不同季節(jié)虎杖根莖與莖葉中大黃素含量變化研究.doc

不同季節(jié)虎杖根莖與莖葉中大黃素含量變化研究作者：胡冠宇,夏醒醒,尹政,陳勤【摘要】目的通過測定藥用植物虎杖在不同季節(jié)時其不同生長部位中的有效成分大黃素含量及其變化規(guī)律,旨在為虎杖的最佳采收時間提供依據(jù)。方法采用高效液相色譜法,Diamonsil-C18(250mm4.6mm,5m)色譜柱,甲醇-0.1%磷酸(8020)為流動相；檢測波長：254nm；流速：1.0mL/min；柱溫：27；進樣量：20L。結(jié)果通過測定不同季節(jié)虎杖的莖葉與根中的大黃素含量,發(fā)現(xiàn)根中大黃素含量最高,且大黃素含量在8月最高。結(jié)論虎杖在生長發(fā)育過程中,大黃素含量變化是有規(guī)律的,可根據(jù)其根中的大黃素含量確定最佳的采收時間。【關(guān)鍵詞】虎杖；大黃素；采收時間；高效液相色譜法Abstract：ObjectiveTofindthechangingregularityofemodincontentindifferenttissuesofPolygonumcuspidatumgatheredindifferentseasonsbyHPLC,sotodecidethebestgatheringtime.MethodsTheseparationwasperformedonDiamonsil-C18(250mm4.6mm,5m)column,usingmethanol-0.1%H3PO4(8020)asmobilephase,detectedat254nm.Theflowratewas1.0mL/min,thecolumntemperaturewas27.ResultsAmongtherhizomeandstemleafofPolygonumcuspidatum,thecontentofemodinintherhizomewasthehighest.Overayear,thecontentofemodinwasthehighestinaugust.ConclusionThecontentofemodinchangesregularlyintheprocessofgrowthanddevelopmentofPolygouumcuspidatum,ThebestgatheringtimecouldbedeterminedbytheemodincontentintherhizomeofPolygouumcuspidatum.Keywords：Polygonumcuspidatum；emodin；gatheringtime；HPLC虎杖(PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.)是蓼科蓼屬多年生草本植物,在我國有廣泛的分布,常見于江蘇、浙江、安徽、山東、廣東、廣西、四川、陜西、云南、貴州等地。傳統(tǒng)藥用部分為其干燥根和根莖,性味苦寒,具有祛風(fēng)利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀等功效。其主要化學(xué)成分有蒽醌、酚性物質(zhì)及黃酮類化合物等,其中蒽醌類化合物主要有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等。大黃素有較廣泛的生物活性,具有抑菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用1。由于大黃素具有顯著的藥理學(xué)功效,故有著廣泛的應(yīng)用。傳統(tǒng)經(jīng)驗認(rèn)為,大多數(shù)根莖類中藥都在春秋季節(jié)時采挖,因為在這個季節(jié)里中藥材中的有效成分往往貯藏于根中。中藥大辭典也記載虎杖的根及根莖應(yīng)在春秋二季采挖2。然而,植物在其生長發(fā)育過程中,體內(nèi)合成的次生代謝物質(zhì)(包括有效成分或稱生物活性成分)隨著季節(jié)的變化,其不同生長部位的含量可能存在很大的差異,僅憑經(jīng)驗?zāi)Ｊ讲赏?并不一定適合所有的中藥材,藥材質(zhì)量也就無法得到保證。本試驗采用高效液相色譜(HPLC)法測定虎杖的根莖和葉部位中大黃素的含量,通過跟蹤觀測安徽合肥地區(qū)39月間虎杖中大黃素含量的動態(tài)變化,以期為確定虎杖的最佳采收季節(jié)提供依據(jù)。1材料Agilent1100series高效液相色譜儀；色譜柱：DiamonsilC18(250mm4.6mm,5m)；Agilent色譜化學(xué)工作站。大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號756-9203)；虎杖藥材采于安徽省委黨校植物園,經(jīng)本實驗室鑒定為虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.。甲醇為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil-C18(250mm4.6mm,5m)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(8020)；檢測波長：254nm；流速：1.0mL/min；柱溫：27；進樣量：20L。2.2對照品溶液的配制精密稱取大黃素對照品1.0mg,以甲醇溶解并定容至10mL,搖勻,配成100g/mL的溶液。2.3供試品溶液的制備3取虎杖莖葉與根適量,分別干燥研細,過60目篩,精密稱取約0.1g,加入三氯甲烷25mL和2.5mol/L硫酸溶液20mL,稱定重量,置80水浴回流2h,冷卻后稱重,用三氯甲烷補足失重,搖勻,分取三氯甲烷,精密量取10mL,水浴蒸干,殘渣加甲醇使溶解,定容至10mL,用0.45m微孔濾膜濾過,備用。2.4線性關(guān)系試驗取100g/mL的對照品溶液,用甲醇稀釋為100、16.67、8.33、1.67、0.83g/mL,按上述色譜條件測定,每個濃度重復(fù)3次,進樣量為20L。以對照品峰面積積分值為縱坐標(biāo),以進樣濃度為橫坐標(biāo)進行線性回歸,得回歸方程為：Y134405X16.119(R0.9999)。表明大黃素在0.83100g/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5精密度試驗精密吸取同一對照品溶液20L,重復(fù)進樣5次,測定大黃素的峰面積值,RSD1.83%,表明儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗將待測樣品溶液在室溫下貯存,在相同的色譜條件下,每隔2h進樣1次,共5次,測定大黃素的峰面積值,RSD0.91%,表明該樣品溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.7重復(fù)性試驗取同一代樣品5份,每份0.1g,精密稱取,按“2.3”項中的方法處理,測定大黃素的峰面積值,結(jié)果大黃素峰面積值RSD1.85%。結(jié)果表明重復(fù)性良好。2.8加樣回收率試驗采用加樣回收法。精密稱取已知含量(21.609g/mL)的樣品,分別精密加入一定量的大黃素(8.333g/mL)對照品,按正文樣品溶液的制備方法及上述的色譜條件,依法測定峰面積,計算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗結(jié)果(略)2.9樣品含量測定精密稱取干燥虎杖不同組織粉碎品,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,吸取20L供試品溶液注入高效液相色譜儀,測定含量。結(jié)果見表2,HPLC圖見圖1。表2樣品中大黃素含量測定結(jié)果(略)3討論虎杖為多年生草本植物,4月中旬開始展葉,58月份為生長旺盛期,89月份為花期,一般在10月底部分葉片開始發(fā)黃脫落,11月中旬落完。結(jié)果表明,大黃素平均含量根部明顯高于莖葉。在根中,大黃素含量在39月間基本呈遞增趨勢,至8月達到頂峰；與此同時,莖葉中大黃素含量則呈遞減趨勢。這說明虎杖在生長發(fā)育過程中,其有效成分大黃素的生成量最高出現(xiàn)在葉中(3月份),隨后,呈下降趨勢,而此時根莖中卻是全年最低點；隨后根莖中的大黃素含量逐漸升高,至4月份時,根莖中的大黃素含量就明顯超過葉中,8月份時為全年最高點。對于這一情況,我們認(rèn)為有兩種可能：其一,植物在生長發(fā)育過程中,合成次生代謝物質(zhì)的基因在植株不同部位中轉(zhuǎn)錄與表達的時間不同；其二,生長早期,由于虎杖幼嫩的莖葉營養(yǎng)豐富,物理結(jié)構(gòu)不堅韌,易遭受微生物、食草動物侵襲,大黃素可能在這個時期通過體內(nèi)轉(zhuǎn)運通道從根部轉(zhuǎn)移到莖葉中以起到一種化學(xué)防御作用,而在生長晚期,這種次生代謝產(chǎn)物含量隨器官成熟而逐漸下降貯存于根莖中。這種現(xiàn)象在其他植物中也有發(fā)現(xiàn),例如,喜樹幼葉中喜樹堿含量是成熟葉的100倍4。從試驗結(jié)果來看,我們認(rèn)為,虎杖的采收時間應(yīng)在8月份較為適宜。為了保證試驗結(jié)果的重復(fù)性和可靠性,本試驗樣品均是在植物園的不同樣本區(qū),選擇采樣30株作為樣本,每次采集同一樣本植株上的莖葉和根莖,低溫烘干,混合粉碎成60目細粉,保證了采樣的代表性?！緟⒖嘉墨I】1王淑玲,孫云廷,劉昱霞,等.大黃素的藥理學(xué)研