GB15193.9-2003顯性致死試驗(yàn).pdf

I C S 0 7 . 1 0 0C 5 3中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)GB 1 5 1 9 3 . 9 - 2 0 0 3代替 G B 1 5 1 9 3 . 9 -1 9 9 4顯性致死試驗(yàn)Do mi n a n t l e t h a l t e s t2 0 0 3 - 0 9 - 2 4發(fā)布2 0 0 4 - 0 5 - 0 1 實(shí)施華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn) 化 管 理 委 員 會(huì)發(fā) 布免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t )G B 1 5 1 9 3 . 9 -2 0 0 3o il呂本標(biāo)準(zhǔn)全文強(qiáng)制。本標(biāo)準(zhǔn)代替G B 1 5 1 9 3 . 9 -1 9 9 0顯性致死試驗(yàn) 。本標(biāo)準(zhǔn)與 G B 1 5 1 9 3 . 9 -1 9 9 4 相比主要修改如下:在“ 范圍” 中增加了受試物的具體內(nèi)容: 食品生產(chǎn)、 加工、 保藏、 運(yùn)輸和銷售過(guò)程中所涉及的可能 對(duì)健康造成危害的化學(xué)、 生物和物理因素， 檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑( 含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑) 、 食品新 資源及其成分、 新資源食品、 輻照食品、 食品容器與包裝材料、 食品工具、 設(shè)備、 洗滌劑、 消毒劑、 農(nóng)藥殘留、 獸藥殘留、 食品工業(yè)用微生物等; 在“ 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物” 中: 將“ 成年小鼠( 體重3 0 g 以上) 或大鼠( 體重2 0 0 g以上) ” 改為“ 成年小鼠( 性 成熟， 體重3 0 g 以上) 或大鼠( 性成熟， 體重2 0 0 g 以上) ” ， “ 動(dòng)物數(shù)量” 雄性動(dòng)物每組不少于1 0 - 1 5 只， 雌性動(dòng)物每組不少于2 0 只一3 0 只， 改為雄性動(dòng)物每組不少于 1 5 只， 雌性動(dòng)物每組不 少于 3 0只受孕鼠;將“ 分組” 下的兩項(xiàng)內(nèi)容“ 組數(shù)” 和“ 動(dòng)物數(shù)量” 合并改為“ 劑量及分組” ， 高劑量組的設(shè)計(jì)方法增 加一條“ 急性毒性試驗(yàn)給予受試物最大給予劑量( 最大使用濃度和最大灌胃容量) 測(cè)不到 L D s 時(shí)， 則以1 0 g / k g 體重、 人的可能攝人量的1 0 0 倍、 或受試物最大耐受量為最高劑量” ;增加“ 結(jié)果判定” 內(nèi)容。自 本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施之日 起， G B 1 5 1 9 3 . 9 -1 9 9 4 同時(shí)廢止。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位: 同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)、 上海醫(yī)科大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 朱清華、 柳啟沛。本標(biāo)準(zhǔn)于 1 9 9 4 年首次發(fā)布， 本次為第一次修訂免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t )GB 1 51 9 3 . 9 - 2 0 0 3顯 性 致 死 試 驗(yàn)范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了顯性致死試驗(yàn)的基本技術(shù)要求。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)食品生產(chǎn)、 加工、 保藏、 運(yùn)輸和銷售過(guò)程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)、生物和物理因素的致突變作用和對(duì)人體可能產(chǎn)生的危害( 檢測(cè)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的損傷， 但不能檢測(cè)基因突變和毒性作用) ， 檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑( 含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑) 、 食品新資源及其成分、 新資源食品、 輻照食品、 食品容器與包裝材料、 食品工具、 設(shè)備、 洗滌劑、 消毒劑、 農(nóng)藥殘留、 獸藥殘留、 食品工業(yè)用微生物等2原理 致突變物可引起哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞染色體畸變， 以致不能與異性生殖細(xì)胞結(jié)合或?qū)е率芫言谥睬八劳觯?或?qū)е屡咛ピ缙谒劳? 試驗(yàn)動(dòng)物 選用健康動(dòng)物， 符合試驗(yàn)規(guī)格， 且有合格證號(hào)。經(jīng)生殖能力預(yù)試， 受孕率應(yīng)在 7 0 %以上者。雄性成年小鼠( 性成熟， 體重3 0 g 以上) 或大鼠( 性成熟， 體重2 0 0 g 以上) ， 預(yù)先接觸受試物， 再進(jìn)行交配。交配用的成年雌鼠， 不接觸受試物。雌性鼠為雄性鼠的5 -6 倍量。每組雄鼠一般不少于 1 5只， 雄鼠與雌鼠交配， 使每組產(chǎn)生至少 3 0 只受孕雌鼠。4 荊量及分組 試驗(yàn)至少設(shè)3 個(gè)受試物劑量組。高劑量組應(yīng)引起動(dòng)物生育力輕度下降。各組受試物劑量可在1 / 1 0- V 1 / 3工 _ D s 。 之間急性毒性試驗(yàn)給予受試物最大劑量( 最大使用濃度和最大灌胃容量) 求不出L D s 。 時(shí)，則以1 0 g / k g 體重、 人的可能攝人量的1 0 。 倍、 或受試物最大給予劑量為最高劑量， 再下設(shè)2 個(gè)劑量組，另設(shè)溶劑對(duì)照組和陽(yáng) 性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照物可用環(huán)磷酞胺( 4 0 m g / k g 體重) 雌性動(dòng)物每組不少于3 0只受孕鼠。一般應(yīng)同時(shí)做陽(yáng)性和溶劑對(duì)照組。5 操作步驟5 . 1 給予受試物5 . 1 . 1 給予途徑: 應(yīng)采用灌胃法， 或用喂飼法。5 . 1 . 2 給予受試物的方法: 灌胃法一般一日一次， 或一日兩次， 連續(xù) 6 天或 3 個(gè)月。5 . 2 交配 給予雄鼠受試物后， 按雌雄鼠2: 1比例同籠交配 6 天后， 取出雌鼠另行飼養(yǎng)。雄鼠則于 1 天后， 再以同樣數(shù)量的另一批雌鼠同籠交配， 如此共進(jìn)行5 批6 批。5 . 3 胚胎檢查 以雌雄鼠同籠日 算起第 1 5 天一1 7 天， 采用頸椎脫臼法處死雌鼠后， 立即剖腹取出子宮， 仔細(xì)檢查、計(jì)數(shù)， 分別記錄每一雌鼠的活胎數(shù)、 早期死亡胚胎數(shù)與晚期死亡胚胎數(shù)。5 . 4 胚胎鑒別 活胎: 完整成形， 色鮮紅， 有自然運(yùn)動(dòng)， 機(jī)械刺激后有運(yùn)動(dòng)反應(yīng) 早期死亡胚胎: 胚胎形體較小， 外形不完整， 胎盤較小或不明顯。最早期死亡胚胎會(huì)在子宮內(nèi)膜上 6 7免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t )GB 1 5 1 9 3 . 9 - 2 0 0 3隆起如一小瘤。如已完全被吸收， 僅在子宮內(nèi) 膜上留一隆起暗褐色點(diǎn)狀物。晚期死亡胚胎: 成形， 色澤暗淡， 無(wú)自然運(yùn)動(dòng)， 機(jī)械刺激后無(wú)運(yùn)動(dòng)反應(yīng)6 數(shù)據(jù)處理受孕率( %)=孕鼠數(shù)交配雌鼠數(shù)X 1 0 0一總著床數(shù) =活胎數(shù)+早期胚胎死亡數(shù)+晚期胚胎死亡數(shù)平均著床數(shù) =總著床數(shù)受孕雌鼠數(shù). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (3)早晚期胚胎死亡率( 0 o )=早( 晚) 期胚胎死亡數(shù)X 1 0 0 ， (4) 平均早期胚胎死亡數(shù)按試驗(yàn)組與對(duì)照組動(dòng)物的上述指標(biāo)分別用 Xz總著床數(shù)早期胚胎死亡數(shù)受孕雌 鼠數(shù) 。 。 ， ， 甲:. 5)檢驗(yàn)、 單因素方差分析或秩和檢驗(yàn)法， 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 以評(píng)定受試物的致突變性 。7 結(jié)果判定 根據(jù)以上計(jì)算出的受孕率、 總著床數(shù)、 早期和晚期胚胎死亡率予以評(píng)價(jià)。試驗(yàn)組與對(duì)照組相比， 受孕率或總著床數(shù)