檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)I 實(shí)驗(yàn)筆試整理(For J檢驗(yàn)專業(yè) 大二下學(xué)期).doc

寄生蟲部分蛔蟲：受精卵：橢圓形，棕黃色，卵殼厚，內(nèi)含物卵細(xì)胞，外被蛋白質(zhì)膜 未受精卵：狹橢圓形，卵殼薄，內(nèi)含屈光顆粒，蛋白質(zhì)膜較薄，沒有蛔甙所以有一定的變形性鞭蟲：成蟲：活體呈肉色，外形略似馬鞭，前端細(xì)長，后端粗大，細(xì)部約占體長3/5蟲卵：棕黃色，比受精蛔蟲卵小，卵殼較厚，兩端有透明蓋塞蟯蟲：蟲卵：略呈橢圓形，左右不對稱，一側(cè)較扁平，一側(cè)隆起，無色透明。卵殼較厚，初產(chǎn)卵有蝌蚪胚胎。鉤蟲：蟲卵：兩種鉤蟲卵相似，稍帶長橢圓形，兩端較圓，殼薄，無色透明。一般含24個(gè)卵細(xì)胞，卵殼與細(xì)胞之間間隙明顯。十二指腸鉤蟲/美洲鉤蟲：體形 前端與尾端均向背面彎曲呈C形/前端向背面彎曲，尾端向腹面彎曲呈S形；口囊 腹側(cè)前緣有2對鉤齒/腹側(cè)前緣有1對半月形板齒；交合傘 略圓/略扁似扇形；背輻射 由遠(yuǎn)端分二支，每支又分三小支/由基部分二支，每支又分二小支班氏微絲蚴/馬來微絲蚴 體態(tài)（柔和彎曲較大/硬直大彎上有小彎）頭間隙長寬比 較短1:1或1:2/較長2:1；體核（圓形或橢圓形，各核分開，排列整齊，清晰可數(shù)/橢圓形大小不等，排列緊密，常互相重疊，不易分清）尾核（無/有2個(gè)）旋毛蟲囊包呈紡錘形或檸檬形，其縱軸與肌纖維平行。一個(gè)囊內(nèi)通常含有12條卷曲幼蟲。肝吸蟲：成蟲：雌雄同體。背腹扁平前端稍窄，后端鈍圓，狀似葵花籽。口吸盤位于體前端，略大于腹吸盤，后者位于蟲體前1/2處。雌雄生殖器官有高度分支的睪丸1對，前后排列于蟲體后端1/2處。雌性生殖器官有卵巢1個(gè)，分葉狀，位于睪丸之前。受精囊在睪丸和卵巢之前，呈橢圓形，與輸卵管相同。蟲體兩側(cè)為卵黃腺。蟲卵：形似芝麻，黃褐色，一端較窄且有卵蓋，蓋周圍的卵殼增厚形成肩峰另一端疣狀突起，卵內(nèi)含成熟的毛蚴。肺吸蟲：成蟲：蟲體卵圓形，較肥厚，腹面扁平，背面隆起。活蟲紅褐色，半透明，因伸縮后體形多變?？谖P與腹吸盤大小相似，腹吸盤位于蟲體中部稍前。雌雄同體，睪丸兩個(gè)分支，左右并列，約在蟲體后1/3處，卵巢一個(gè)，葉狀，與子宮并列于腹吸盤后。蟲卵：呈金黃色，橢圓形，兩側(cè)多不對稱，前端較寬，后端較窄，卵蓋明顯而稍傾斜。卵內(nèi)有一個(gè)卵細(xì)胞和十余個(gè)卵黃細(xì)胞，卵細(xì)胞常被卵黃細(xì)胞所遮而不易清晰看到日本血吸蟲：蟲卵略成橢圓形，淡黃色，無蓋殼旁有一短側(cè)棘，排出的蟲卵多為成熟卵布氏姜片吸蟲：蟲卵為橢圓形，淡黃色，卵蓋不明顯，亂蓋薄，卵內(nèi)含一個(gè)卵細(xì)胞和數(shù)十個(gè)卵黃細(xì)胞豬牛帶絳蟲比較：體長（24米/48米）節(jié)片（7001000節(jié)，薄，略透明/10002000節(jié)，肥厚，不透明）頭節(jié)（球形，有頂突和小鉤/近方形，無頂突和小鉤）孕節(jié)（子宮分支不整齊，每側(cè)約713支/子宮分支整齊，每側(cè)約1530支）囊尾蚴（頭節(jié)有小鉤/頭節(jié)無小鉤）絳蟲蟲卵：卵殼薄且透明，呈球形呈卵圓形，在光鏡下呈放射狀的條紋，胚膜內(nèi)為六鉤蚴幼蟲（豬囊尾蚴）呈囊狀，半透明，乳白色，囊內(nèi)充滿透明液體，有小米粒大小的白色，為凹入囊內(nèi)的頭節(jié)。細(xì)粒棘球：成蟲是絳蟲中最小的蟲種之一，由頭頸部，幼節(jié)，成節(jié)及孕節(jié)各一節(jié)組成，幼蟲：圓形囊狀體，似水球溶組織阿米巴：滋養(yǎng)體：內(nèi)外質(zhì)分界清楚，外質(zhì)透明，內(nèi)質(zhì)顆粒狀，內(nèi)含一個(gè)球形泡狀核，核膜內(nèi)側(cè)緣有一層排列整齊，大小均勻的核周染色質(zhì)粒，核仁小且居中，其與核膜之間有纖細(xì)的網(wǎng)狀核纖絲連接，在有癥狀患者組織中分離的滋養(yǎng)體內(nèi)質(zhì)中常含有被吞噬的紅細(xì)胞。包囊：球形，有塊狀糖原及短棒狀的擬染色體，擬染色體的形態(tài)具蟲種鑒別意義。成熟包囊有4個(gè)核，糖原塊和擬染色體多已消失，核為泡狀核，與滋養(yǎng)體相同但稍小結(jié)腸內(nèi)阿米巴：滋養(yǎng)體：內(nèi)外質(zhì)界不清，包質(zhì)含顆粒、空泡和食物泡，多含細(xì)菌，無紅細(xì)胞核仁大而偏位，核周染色質(zhì)粒分布不均。包囊：有18個(gè)核，核與滋養(yǎng)體相似，未成熟包囊包質(zhì)內(nèi)可見糖原泡和草束狀擬染色體藍(lán)氏賈第鞭毛蟲：滋養(yǎng)體;呈倒置梨形，腹面前半部向內(nèi)凹陷形成吸盤，借此吸附在宿主腸黏膜上，有4對鞭毛，按其位置分別為前側(cè)鞭毛，后側(cè)鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛各一對，依靠鞭毛的擺動(dòng)可活潑運(yùn)動(dòng)。經(jīng)鐵蘇木素染色后可見有一對并列在吸盤底部卵圓形的泡狀細(xì)胞柱包囊：為橢圓形，囊壁較厚，碘液染色后呈黃綠色，囊壁與蟲體之間有明顯的空隙，未成熟的包囊有2個(gè)核，成熟包囊有4個(gè)核多偏于一端陰道毛滴蟲:滋養(yǎng)體：梨形或橢圓形，無色透明，有折光性，活動(dòng)性強(qiáng)，具4根前鞭毛和1根后鞭毛。軸柱纖細(xì)透明，縱貫蟲體。自后端伸出使蟲體呈梨形，因富于黏性。間日惡性瘧原蟲比較：環(huán)狀體（細(xì)胞質(zhì)淡藍(lán)色，或環(huán)狀，較大，約為紅細(xì)胞直徑的三分之一，核一個(gè)，紅色，通常紅細(xì)胞內(nèi)只寄生一個(gè)瘧原蟲，偶爾兩個(gè)/環(huán)纖細(xì)約為紅細(xì)胞直徑的五分之一，一個(gè)核，兩個(gè)核也常見，紅細(xì)胞可含兩個(gè)以上原蟲，蟲體常位于紅細(xì)胞的邊緣）滋養(yǎng)體（蟲體由小漸大，活動(dòng)顯著，故蟲體形狀不規(guī)則，虐色素黃棕色，小桿狀/體小結(jié)實(shí)，不活動(dòng)，虐色素集中一團(tuán)，黑褐色，原蟲此時(shí)開始集中在內(nèi)臟毛細(xì)血管，外周血中不易見到）雄配子體（蟲體是圓形,略大于正常紅細(xì)胞,胞質(zhì)藍(lán)而略帶紅色,核疏松,淡紅色,常位于中央,虐色素分散/兩端鈍圓,胞質(zhì)藍(lán)而略帶紅色,核疏松,淡紅色,位于中央,虐色素黑褐色,小桿狀,分布于核周較多）雌配子體（圓形占滿脹大的紅細(xì)胞，胞質(zhì)藍(lán)色，核結(jié)實(shí)，較小，深紅色，偏于一側(cè)，虐色素分散/新月型，兩端較尖，胞質(zhì)藍(lán)色，核致密，深紅色，位于中央，虐色素黑褐色，分布于核周圍）剛地弓形蟲：速殖子（滋養(yǎng)體）呈方形或新月型。一端較尖，一端較鈍。包囊：圓形或橢圓形，外被一層富有彈性的堅(jiān)韌囊壁。囊內(nèi)含有數(shù)十個(gè)至數(shù)百個(gè)緩殖子。疥螨：近圓形，背面隆起，乳白色，體表有許多波形皮紋。背面有圓錐形的皮棘，成對的粗刺、剛毛和長鬃。顎體短小，位于前端。螯肢1對，位于背面呈鉗狀，有小齒，適于嚙食宿主皮膚的角質(zhì)層組織。觸須1對，由3節(jié)組成，上有剛毛。足4對，粗短呈圓錐形，前兩對足與后兩對足相距較遠(yuǎn)。雌雄螨前兩對足的末端均有長柄的吸墊，具有吸盤功能。后兩對足雌雄不同，雌蟲足末端為剛毛，而雄蟲第四對足末端是吸墊。雌螨的產(chǎn)卵孔位于足體的中央，雄螨的生殖區(qū)位于第四對足之間略后出。肛門均位于軀體后緣正中。后氣門：舍蠅：“D”型；廝螯蠅：似三角形；其余似圓形。薄血膜的制作：取1滴血于1張潔凈的載玻片上，選1張邊緣平整、光滑的載玻片做推片，用左手拇指和中指夾持其兩端，將推片的邊緣中點(diǎn)與與血滴接觸，并與載玻片呈3045度夾角，待血滴沿推片邊緣的兩側(cè)展開后，立即由右向左迅速推成薄血膜。理想薄血膜要求紅細(xì)胞均勻地鋪成一層，無裂痕，其末端凸出呈舌尖形。注意：推片時(shí)用力和速度要均勻，不能中途停頓或重復(fù)推片，以免造成血膜斷裂或厚薄不均。如血量多，夾角宜??；取血量小，則夾角可大些。厚血膜的制作：用推片的一角接觸刺血點(diǎn)上的血滴，取血2滴，置載玻片上，并從里向外旋轉(zhuǎn)涂片，使成直徑0.8cm大小的圓形血膜，厚薄要均勻，然后平置桌上，待自然干燥。厚薄血膜制作時(shí)：用目測法將載玻片從右到左分成3格，厚血涂在第二格中央，薄血膜涂在第3格中央，第一格用于貼標(biāo)簽。用姬氏染液或瑞氏染液染色后鏡檢。優(yōu)缺點(diǎn)：薄血膜涂片經(jīng)染色后原蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)完整、清晰，可辨認(rèn)原蟲的種類和各發(fā)育階段的形態(tài)特征，適用于臨床診斷，但蟲數(shù)較少容易漏檢。 厚血膜涂片在制作過程中原蟲皺縮、變形，而且紅細(xì)胞溶解，鑒別有困難，但原蟲較集中，易被發(fā)現(xiàn)，熟識其形態(tài)特征后可提高檢出率。 因此最好一張玻片上同時(shí)制作厚、薄血膜，常先檢查厚血片刻較快找到瘧原蟲確立診斷，再檢查薄血片確定蟲種。 衛(wèi)生檢驗(yàn)部分 三氧：溶解氧、耗氧量、生化需氧量。三氮：氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮氨氮： 納氏試劑比色法。原理：水中氨+納氏試劑【堿性條件】黃至棕色膠體絡(luò)合物，其顏色深淺與氨氮含量成正比。試劑：酒石酸鉀鈉掩蔽劑，掩蔽劑溶液中易生成沉淀的離子4注意事項(xiàng)：水中氨氮不穩(wěn)定，應(yīng)盡快分析。標(biāo)準(zhǔn)管加氨氮標(biāo)準(zhǔn)使用液后，必須先加無氨水稀釋再加其他試劑，否則會產(chǎn)生濃厚沉淀而無法測定硫代硫酸鈉除去余氯洗滌過后比色管中的剩余水量僅對樣品管有影響。亞硝酸鹽： 重氮化偶合比色法原理：亞硝酸鹽+對氨基苯磺酸起重氮化作用，然后再與鹽酸甲-萘胺起偶合反應(yīng)，生成紫紅色偶氮燃料，進(jìn)行比色測定。注意事項(xiàng)：有色金屬離子干擾測定，用氫氧化鋁絮凝法過濾除去懸浮物。重氮化最佳PH1.4，偶合化最佳PH2.0-2.5，用醋酸鈉緩沖溶液來維持。顯色速度與溫度有關(guān)，溫度低于15時(shí)，可適當(dāng)加熱，染料的穩(wěn)定性也與溫度有關(guān)，溫度低，顯色慢，褪色慢，溫度高，顯色快，褪色快。試劑加入順序嚴(yán)遵守操作步驟，試劑的加入要間隔合適的反應(yīng)時(shí)間（對氨基苯磺酸3min,醋酸鈉緩沖溶液，鹽酸甲-萘胺溶液，搖勻放置10min）耗氧量： 酸性高錳酸鉀滴定法。原理：水樣中還原性物質(zhì)在酸性條件下，加熱至沸時(shí)被高錳酸鉀所氧化，過量的高錳酸鉀用草酸還原，再用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴過量的草酸，根據(jù)高錳酸鉀的消耗量，求得耗氧量。試劑：高錳酸鉀氧化劑滴定劑。操作：錐形瓶的處理：去除所有還原性物質(zhì)，注意處理范圍要廣，剩余高錳酸鉀的量要盡可能的少。水樣處理：V1用來測定水中有機(jī)物的消耗高錳酸鉀的量；V2用來標(biāo)定高錳酸鉀的濃度。計(jì)算。注意事項(xiàng)：測定要嚴(yán)格按照操作條件進(jìn)行（酸性，加熱十分鐘，氧化劑）反應(yīng)要維持一定的酸度，以H+0.43m為宜，太高高錳酸鉀自動(dòng)分解，過低反應(yīng)速度太慢。酸度只能用硫酸調(diào)節(jié)水樣消耗高錳酸鉀為原加入量的一半左右要測平行量（有機(jī)物種類不同，在水中分布也不同）cl-濃度大于300mg/L時(shí)有干擾。本實(shí)驗(yàn)的污染主要來自滴定管加熱10min:是通過在即將到達(dá)10min時(shí)立即加入草酸溶液來控制的所得的耗氧量實(shí)際為10min內(nèi)水樣的耗氧量總鉻：堿性高錳酸鉀法原理：在堿性條件下，用高錳酸鉀將水樣中的cr3+氧化為cr6+,其與二苯碳酰二肼反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物，進(jìn)行比色定量。操作：樣品制備：水樣50ml,玻璃珠2-3顆+氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至中性+高錳酸鉀至紫紅色煮沸+乙醇去除高錳酸鉀加熱+MgO+硫酸至中性過濾轉(zhuǎn)移洗滌定容。注意事項(xiàng)：cr6+易被吸附，所以Mg(OH)2沉淀應(yīng)盡可能少造成cr6+損失和污染的因素：樣品保存期要盡量的短，容器內(nèi)壁要光滑，否則易吸附，容器不能用刷子刷，不能用鉻酸洗。減少cr6+的損失要注意：轉(zhuǎn)移，過濾，洗滌，定容的過程，玻棒，錐形瓶，沉淀要用熱水洗2-3次。用水量用10-20ml，遵循少量多次原則，注意用水量，影響氧化還原的因素：酸度，溫度。生成的沉淀與加入的高錳酸鉀量有關(guān)，而高錳酸鉀的量是通過MgO的量來控制油脂酸價(jià) 酸堿滴定法原理：用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定植物油中的游離脂肪酸，每克植物油消耗氫氧化鉀的質(zhì)量稱為酸價(jià)，單位為mg/g. 試劑：乙醚乙醇混合液。乙醚溶解油脂，乙醇促進(jìn)水與有機(jī)溶劑的混合注意：該實(shí)驗(yàn)測定的物質(zhì)粘度較大，因此在吸取時(shí)，要使停留時(shí)間長一些，以確保所取樣品的量使用堿式滴定管時(shí)要使頭部充滿滴定劑粉塵濃度：濾膜質(zhì)量法原理：是一定體積的含塵空氣，通過已知重量的濾膜，將粉塵阻留在濾膜上，根據(jù)采樣前后的質(zhì)量差，即可計(jì)算出空氣中粉塵的濃度注意事項(xiàng)：濾膜為聚氯乙烯濾膜，具有靜電性，憎水性，耐酸堿，阻力小，阻留率高，重量輕，韌性好，可溶于有機(jī)溶劑，不耐高溫。正確辨別濾膜正反面，將濾膜裝入采樣盒內(nèi)。采樣前要檢漏采樣高度1.5m，記錄采樣點(diǎn)的氣溫，以便換算成標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采氣體積。采樣量為1-20mg過重會使樣品損失（阻塞孔徑，阻力增大，粉塵易脫落）過少則增加稱量誤差采樣完畢，將采樣的濾膜折好，放入采樣盒內(nèi)，帶回實(shí)驗(yàn)室。采平行樣。SO2:四氯汞鈉-鹽酸副玫瑰苯胺比色法原理：SO2被四氯汞鈉吸收后，形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，在與甲醛及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成玫瑰紫色化合物，比色定量。注意事項(xiàng)：加試劑時(shí)要沿管壁加使樣品測量值偏低的原因有a，采樣時(shí)使用的抽氣機(jī)中的保護(hù)管漏氣b，測量時(shí)樣品取樣少，c，操作者自身操作失誤粉塵分散度：濾膜溶解涂片法。注意事項(xiàng)：所有玻璃器皿保持清潔無塵加乙酸丁酯溶解濾膜，要用玻璃棒輕輕攪拌使之成為均勻的粉塵混懸液要做空白對照測量時(shí)不得隨意尋找視野，（左右，上下）遇長徑測長徑，遇短徑測短徑不適用于可溶于有機(jī)溶劑中的粉塵和纖維狀粉塵金屬毒物的快速測定（砷、汞）原理：金屬cu在鹽酸酸化的樣品溶液中，能使砷 汞還原成單質(zhì)狀態(tài)，或生成銅合金，沉淀于銅絲表面，顯示出不同顏色和光澤，從而初步判斷這些金屬是否存在。注意：觀察銅絲的顏色，光澤（紅色銀白色）本實(shí)驗(yàn)只可作為預(yù)實(shí)驗(yàn)，而不能作為確證試驗(yàn)。甲醇： 品紅亞硫酸比色法原理：甲醇經(jīng)高錳酸鉀氧化成甲醛后，與亞硫酸品紅作用生成藍(lán)紫色化合物，與標(biāo)準(zhǔn)比色（過量的高錳酸鉀及在反應(yīng)中產(chǎn)生的MnO2,在硫酸環(huán)境中用草酸還原）注意：顯色靈敏度隨乙醇濃度的改變而改變，以體積分?jǐn)?shù)為6時(shí)的乙醇濃度顯色靈敏度最高，因?yàn)樽詈笠ㄈ葜?ml所以乙醇含量為0.3ml（乙醇濃度：30，取1.0ml，40，取0.75ml）加入品紅亞硫酸溶液后，混勻，要靜置30min：一方面是反應(yīng)完全，另一方面是消除其他物質(zhì)的干擾，（其他醛類與之反應(yīng)生成的化合物使其褪色）樣品本身含甲醛，則實(shí)驗(yàn)值將因?yàn)橄旧砑兹┑挠绊?，可另取一管不加高錳酸鉀來進(jìn)行比較。加入草酸硫酸時(shí)，將產(chǎn)生熱量，應(yīng)當(dāng)冷卻后，再加入品紅亞硫酸溶液，實(shí)際是甲醛加品紅亞硫酸紫色化合物，通過測定吸光度得到的是甲醛的含量，又因?yàn)榧兹┦羌状荚诹姿釛l件下被高錳酸鉀氧化的產(chǎn)物，；因此即可知道甲醛的含量，最終結(jié)果應(yīng)換算成60酒無甲醛的乙醇的作用4計(jì)算，甲醇含量（g/100ml）=m/(v1000)100.報(bào)告結(jié)果=60/度數(shù)甲醛含量蛋白質(zhì)：凱氏定氮法原理：在樣品中加入硫酸和催化劑，在加熱的條件下使蛋白質(zhì)氧化分解，使待測組分中的氨以離子形式留存于溶液中，供進(jìn)一步檢測，分解出的氨與硫酸結(jié)合 形成硫酸銨，然后在堿性條件下蒸餾，使氨游離，并用硼酸吸收，最后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定生成的四硼酸銨，根據(jù)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量計(jì)算氮含量，再乘以蛋白質(zhì)系數(shù)，試劑：硫酸銅催化劑;硫酸鉀提高沸點(diǎn)；濃硫酸去除有機(jī)物，并使氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨，操作：消化，蒸餾，滴定，計(jì)算。實(shí)驗(yàn)觀察：消化加入濃硫酸后，牛肉先似變熱，顏色變?yōu)楹稚?，再為燒焦?fàn)铑伾凇Ｖ缶吞蓟癁楹谏?，產(chǎn)生大量泡沫，加熱過程中，先用小火，待泡沫消失，樣品完全碳化后 改用大火，溶液顏色從褐色醬油色黃色黃綠色亮綠色藍(lán)綠色。溶液也從先前的渾濁到最后的澄清，蒸餾：加入混合指示劑后，吸收瓶的的溶液呈微紅色，蒸餾過程中逐漸變綠變藍(lán)，滴定：溶液有藍(lán)色變?yōu)樗{(lán)紫色。注意：加熱過程中要不斷搖晃燒瓶，以使反應(yīng)完全，若有剩余殘?jiān)?應(yīng)用水沖然后繼續(xù)加熱，用水沖洗的原因是，水的沸點(diǎn)低，極易被蒸發(fā)加熱時(shí)應(yīng)使凱氏燒瓶離電爐越遠(yuǎn)越好，加熱時(shí)會在瓶內(nèi)形成酸霧。酸霧在瓶中回轉(zhuǎn)，原離電爐的一側(cè)溫度較低，使得酸霧在接近瓶口時(shí)，就可流回到瓶中，不易溢出。蒸餾時(shí)，蒸汽發(fā)生要充分，均勻。中途不得?；饠鄽猓椎刮?，加堿量要夠，動(dòng)作要快。防止氨損失，加液用水封蒸餾時(shí)加液順序不能顛倒，應(yīng)為：吸收液樣品氫氧化鈉。冷凝管的插管應(yīng)該在吸收液液面之下蒸餾前的洗滌要冷卻，并將所有夾子打開，以使儀器內(nèi)外壓平衡，蒸餾最后的沖洗，內(nèi)壁：蒸餾10min后，使冷凝管下端脫離液面，再繼續(xù)蒸餾一分鐘，外壁：蒸餾結(jié)束后，用少樣蒸餾水沖洗冷凝管下端。消化中加試劑及樣品時(shí) 要放入燒杯底部，加熱時(shí)要不斷搖晃，要使消化完全，轉(zhuǎn)移也要完全滴定終點(diǎn)：鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液變?yōu)樗{(lán)紫色 分子生物學(xué)及其檢驗(yàn)部分什么是感受態(tài)細(xì)胞？轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中影響轉(zhuǎn)化效率的環(huán)節(jié)有哪些？ 受體細(xì)胞經(jīng)過特殊方式處理后，使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多種外源DNA的載體分子通過，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞理論依據(jù)：細(xì)菌處于0CaCl2溶液中，會膨脹成球狀，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生轉(zhuǎn)化變化，轉(zhuǎn)化混合物中的質(zhì)粒DNA 形成抗DNasse的羥基鈣磷酸復(fù)合物黏附于細(xì)胞表面成功篩選出陽性轉(zhuǎn)化子的條件？（質(zhì)粒、受體細(xì)菌、篩選環(huán)境）1、細(xì)菌生長狀態(tài)，注意生長狀態(tài)和寬度盡量使用對數(shù)生長期細(xì)胞2、所有操作均處于無菌條件和冰上進(jìn)行，所有器皿必須干凈3、經(jīng)氯化鈣處理的細(xì)胞，在低溫狀態(tài)下一定時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)化率 隨時(shí)間推移而增加 24h是最高值隨后下降4、化合物及無機(jī)離子的影響，在鈣離子基礎(chǔ)上聯(lián)合其他二價(jià)金屬離子可提高轉(zhuǎn)化率試述PCR技術(shù)的主要原理及PCR反應(yīng)體系的構(gòu)成。以及各體系作用。原理：根據(jù)DNA變性與復(fù)性的原理，在模板DNA、引物、dNTP、DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促反應(yīng) 變性-退火-擴(kuò)增反應(yīng)體系：標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系 寡核苷酸引物，DNA模板，Taq酶，dNTP及含有必需離子的緩沖溶液模板DNA 0.12 ug；引物各0.11.0 umol/L；4種dNTP混合物各200 umol/L；Taq DNA聚合酶2.5u；Mg2+1.5-2.0 mmol/L緩沖液：提供酶催化的離子環(huán)境。dNTP：提供DNA鏈延伸的原 料。Mg2+：激活DNA聚合酶。水。引物：結(jié)合模板，提供延伸的起點(diǎn)。模板：PCR擴(kuò)增的對象。Taq酶：DNA聚合酶什么是限制性核酸內(nèi)切酶？影響酶切效率的因素有哪些？限制性核酸內(nèi)切酶是可以識別DNA的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶。DNA的純度 DNA的甲基化程度 酶切消化反應(yīng)溫度 DNA的分子結(jié)構(gòu) 溶液中離子濃度及種類 緩沖液的PH值基因組DNA提取中，酚/氯仿、無水乙醇、70%乙醇的作用是什么？EDTA為二價(jià)金屬離子螯合劑，可抑制DNA酶的活性，同時(shí)還能降低細(xì)胞膜的穩(wěn)定性；SDS為陰離子去污劑，能引起細(xì)胞膜降解，乳化脂質(zhì)和蛋白質(zhì)并沉淀，同時(shí)還有降解DNA酶的作用； 無DNA酶的RNA酶，可有效水解RNA；蛋白酶K起水解蛋白質(zhì)的作用，可消化DNA酶、DNA上的蛋白質(zhì)，同時(shí)也有裂解細(xì)胞的作用。酚是很強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性劑，也可抑制DNA酶活性；氯仿能加速有機(jī)相和水相的分離；異戊醇則可減少在抽提過程中由于蛋白變性產(chǎn)生的大量氣泡。簡述瓊脂糖電泳的基本原理及其作用。原理：以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，凝膠內(nèi)部為微小的剛性小孔。在堿性溶液中，帶負(fù)電荷核酸向正極泳動(dòng)。不同核酸根據(jù)分子量，分子構(gòu)象實(shí)現(xiàn)分離作用：判斷擴(kuò)增片段的大小，回收擴(kuò)增片段瓊脂糖電泳分離核酸時(shí)核酸大小如何判斷？瓊脂糖凝膠就像是一個(gè)網(wǎng)篩一樣，里面有很多的孔，分子可以從孔中穿過去的。核酸分子有大有小，小的分子在凝膠中跑得比較快，大的分子就跑得比較慢，經(jīng)過一段時(shí)間的電泳之后，凝膠上就會出現(xiàn)位置不一的條帶。將條帶與已知分子大小marker相比較，就可以知道核酸分子的大小了。瓊脂糖電泳分離核酸的基本原理作用?簡述顯色過程中sybrgreen的作用及原理。原理：以瓊脂糖凝膠為支持