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課題2 多聚酶鏈式反應(yīng) PCR 擴增DNA片段 2019 12 20 1 溫故知新1 組成DNA分子的基本單位是什么 這些基本單位是如何連接成DNA分子的 DNA分子結(jié)構(gòu)有什么特點 2019 12 20 2 脫氧核苷酸 脫氧核糖 含氮堿基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤 A 鳥嘌呤 G 胞嘧啶 C 胸腺嘧啶 T 2019 12 20 3 2019 12 20 4 2019 12 20 5 脫氧核苷酸鏈結(jié)構(gòu)簡圖 磷酸二酯鍵 2019 12 20 6 5 5 3 3 2019 12 20 7 DNA分子的復(fù)制需要哪些條件 DNA分子的復(fù)制過程是怎樣的 溫故知新2 2019 12 20 8 DNA母鏈 提供復(fù)制的模板解旋酶 打開DNA雙鏈4種脫氧核苷酸 合成子鏈的原料DNA聚合酶 催化合成DNA子鏈ATP 為復(fù)制過程提供能量引物 使DNA聚合酶從引物的3 端開始連接脫氧核苷酸 DNA復(fù)制的條件 2019 12 20 9 2019 12 20 10 一 PCR原理 PCR 多聚酶鏈式反應(yīng) 技術(shù)是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù) 它能以極少量的DNA為模板 在幾小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝 利用了DNA的熱變性原理 通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合 2019 12 20 11 DNA母鏈 提供復(fù)制的模板解旋酶 打開DNA雙鏈4種脫氧核苷酸 合成子鏈的原料DNA聚合酶 催化合成DNA子鏈ATP 為復(fù)制過程提供能量引物 使DNA聚合酶從引物的3 端開始連接脫氧核苷酸 PCR反應(yīng)的條件 80 100 耐熱的DNA聚合酶 緩沖溶液 維持反應(yīng)的pH值不變 2019 12 20 12 二 PCR反應(yīng)的過程 1 變性 溫度上升到90 以上時 雙鏈DNA解聚成為單鏈 2 復(fù)性 退火 溫度下降到50 左右 引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合 3 延伸 溫度上升到72 左右 溶液中的4種脫氧核苷酸在TaqDNA聚合酶的作用下 根據(jù)堿基互補配對的原則合成新的DNA鏈 2019 12 20

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