已閱讀5頁,還剩16頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
miRNA及其研究和應用 謝東君2015202030079 RNA在生命過程中的作用 mRNA 合成蛋白質的藍圖rRNA 合成蛋白質的工廠tRNA 合成蛋白質的搬運工miRNA 被關注的RNA研究 2000年 RNAi的研究進展被Science雜志評為重大科技突破 2001年 RNAi作為當年最重要的科學研究成果之一 再次入選 十大科技突破 2002年12月20日 Science雜志將 SmallRNA RNAi 評為2002年度最耀眼的明星 同時 Nature雜志亦將SmallRNA評為年度重大科技成果之一 2003年 microRNA的研究第四次入選 十大科技突破 2005年 microRNA的研究第五次入選 十大科技突破 2006年 RNAi獲得當年的諾貝爾生理學或醫(yī)學獎 并且microRNA的研究第六次入選 十大科技突破 RNA研究的突破性進展 是生物醫(yī)學研究領域近20年來 可與HGP相提并論的最重大成果之一 什么是miRNA miRNA的發(fā)現(xiàn) miRNA的產生過程 miRNA的作用機制 miRNA的特點 與其他寡核苷酸相比 主要有三點不同 沒有開放閱讀框架及蛋白質編碼基因的特點通常的長度約為22個核苷酸 但在3 端可以有幾個堿基的長度變化成熟的miRNA5 端有一磷酸基團 3 端為羥基 miRNA的生物學功能 miRNA的保守性 miRNA靶基因的尋找 盡管數(shù)百種miRNA在最近幾年中被發(fā)現(xiàn)了 但是只有非常少量的miRNA被確定其作用 許多其他的miRNA基因的作用還沒有被闡明 因此發(fā)現(xiàn)miRNA的作用靶點成為了解其在不同的生理過程中的功能的關鍵 目前主要利用生物信息學方法和生物學實驗方法尋找miRNA的靶基因 生物信息學方法尋找miRNA靶基因 生物信息學方法主要是利用某種算法對靶基因樣本進行評分及篩選 主要遵循以下幾個常用原則 miRNA與其靶位點的互補性miRNA靶位點在不同物種之間的保守性miRNA mRNA雙鏈之間的熱穩(wěn)定性miRNA靶位點處不應有復雜二級結構miRNA5 端與靶基因的結合能力強于3 端常用的算法有 miRanda TargetScan RNAhybrid PicTar miTarget等 生物學實驗方法尋找miRNA靶基因 由于計算機模擬在預測miRNA靶基因時存在一定的局限性 因此很多學者也希望能夠利用生物學實驗方法直觀地尋找miRNA靶基因 一般可以從兩個水平去尋找miRNA靶基因從mRNA水平尋找miRNA靶基因從蛋白質水平尋找miRNA靶基因 從mRNA水平尋找miRNA靶基因 基因芯片法 將miRNA成熟體雙鏈或腺病毒載體轉染至細胞中 使得miRNA在細胞中過表達 之后利用基因芯片分析mRNA的變化以找出相應miRNA的靶基因 由于miRNA在體內通過翻譯抑制或影響mRNA的穩(wěn)定性起作用 因此這種方法在尋找起翻譯抑制作用的miRNA的靶基因時存在一定困難 從mRNA水平尋找miRNA靶基因 免疫共沉淀法 利用AGO蛋白家族既能結合miRNA又能結合mRNA的特性 分別使用AGO 1和AGO 2蛋白的單克隆抗體在人類細胞中進行免疫共沉淀 得到與AGO 1和AGO 2蛋白結合的mRNA各600條 并通過克隆測序對這些mRNA進行鑒定 同時從與AGO 1蛋白結合的mRNA中隨機挑選6條進行熒光素酶報告基因檢測 發(fā)現(xiàn)其中有5條都是miRNA的靶基因 從蛋白質水平尋找miRNA靶基因 細胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素標記技術 分別將成熟miRNA雙鏈轉染HeLa細胞 利用細胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素標記技術 stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture 將轉染了成熟miRNA雙鏈的細胞和正常細胞分別培養(yǎng)于含輕 重型穩(wěn)定同位素標記必需氨基酸的培養(yǎng)基中 經(jīng)過若干次細胞倍增后 穩(wěn)定同位素按照序列特異的方式完全摻入到新合成的蛋白質中 通過比較標記前后同一肽段的質譜峰值變化實現(xiàn)對蛋白質的精確定量 在檢測了2000 5000個蛋白后 兩個研究組分別發(fā)現(xiàn) 轉染一條miRNA后有幾百個蛋白的表達水平發(fā)生了改變 許多改變在mRNA水平上不能得到體現(xiàn) miRNA靶基因的鑒定 目前最為常用的miRNA靶位點鑒定方法是熒光素酶報告基因法 其基本原理是首先構建熒光素酶表達載體 將希望鑒定的miRNA靶基因的3 UTR構建到熒光素酶基因的3 UTR中 之后將構建好的載體轉染細胞并改變細胞中相應miRNA的表達水平 最后檢測熒光素酶的表達情況以分析轉染3 UTR中是否含有miRNA的靶位點 miRNA在在腫瘤研究中的應用 隨著對miRNA認識和了解 越來越多的研究認識到它與腫瘤的形成有密切的關系 如抑制癌基因的miRNA表達降低 可導致癌基因的過表達 而抑制抑癌基因的miRNA表達過度 可導致抑癌基因表達降低 致癌基因的過表達與抑癌基因表達降低均可使腫瘤發(fā)生 例如miR 155是由人BIC基因編碼的miRNA 在hodgkin淋巴瘤和burkitt淋巴瘤中均高表達 在burkitt淋巴瘤中 miR 155的前體RNA出現(xiàn)10 30倍的蓄積現(xiàn)象 但是在非hodgkin淋巴瘤中幾乎沒有發(fā)現(xiàn)它的表達 miRNA的研究現(xiàn)狀和展望 目前已發(fā)現(xiàn)了大量的小 分子 它們在序列 結構 表達及功能等方面都不同程度地表現(xiàn)出了多樣性 其中miRNA的表現(xiàn)尤為突出 它很可能在生命活動中起著重要作用 對基因表達 生
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 吉林延邊安圖縣機關事業(yè)單位招聘員額經(jīng)費管理工作人員8人歷年高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 廈門市事業(yè)單位2025年編內工作人員統(tǒng)一歷年高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 二零二五年度港口航道工程合同范本2篇
- 華師大教育科學學院《現(xiàn)代教育論叢》編輯部招考聘用編輯高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 北京應急總醫(yī)院合同制皮膚科醫(yī)師招考聘用高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 北京大學邯鄲創(chuàng)新研究院招考聘用高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 北京東方企業(yè)創(chuàng)新發(fā)展中心招考聘用人員高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 云南省永平縣應急管理局招考1名公益性崗位人員高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 內蒙古建筑職業(yè)技術學院公開招聘15名工作人員高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 佛山市順德區(qū)大良街道第二批招考17名治安員高頻重點提升(共500題)附帶答案詳解
- 2025年八省聯(lián)考內蒙古高考生物試卷真題答案詳解(精校打印)
- 校園公園綠化養(yǎng)護協(xié)議
- 貓抓病的護理
- 2024版城市綠化養(yǎng)護合同補充協(xié)議3篇
- GB/T 19799.2-2024無損檢測超聲檢測試塊第2部分:2號標準試塊
- 2024-2025學年冀教新版八年級上冊數(shù)學期末復習試卷(含詳解)
- DB45T 1831-2018 汽車加油加氣站防雷裝置檢測技術規(guī)范
- 水資源調配與優(yōu)化-洞察分析
- 無人機職業(yè)生涯規(guī)劃
- 2024-2025學年語文二年級上冊 統(tǒng)編版期末測試卷(含答案)
- 2024-2025年江蘇專轉本英語歷年真題(含答案)
評論
0/150
提交評論