厭氧菌的培養(yǎng)方法.ppt

厭氧菌的培養(yǎng)方法 祁紅兵 物理方法包括遮斷空氣法 煮沸法 真空法 空氣置換法 氣體噴射法或轉(zhuǎn)管法等化學方法包括焦性沒食子酸法 鐵絲絨法 保險粉法等生物學方法包括與需氧菌共生好氧法 燕麥發(fā)芽法等混合法包括厭氧罐 袋 法 厭氧手套箱法或厭氧室法 空氣置換鐵絲絨法 空氣置換鈀粒法等 1液體培養(yǎng)基的厭氧培養(yǎng)法 培養(yǎng)基煮沸 驅(qū)氣后置流水中急速冷卻添加還原劑 0 03 0 05 L 鹽酸半胱氨酸0 01 0 02 硫乙醇鈉0 5 1 葡萄糖0 1 抗壞血酸其它還原劑添加瓊脂 2固體培養(yǎng)基的厭氧培養(yǎng)法 厭氧罐法簡易厭氧罐和厭氧袋法鋼絲絨法焦性沒食子酸法抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法生物好氧厭氧培養(yǎng)法轉(zhuǎn)管技術(shù)和氣體噴射培養(yǎng)法厭氧手套箱法 又稱厭氧室法 2 1Gas pak法 原理 氣體發(fā)生袋 檸檬酸和碳酸氫鈉 H2OCO2硼氫化鈉 H2OH2觸媒 鈀粒H2O厭氧罐中的O2厭氧指示劑 11111 厭氧指示劑 亞甲基蘭指示劑盧卡斯固體厭氧指示劑布魯氏指示劑 亞甲基蘭指示劑 6 葡萄糖水溶液20 1N氫氧化鈉水溶液0 10 05 亞甲基蘭水溶液0 2厭氧無色殘存有氧氣藍色 盧卡斯固體厭氧指示劑 2 硼砂溶液5毫升9 硫乙醇酸1毫升酚紅溶液0 1 0 2毫升0 02 美蘭溶液10毫升瓊脂1 厭氧無色殘存有氧氣藍色 布魯氏指示劑 60 羥甲基氨基甲酯14 葡萄糖10 02 美藍1厭氧無色殘存有氧氣藍色 Gas Pak罐的使用操作程序 平皿培養(yǎng)基裝入平皿架中置厭氧罐內(nèi) 打開內(nèi)蓋居中金屬網(wǎng)袋 裝入觸媒鈀粒 打開錫箔紙袋 取出厭氧指示劑片 剪開氣體發(fā)生袋一角 注入10毫升水 迅速緊閉罐蓋 置培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 約經(jīng)5 10分鐘后 放入?yún)捬踔甘緞┢?2 2 1簡易厭氧罐 干燥器容內(nèi)徑 厘米 容器1容器2容器3容積 毫升 硼氫鈉氯化鈷0 2克檸檬酸0 6克15cm 約2150毫升 或和0 6克鈀粒1 5克碳酸氫鈉0 7克18cm 約3500毫升 硼氫鈉氯化鈷0 33克檸檬酸1克或和1克鈀粒2克碳酸氫鈉1 15克 2 2 2厭氧袋法 聚碳酸酯 復(fù)合塑料膜 制厭氧袋產(chǎn)氣袋厭氧指示劑觸媒 2 2 3保險粉的厭氧罐培養(yǎng)法 二亞硫酸鈉 Na2S2O4 碳酸氫鈉無水硫酸鈉不用觸媒 2 3鋼絲絨法 酸性硫酸銅溶液鋼 鐵 絲絨銅和鐵的絡(luò)合物O2厭氧指示劑 酸性硫酸銅溶液 將自來水1升加硫酸銅60g 吐溫 8020ml 加熱溶解后 又加入2N的硫酸90ml 最后加水至6升 方法 取5 6g鋼絲絨 L 于1 1 5升酸性硫酸銅溶液浸泡30 60s 鋼絲絨變成紅銅色 擠凈液體置鋁質(zhì)或玻璃容器中 放入?yún)捬豕迌?nèi) 隨后將厭氧指示劑放入 密封厭氧罐 1 4h后可達厭氧狀態(tài) 2 4焦性沒食子酸法 焦性末食子酸粉末 NaHCO3或NaOH溶液無菌玻片已接種細菌的平板倒扣在上面融化的白蠟封邊 2 5抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法 玻璃干燥罐混合氣鋼瓶 10 二氧化碳 10 的氫氣 80 的氮氣三通閥觸媒 鈀粒 浸泡鋼絲絨 氯化鈷厭氧指示劑 2 6生物好氧厭氧培養(yǎng)法 皰肉培養(yǎng)基 牛肉渣0 5g牛肉浸液7ml液面上加蓋3 4mm厚的融化凡士林 滅菌 生物好氧厭氧培養(yǎng)方法 2 7轉(zhuǎn)管技術(shù)和氣體噴射培養(yǎng)法 360 鋼瓶進氣銅柱除氧氣體 亮黃色 微量O2H2源CuO 黑色 接種或移植 2 8厭氧手套箱法 又稱厭氧室法 3厭氧培養(yǎng)方法的選擇 亨格特的預(yù)還原滅菌厭氧培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)管技術(shù) 氣體噴射培養(yǎng)法厭氧手套箱培養(yǎng)法用于要求嚴格的厭氧培養(yǎng)法的微生態(tài)學 正常菌群 的研究工作厭氧罐 袋 法結(jié)合其它厭氧培養(yǎng)方法不適用于對氧極其敏感的厭氧菌 但是在臨床細菌的檢驗工作中 可以充分使用此法分離感染癥中的厭氧病原菌 4厭氧菌的保存 4 1繼代保存 以GAM半固體流動培養(yǎng)基和TEP半固體培養(yǎng)基作傳代培養(yǎng)保存 用毛細吸管吸菌進行繼代培養(yǎng) 使用白金接種環(huán)移菌接種 可以避免有的菌在操作中接觸空氣或氧化物而死亡 數(shù)周作一次繼代培養(yǎng) 新分離的的菌種 在幾個月內(nèi) 每3 4星期傳代一次 被保存的菌種 放室溫下暗處 最好是不同菌用不同培養(yǎng)基保存 4 2冷凍保存 20 脫脂牛奶0 5ml分注在帶螺旋塞的玻璃瓶中 經(jīng)110 15分鐘高壓滅菌 冷卻后 先用毛細吸管取半固體高層培養(yǎng)基24 48h生長茂盛部位的厭氧菌液0 5ml 加入玻璃