實驗四 動物血液基因組DNA的提取.ppt

動物基因組DNA的提取 常祖明 背景知識 動物細胞中有哪些細胞器中含有DNA 與植物細胞的差別 背景知識 DNA的存在形式 背景知識 DNA的存在形式 背景知識 DNA的存在形式 背景知識 DNA的存在形式 核苷酸 雙螺旋結(jié)構 一級結(jié)構 核小體 二級機構 螺線管 三級結(jié)構 超螺旋管 四級機構 染色體 組蛋白 DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物 大都呈酸味 DNA是極性化合物 一般都溶于水 不溶于乙醇 氯仿等有機溶劑 它們的鈉鹽比游離酸易溶于水 在酸性溶液中 易水解 中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定 DNA的理化性質(zhì) 實驗目的 掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的實驗方法注意 此方法會把少量RNA提取出來 故后面通稱核酸的提取 實驗原理 哺乳動物的成熟紅細胞已經(jīng)高度分化 因而當中沒有細胞核 無法提取DNA 禽類的血細胞則可以 禽類代謝旺盛 血液中紅細胞更多 而且紅細胞中有完整的細胞核 大量的染色體 且材料易得 經(jīng)濟 用雞血細胞做實驗材料有兩個原因 一是因為雞血細胞核的DNA含量豐富 材料易得 二是雞血細胞極易吸水脹破 而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心 對設備要求較高 操作繁瑣 歷時較長 實驗原理 固定 血樣采集 抗凝血 裂解細胞 蛋白質(zhì)降解 蛋白質(zhì)變性 沉淀DNA 洗滌去雜質(zhì) 普通家雞無水乙醇 檸檬酸 檸檬酸鈉 尿素 十二烷基硫酸鈉 SDS 1MTris HCl PH8 0 緩沖液 乙二胺四乙酸二鈉 EDTA 2Na 蛋白酶K Tris飽和酚 氯仿 三氯甲烷 異戊醇 實驗材料 實驗儀器 取血針及管離心機 3臺 12管離心管 水浴鍋 65 移液槍 包括槍頭 實驗試劑 1 75 的乙醇2 ACD抗凝劑100ml 共需48ml 每管0 8ml 3 禽血裂解液100ml 共需51ml 每管1 7ml 4 氯仿 異戊醇 24 1 共需54ml 每管1 8ml5 酚 氯仿 異戊醇 25 24 1 共需60ml 每管2ml6 TE緩沖液PH8 050ml 實驗步驟 75 乙醇20ml 翅下取血5ml 5ml離心管 800ulACD抗凝劑 800ulACD抗凝劑 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 棄上清液 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 棄上清液 取680ul 8000轉(zhuǎn)離心1分鐘 55 水浴過夜 1700ul裂解液 10ul蛋白酶K 實驗步驟 2ml飽和酚 搖勻至無塊狀 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 DNA酚蛋白層 5ml離心管 取上層透明的DNA溶液 2ml酚 氯仿 異戊醇 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 5ml離心管 取上層DNA液 1 8ml氯仿 異戊醇 12000轉(zhuǎn)離心10分鐘 5ml離心管 取上層DNA液 無水乙醇 75 無水乙醇 1000ulTE緩沖液 晾干 20 保存 在整個實驗過程中應嚴格執(zhí)行無菌操作 部分藥品有毒 操作中應注意安全防護 剛投入水浴時可以稍快速的晃動 之后的晃動一定要輕柔 再每一次加入藥劑后 都要輕輕晃動離心管 使之混勻 注意事項 思考題 本實驗中用到的各種試劑的作用是什么 本實驗中進行了幾次離心操作 每次的目的 實驗安排 按照學號分組進行實驗 每6人一組 一組做3管 用一個研缽 每3組共用1臺離心機同時進行離心操作 6人一組 2013級生物技術專業(yè)分子生物學實驗