溶菌酶的晶體培養(yǎng)試驗.doc

溶菌酶晶體培養(yǎng)實驗一 實驗目的近年來，X射線晶體結構分析技術在受體研究中得到了廣泛應用。其關鍵是獲得具有高衍射分辨率的晶體。本試驗通過溶菌酶晶體培養(yǎng)實驗：1 了解蛋白質分子結晶的原理2 了解影響蛋白質分子結晶的因素3 掌握蛋白質晶體的懸滴培養(yǎng)法二 蛋白質分子結晶的原理蛋白質結晶的4個主要步驟：1 測定蛋白質溶液的純度 2 蛋白質溶液與鹽，有機化合物等沉淀劑混勻；膜蛋白需要加入去垢劑3 混合溶液達到過飽和狀態(tài)，形成晶核4 晶核一旦形成，晶體開始生長三影響蛋白質分子結晶的因素1待結晶蛋白質的純度，一般要求純度高于95%2待結晶蛋白質的濃度， 510 mg/ml3沉淀劑，鹽，PEG，有機溶劑4pH值5溫度， 4C, 16C6. 結晶方法，懸滴法，坐滴法7震動四 試劑及器材1 試劑：溶菌酶蛋白，氯化鈉，醋酸鈉，去離子水2 器材：可調移液器，晶體培養(yǎng)板，硅化蓋玻片，真空脂，晶體培養(yǎng)箱，顯微鏡五 試驗步驟1 配制50 mg/ml 溶菌酶溶液，0.1 M醋酸鈉溶液，pH4.52 配制池液：（1）5% (w/v) 氯化鈉，0.1 M醋酸鈉溶液，pH4.5 （2）8% (w/v) 氯化鈉，0.1 M醋酸鈉溶液，pH4.53在晶體培養(yǎng)板溶劑池中分別加入0.3 ml池液（1）和池液（2）4在干凈的硅化蓋玻片上，滴加2 ml溶菌酶溶液和2 ml池液5將蓋玻片倒扣在加池液的有溶劑池上，用真空脂密封6將晶體培養(yǎng)板放入16C晶體培養(yǎng)箱7第二天，在顯微鏡下觀察晶體生長情況Procedure for Crystallization of Lysozyme Chemicals needed: Lysozyme proteinSodium ChlorideSodium Acetate bufferDistilled waterProcedure1. Prepare 50 mg/ml sample of lysozyme in 0.1 M NaAc pH4.52. Prepare well solutions:a. 5% (w/v) NaCl, 0.1 M sodium acetate, pH4.5 b. 8% (w/v) NaCl, 0.1 M sodium acetate, pH4.53. Place 0.3 ml of well solution a, well solution b in each well of a VDX tray4. On a clean silated cover slide, create 4 drops of 2 l lysozyme solution, 2 l well solution5. Seal these cover slips with grease over a well6. Place the VDX plate in 16