jié)果p85基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達(dá)率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即為該基因在卵巢癌組織中與癌旁組織、正常卵巢組織相比都較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，而與不同的臨床分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論P(yáng)I3Kp85基因的異常表達(dá)可以作為卵巢癌早期診斷和判斷其生物學(xué)特性的指標(biāo)。 關(guān)鍵詞p85基因；卵巢癌；表達(dá)率；臨床意義 R737.31A1674-074（4）07（c）017-02 StudyontheExpressionofp85GeneinOvarianCancerandItsClinicalSignificance LIUJunyi DepartmentofGynecology，HuaduDistrict，GuangzhouCityPeoplesHospital，Guangzhou，GuangdongProvince，510800，China AbstractObjectiveToobservetheexpressionofp85geneinovariancancertissuesandexploreitsrelationshipwiththeourrenceofovariancanceranditsclinicalsignificancefortheearlydiagnosisandtreatmentofovariancancer.MethodsWechoseovariancancertissues(66cases)，ovariancanceradjacenttissues(66cases)andnormalovariantissues(17cases)，threedifferentkindsoftissuesasthedetectionobjects.Immunohistochemicaltechniquewasusedtodetectp85geneexpression.Therelationshipbetweenp85geneexpressionandtheclinicalfeaturesofovariancancerwasinvestigated.ResultsTheexpressionrateofp85geneinovariancancertissues，ovarianadjacentcancertissuesandnormalovariantissueswas68.2%，59.1%，11.8%，respectively，theexpressionrateofp85geneinovariancancertissueswashigherthanthatintheovarianadjacentcancertissuesandnormalovariantissues，thedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05)，butinclinicalstageandlymphnodemetastasistherewasstatisticalsignificance(P0.05).ConclusionTheabnormalexpressionofPI3Kp85genescanbeusedastheindicatorforearlydiagnosisofovariancanceranddeterminationofitsbiologicalcharacteristics. Keywordsp85gene；Ovariancancer；Expressionrate；Clinicalsignificance 作者簡介劉俊毅（1978.10-），女，廣東花都人，本科，主治醫(yī)師，主要從事研究婦科腫瘤的工作。 經(jīng)研究表明，磷脂酸肌醇-3激酶(PI3Ks)和Ras通路與腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系較為密切，它是在Ras通路之后被發(fā)現(xiàn)的又一新的信號(hào)傳導(dǎo)通路1。該通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖與分化，其活性異常不僅能導(dǎo)致正常細(xì)胞惡化，而且還與癌變細(xì)胞的粘附、遷移、腫瘤血管生成以及細(xì)胞外基質(zhì)的降解等相關(guān)2。在PI3K家族中，IA型PI3K能被細(xì)胞表面酪氨酸激酶受體激活，它是由p85調(diào)節(jié)亞基和p110催化亞基組成，p85調(diào)節(jié)亞基和p110催化亞基具有協(xié)同作用，其中p85調(diào)節(jié)亞基對(duì)于p110催化亞基的穩(wěn)定、聚集以及IA型PI3K的激活是必不可少的，PI3K基因的家族中表達(dá)最活躍的也為p85基因，通過PIK3R1進(jìn)行編碼；該基因在體內(nèi)的表達(dá)或者突變都可對(duì)PI3K的傳導(dǎo)產(chǎn)生影響，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)3-4。為觀察p85基因在卵巢癌組織中的表達(dá)，探討其與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系及用于卵巢癌的早期診斷與治療的臨床意義，該研究選取xx年12月xx年12月間該院患者結(jié)合p85基因在卵巢癌中的表達(dá)，現(xiàn)報(bào)道如下。 1對(duì)象與方法 1.1研究對(duì)象 收集婦產(chǎn)科卵巢癌手術(shù)切除病例66例，行全面分期手術(shù)，年齡3577歲，平均年齡48.6歲。以上所有病例均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。取材后液氮保存。按照FIGO2000年修訂的國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期:II期38例，III期28例；全部標(biāo)本在手術(shù)前均沒有接受過化療和放療，所有組織均先用10%福爾馬林溶液固定，然后再用石蠟予以包埋，分別進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)染色。取非腫瘤性原因切除的正常卵巢組織標(biāo)本17例作為正常對(duì)照，濃縮型羊抗人ZNF217多克隆抗體和免疫組化試劑盒分別由abcam生物公司及北京中杉金橋公司生產(chǎn)。 1.2免疫組化法 按即用型二步法檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行抗PI3Kp85(1:100)免疫組織化學(xué)染色，陰性對(duì)照組通過PBS來替代一抗。 1.3結(jié)果評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) PI3Kp85蛋白的顏色為棕黃色的顆粒物質(zhì)。不同的染色顏色其計(jì)分的標(biāo)準(zhǔn)也不一致，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)分為0、1、2、3分；在物鏡一致的條件下根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)如下:25%記1分，26%50%為記2分，51%75%記3分，75%記4分。最終的計(jì)分結(jié)果為上述兩種方式分?jǐn)?shù)的乘積，結(jié)果為陰性、弱陽性(+)、中等陽性(+)、強(qiáng)陽性(+)所對(duì)應(yīng)的分值分別為0、13、45、5分。 1.4統(tǒng)計(jì)方法 使用SPSS13.0對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有的資料都服從正態(tài)分布，通過t檢驗(yàn)分析計(jì)量資料間的差異，2檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料之間的差異。 2結(jié)果 2.1不同組織中p85基因的表達(dá) p85基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達(dá)率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁組織和正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=4.31，P0.05)，而與不同的臨床分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。見表2。 3討論 卵巢癌是發(fā)生于卵巢表面體腔上肢和其下方卵巢間質(zhì)的惡性腫瘤，常發(fā)生于中年婦女，發(fā)病率僅次于子宮體癌和子宮頸癌，位居危害婦女健康疾病的第3位，目前該病的發(fā)生率有增無減，由于腫瘤細(xì)胞易擴(kuò)散而使得化療不能徹底，也增加了靶向治療的難度，提高了卵巢癌患者的死亡率，這給婦女的生命健康帶來嚴(yán)重威脅5。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦無明顯癥狀、體征，現(xiàn)今也缺乏早期診斷方法，雖然國內(nèi)外有報(bào)道應(yīng)用卵巢癌單克隆抗體等技術(shù)可發(fā)現(xiàn)早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就診時(shí)已屬晚期。其發(fā)病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環(huán)境等有關(guān)目前治療主要以手術(shù)為主6。 研究發(fā)現(xiàn)，PI3K基因的家族中表達(dá)最活躍的也為p85基因，通過PIK3R1進(jìn)行編碼；該基因在體內(nèi)的表達(dá)或者突變都可對(duì)PI3K的傳導(dǎo)產(chǎn)生影響，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。激活PI3K基因可生成PIP3這一第二信使，接著在細(xì)胞中與信號(hào)蛋白AKT以及PDK1相結(jié)合，從而活化AKT。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌等很多惡性腫瘤的發(fā)生都與IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）關(guān)系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者觀察到在肺癌以及乳腺癌等腫瘤中其表達(dá)升高7-8。發(fā)生的機(jī)制是在DNA水平上其關(guān)鍵分子位置存在的編碼基因發(fā)生結(jié)構(gòu)的改變，進(jìn)而導(dǎo)致PI3K的活化，例如p85基因在大腸癌或卵巢癌患者中其iSH2的區(qū)域部位發(fā)生突變或缺失都會(huì)引起PI3K的活化。也有文獻(xiàn)記載，某些信號(hào)蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大腸癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤中發(fā)生穩(wěn)定、持續(xù)的活化，并且表達(dá)量顯著上升9-10。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種腫瘤中編碼基因發(fā)生突變或表達(dá)量增高，而抑制PI3K活性后細(xì)胞的增殖則被受阻，表現(xiàn)為細(xì)胞周期阻滯、Rb的磷酸化及CDK4表達(dá)量減少等，這種細(xì)胞周期的阻滯現(xiàn)象能在細(xì)胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表達(dá)的情況下得以恢復(fù)，提示PI3K可能在這些腫瘤中的原癌基因。 該研究的結(jié)果表明，卵巢癌患者與健康者卵巢組織中PI3Kp85蛋白的表達(dá)差異很大，前者表現(xiàn)為過表達(dá)狀態(tài)，后者為低表達(dá)水平。提示該基因與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系較為密切，臨床上在疾病發(fā)生的早期通過檢測(cè)PI3Kp85的水平，有助于及時(shí)篩選出卵巢癌。另外該研究還對(duì)PI3Kp85蛋白的具體表達(dá)情況與卵巢癌疾病的生物學(xué)特征之間的聯(lián)系進(jìn)行了深入分析。研究結(jié)果表明PI3Kp85蛋白的表達(dá)水平上升與卵巢癌的不同臨床分期及轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05)。由此可提示PI3Kp85蛋白的表達(dá)水平上升其腫瘤病人出現(xiàn)惡化的可能性與程度也顯著增高，瘤細(xì)胞擴(kuò)散好的范圍更廣。以往的研究表明，RNA干擾術(shù)對(duì)PI3Kp85表達(dá)可產(chǎn)生抑制作用，以此對(duì)卵巢癌細(xì)胞的快速增殖以及分化進(jìn)行抑制，說明可以以干預(yù)p85基因的表達(dá)來治療卵巢癌，即其具有廣闊的應(yīng)用前景。 參考文獻(xiàn) 1沈文潔，邢福祺，魯永鮮.印跡基因Lot在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及其甲基化的研究J.中華婦產(chǎn)科雜志，xx，42(5):339-342. 2褚艷.PTEN和卵巢腫瘤J.河北醫(yī)藥，xx，31(23):3292-3294. 3SchondorfdT，DistalA，GrabmannJ，etal.SinglemutationofthePTENgeneimrecurrentovariancarcinomasJ.SocGynecolinvest，2000，34(7):31-36. 4瞿永寧，徐玲，沈悅.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PTEN基因后對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響J.中華婦產(chǎn)科雜，xx，45(9):682-685. 5郝明.第17號(hào)染色體基因變異與卵巢癌相關(guān)性研究J.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，xx，29(2):151-154. 6JinsongL，WeiweiS.EpithelialovariancancerFocusongeicsandanimalmodelsJ.LandesBioscience，xx，8(5):731-735. 7沈文靜，戴冬秋，郭科軍.上皮性卵巢癌HIC1基因異常甲基化的檢測(cè)及其臨床意義的研究J.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)