(電大復習)生物藥物分析(吉林大學自考)

1 藥物分析學 第一章 緒 論 一、 學習要點 1、掌握生物藥物的定義 2、掌握生物藥物檢驗工作的基本程序與方法 3、熟悉生物藥物的分類 4、熟悉藥品質量標準以及藥典有關規(guī)定 5、了解生物藥物分析的任務 二、名詞解釋 1、生物藥物：是利用生物體、生物組織或器官等成分，綜合應用多門學科的如生物學、生物化學等的原理和方法，特別是采用現(xiàn)代生物技術，進行加工、制造而形成的天然生物活性物質以及人工合成或半合成的天然物質類似物，用于預防、治療以及診斷疾病。 2、生化藥物：從動物、植物及微生物等生物體分離純化 得到的生化活性物質，或者用化學合成、微生物合成及現(xiàn)代生物技術制得的生命基本物質及其衍生物、降解物、大分子的結構修飾物等，以及來自生物體或構成生物體的一些基本成分。 3、生物技術藥物：用現(xiàn)代生物技術研制的藥物。 4、生物制品：一般指的是用微生物（包括細菌、噬菌體、立克次體、病毒等）、微生物代謝產(chǎn)物、原蟲、動物毒素、人或動物的血液或組織等直接加工制成，或用現(xiàn)代生物技術方法制成，作為預防、治療、診斷特定傳染病或其他有關疾病的免疫制劑，包括各種疫苗、抗血清（免疫血清）、抗毒素、類毒素、免疫制劑（如胸腺肽、免疫核酸等 ）、診斷試劑等。 5、藥典：記載著各種藥品的標準，是一個國家關于藥品標準的法典，是國家管理藥品生產(chǎn)與質量的依據(jù)，一般由國家衛(wèi)生執(zhí)行部門主持編纂、頒布實施。藥典和其他法令一樣具有約束力。 6、標準物質（標準品）：需要在進行測定的同時，用一已知效價的制品作為對照來校正試驗結果，這種對照品就是標準品。在國際上將標準品分為兩類：國際標準品和國際生物參考試劑。 國內分為，國家標準品和國家參考品。 7、藥物分析學科：一門研究與發(fā)展藥物質量控制的方法學科，是整個藥學科學領域中一個重要組成部分。藥物分析的基本任務是檢驗藥品質 量，保障人們用藥安全、合理、有效。 三、應掌握的知識點 1、生物藥物主要包括生化藥物、生物技術藥物和生物制品等。 2、在生物藥物的生產(chǎn)過程中要對各個環(huán)節(jié)嚴加控制，還要有嚴格的質量管理規(guī)范，以確保生物藥物的均一性、有效性、和穩(wěn)定性。 3、中國生物制品規(guī)程是我國生物制品的國家標準和技術法規(guī)。生物制品規(guī)程包括生產(chǎn)規(guī)程和檢定規(guī)程兩方面的內容。 4、藥品質量標準是藥品現(xiàn)代化生產(chǎn)和質量管理的重要組成部分，是藥品生產(chǎn)、供應、使用和監(jiān)督管理部門共同遵循的法定技術依據(jù)，也是藥品生產(chǎn)和臨床用藥水平的重要標志。 5、對藥品質 量控制的全過程起指導作用的法令性文件有 GLP、 GMP、 GSP、GCP 四個科學管理規(guī)范。 6、中國藥典的內容：凡例，正文，附錄，索引。 7、生物藥物檢驗的基本程序一般為取樣、鑒別、檢查、含量（效價）測定、寫出檢驗報告等。 8、國際上將標準品分為兩類：國際標準品和國際生物參考試劑。國內將標準物質也分為兩類：國家標準品和國家參考品。 9、藥物分析的基本任務是檢驗藥品質量，保障人們用藥安全、合理、有效。 10、生物制品一般指是用微生物（包括細菌，噬菌體，立克次氏體，病毒等），微生物代謝產(chǎn)物，原蟲，動物毒素，人或動物 的血液或組織等直接加工制成，或用現(xiàn)代生物技術方法制成，作為預防，治療。診斷特定傳染病或其他相關疾病的免疫制劑，包括各種疫苗，抗血清（免疫血清），抗毒素，類毒素，免疫制劑（如胸腺肽，免疫核酸等，診斷試劑等。如，乙肝疫苗，卡介苗，白喉類毒素，狂犬病免疫球蛋白，白蛋白，結核菌素等。 11、生物藥物的用途：（ 1）作為治療藥物（ 2）作為預防藥物（ 3）作為診斷藥物 四、重點與難點 1、生物藥物檢驗的基本程序： （ 1）藥物的取樣 （ 2）藥物的鑒別試驗 （ 3）藥物的雜質檢查 （ 4）藥物的安全性檢查 （ 5）藥物的含 量（效價）測定 （ 6）檢驗報告的書寫 2、生物藥物的性質： （ 1）在化學構成上，生物藥物十分接近于體內的正常生理物質，進入體內后也更易為機體所吸收利用和參與人體的正常代謝與調節(jié)。 （ 2）在藥理學上，生物藥物具有更高的生化機制合理性和特異治療的有效性。 （ 3）在治療上，生物藥物具有藥理活性高、針對性強、毒性低、副作用小、療效可靠及營養(yǎng)價值高等特點。 （ 4）生物藥物的有效成分在生物材料中濃度都很低，雜志的含量相對比較高。 （ 5）生物藥物常常是一些生物大分子，它們不僅分子量大，組成、結構復雜，而且具有 嚴格的空間構象，以維持其穩(wěn)定的生理功能。 （ 6）生物藥物對熱、酸、堿、重金屬及 pH 變化均比較敏感，各種理化因素的變化易對生物活性產(chǎn)生影響。 3、生物藥物分析與檢驗的特點： （ 1）需要進行相對分子質量的測定 （ 2）需檢查生物活性 （ 3）需做安全性檢查 （ 4）需做效價測定 （ 5）要用生化法確證結構 第二章 酶分析法 一、學習要點 1、掌握酶活力測定的原理、方法和藥物分析實例 2、掌握酶法分析的原理、檢測方法和藥物分析實例 3、熟悉酶活力測定中應注意的主要問題 4、了解酶及酶分析法在生物藥物分析 中的應用 二、名詞 1、酶活力： 指在一定條件下，酶所催化的反應速度。 2、酶反應速度：用單位時間內反應底物的減少或產(chǎn)物的增加來表示 3、酶的活性單位（國際單位為 U）：是指在 25下，以最適的底物濃度、最適的緩沖液離子強度以及最適的 pH 值諸條件下，每分鐘能轉化一個微摩爾底物的酶量定為一個活性單位。酶的比活性即定位一毫克酶的活性單位。 4、取樣測定法：是在酶反應開始后不同的時間，從反應系統(tǒng)中取出一定量的反應液，并用適當?shù)姆椒ㄍＶ蛊浞磻?，再根?jù)產(chǎn)物和底物在化學性質上的差別，選用適當?shù)臋z測方法進行定量分析，求得單 位時間內酶促反應變化量的方法。 5、酶偶聯(lián)測定法：用過量、高度專一的“偶聯(lián)工具酶”使被測酶反應能繼續(xù)進行到某一可直接、連續(xù)、簡便、準確測定階段的方法。 6、酶法分析：是一種以酶為分析工具或試劑的分析方法。分析的對象可以是酶的底物、輔酶活化劑甚至是酶的抑制劑。包括終點測定法和反應速度法。 7、酶活力測定：以酶作為分析對象，也就是根據(jù)需要對樣品進行酶含量或活力的測定。 三、應掌握的知識點 1、酶分析法包括酶活力測定法和酶法分析。 2、酶的反應速度可以用單位時間內反應底物的減少或產(chǎn)物的增加來表示，酶的反應速度愈快 所表示的酶活力愈高。 3、測定酶活力，可用物理法、化學法或酶分析法等方法。 4、酶的比活性定為一毫克酶的活性單位。 5、酶促反應的基本要求是：所有待測定的酶分子都應該能夠正常發(fā)揮它的作用。確定 酶促反應 反應條件時應考慮以下因素：底物， pH 值，溫度，輔助因子，空白和對照。 6、一般選用底物的濃度 S=100Km，因為在這種情況下反應速度可達最大速度的 99%。 7、一般而言，溫度變化 1，酶反應速度可能相差 5%左右。因此，試劑酶促反應中，溫度變動應控制在 +0.1以內。酶反應溫度通常選用 25、 30、 37。 8、酶活力的測定方法按取樣和檢測的方式有取樣測定法和連續(xù)測定法。 9、取樣測定法常用的檢測方法有紫外 -可見分光光度計法，熒光分析法等。 10、 酶分析法中 連續(xù)測定法常用的檢測方法有紫外 -可見分光光度計法，熒光分析法、旋光度法、酶偶聯(lián)測定法以及電化學測定法和放射化學法。 11、熒光分析法的原理是如果酶反應的底物與產(chǎn)物之一具有熒光，那么熒光變化的速度可代表酶反應速度。 12、酶的反應速度可以用單位時間內底物的減少或者產(chǎn)物的增加來表示，但以分析產(chǎn)物為好，因為產(chǎn)物從無到有，只要測定方法靈敏，準確度可以很高。 13、 酶反應進程曲線：在反應最初階段，底物或產(chǎn)物的變化量一般隨反應時間而線性增加，反應速度恒定；但是隨著反應時間延長，曲線會逐漸彎曲下來，斜率改變，反應速度下降。 14、真正能代表酶催化活性的是反應初始階段的速度，即反應初速度。 15、終點測定發(fā)一般采用：分光光度法，測壓量氣法，滴定法，同位素跟蹤測定法。 四、重點與難點 1、酶活力測定與酶法分析的異同 （ 1）酶法分析是以酶作為分析工具或分析試劑，用以測定樣品中一般化學方法難于檢測的物質，這些物質可以是酶的底物，也可以是酶的抑制劑或是酶的輔助因子； （ 2）酶活 力測定法是以酶作為分析對象，也就是根據(jù)需要對樣品進行酶含量或活力的測定。 這兩類酶分析從原理到操作等基本相同，但是酶法分析中，被檢測化合物應該是反應的限制因素，而在酶活力測定中，使用的底物應該過量。 2、酶促反應的條件 選擇反應條件的基本要求是：所有待測定的酶分子都應該能夠正常發(fā)揮它的作用。 確定反應條件時應考慮以下因素：（ 1）底物：一般選用底物的濃度 S=100Km，因為在這種情況下反應速度可達最大速度的 99%；（ 2） pH 值：氫離子濃度能對酶反應差生多種影響，酶反應通常借助緩沖系統(tǒng)來控制 pH 值；（ 3）溫 度：酶反應對溫度十分敏感，溫度變化 1，酶反應速度可能相差 5%左右。因此，試劑酶促反應中，溫度變動應控制在 +0.1以內。酶反應溫度通常選用 25、 30、 37。（ 4）輔助因子：有些酶需要金屬離子，有些酶則需要相應的輔助物質。（ 5）空白和對照：空白是指雜質反應和自發(fā)反應引起的變化量，空白可不加酶或不加底物，或二者都加但是酶需要預先經(jīng)過失效處理。對照是指用純酶或標準酶制劑測得的結果。 3、按取樣及檢測方法可將酶活力的測定方法分為取樣測定法和連續(xù)測定法： （ 1）取樣測定法：該方法中停止酶反應通常采用添加酶的 變性劑的方法，常用的檢測方法有紫外 -可見分光光度計法，熒光分析法等。 （ 2）連續(xù)測定法：紫外 -可見分光光度計法，是根據(jù)產(chǎn)物和底物在某一波長或波段上，有明顯特征吸收差別而建立起來的連續(xù)監(jiān)測方法；熒光分析法，原理是如果酶反應的底物與產(chǎn)物之一具有熒光，那么熒光變化的速度可代表酶反應速度；旋光度法，某些酶反應過程常伴隨著旋光變化，在沒有其他更好的方法可用時，可考慮用旋光度發(fā)；酶偶聯(lián)測定法，加入的偶聯(lián)工具酶應該高度純凈、專一而且 2 過量。 4、酶法分析中終點測定法原理、條件、種類 （ 1）原理：先借助酶反應使被測物質定 量地進行轉變，然后在轉化完成后，測定底物、產(chǎn)物或輔酶物質（第二底物）等的變化量，因此成為終點測定法。 （ 2）條件： 酶的底物特異性（專一性）； 反應的平衡，酶反應若平衡時分偏向進行方向，則可方便地用終點測定法檢測； 反應液中的酶量，要使酶反應在短時間內完成，只有使用對底物親和性很大的酶即 Km 要小，酶用量必須大才能達到此點。 反應產(chǎn)物抑制，如果產(chǎn)物對反應本身有抑制作用，則會妨礙反應進行，在這種情況下可采取將該產(chǎn)物出去或者和再生系統(tǒng)偶聯(lián)等辦法解決。 （ 3）種類： 單酶反應定量法：測定底物減少，產(chǎn)物增加和輔酶變化量。 指示酶反應偶聯(lián)的定量法：以脫氫酶為指示劑和以脫氫酶以外的酶作指示劑。 5、 D-葡萄糖的定量測定 2222 OHDOOHD G O D 葡萄糖醛酸葡萄糖DOHDHOH 2222 2過氧化物酶在葡萄糖氧化酶（ GOD）反應中，葡萄糖被氧化、同時形成 H2O2，如果再和過氧化物酶反應偶聯(lián)，可使還原型色素（ DH2）轉變?yōu)檠趸蜕?D，氧化型色素 D在 270 420nm 處有吸收值，因此可以借助分光光度法測定，以此進行葡萄糖的定量分析。 6、尿酸的定量測定 222222 OHCOOOH 尿囊素尿酸 尿酸酶 利用尿酸在 293nm 或 297nm 處具有的特征吸收性質，通過尿酸酶反應，根據(jù)它的吸收度的減少就可計算出尿酸量。 7、胃蛋白酶的活力測定 在實驗條件下，胃蛋白酶催化血紅蛋白水解生成不被三氯醋酸所沉淀的氨基酸，利用水解產(chǎn)物中芳香氨基酸如苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸有紫外吸收，用紫外分光光度法直接測定，并計算出本品的酶活力。每 1g 檢品中含蛋白酶活力不得少于3800 單位。 （ 1）對照品溶液的制備：精密稱取經(jīng) 105干燥至恒重的酪氨酸適量，加鹽酸溶液（取 1mol/L 鹽酸溶液 65mL， 加水至 1000mL）制成每 1mL 含 0.5mg 的溶液。 （ 2）供試品溶液的制備：取本品適量，精密稱定，用上述鹽酸溶液制成每 1mL約含 0.2 0.4 單位的溶液。 （ 3）測定法：取試管支，其中支各精密加入對照品溶液 1mL，另 3 支各精密加入供試品溶液 1mL，置（ 37 0.5）水浴中，保溫 5min，精密加入預熱至（ 37 0.5）的血紅蛋白試液 5mL，搖勻，并精密計時，在（ 37 0.5）水浴中反應 10min，立即精密加入 5%三氯醋酸溶液 5mL，搖勻，慮過，取續(xù)濾液備用。另取試管 2 支，各精密加入血紅蛋白試液 5mL，置（ 37 0.5）水浴中保溫 10min，再精密加入 5%三氯醋酸溶液 5mL，其中 1 支加供試品溶液 1mL，另 1 支加上述鹽酸溶液 1mL，搖勻，慮過，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品 的空白對照，采用紫外 -可見分光光度法，在 275nm的波長處測定吸收度，算出平均值 A 和SA,按下式計算： 1 8 1 . 1 910 n1g WA WAS S含蛋白酶活力（單位）每式中， WS 為 1mL 對照品溶液中含酪氨酸的量， g； W 為供試品取樣量， g； n為供試品的稀釋倍數(shù)； SA ， A 分別為對照品溶液及供試品溶液吸收度的平均值； 181.19 為酪氨酸的相對分子質量； 10 為反應時間， min。 在上述條件下，每分鐘能催化水解血紅蛋白生產(chǎn) 1 mol 酪氨酸的酶量，為一個蛋白酶活力單位。 8、酶法測定肝素 酶法測定肝素的原理是根據(jù)核糖核酸酶水解核糖核苷時，在 300nm 波長處吸收度下降的速率被肝素抑制的特點（即肝素能專一地抑制核糖核酸酶），用已知肝素對其抑制程度進行定量測 定，制得標準曲線，從而測得未知量的肝素含量。 此法簡單快捷，一次能測定多個樣品，特別適用于大批量樣品的測定工作，可以作為生產(chǎn)過程中的質量監(jiān)控。 具體方法為：取配成 5U/mL 的標準肝素溶液，按梯度吸取不同量分別加入試管中，每管加重蒸水至總體積為 2mL，再加核糖核酸溶液 核糖核酸 0.2g 溶于 100mL乙酸緩沖液（ 0.2mol/L， pH5.0） 1mL，測定前逐管加入湖塘核酸酶溶液（ 5mg 核糖核酸酶溶于 100mL 重蒸水） 1mL，混勻，立即測定。對照組以重蒸水代替肝素溶液同樣進行。待測樣品組以待測樣品液代替標準肝素 溶液進行測定。 取加有標準肝素溶液和試劑的各管，測定其在 300nm 波長處吸收值每下降 0.04單位所需時間（ t1），以及未含肝素組（對照）所需時間（ t），以 t1/ t為 Y 軸，肝素含 量為 X 軸，制得標準曲線，進而得到回歸方程（標準曲線使用的檢測范圍在 4U 活性以下）。根據(jù)待測樣品在相同條件下測得的所需時間（ t 測 ），可求出肝素的量。 第三章 免疫分析法 一、學習要點 1、掌握抗體、抗原的概念特性及應用 2、掌握免疫分析法的概念與方法 3、掌握放射免疫分析法、熒光免疫分析法、酶聯(lián)免疫分析法、克隆酶給予體免疫分析法、免疫擴散法的基本原理、操作過程和應用 4、熟悉免疫分析技術的實際操作步驟和在實踐中的應用 5、熟 悉半抗原和載體的選擇原則 二、名詞 1、免疫分析法：以特異性抗原 -抗體反應為基礎的分析方法 2、抗原：指能在機體中引起特異性免疫應答反應的物質。 3、全抗原：同時具有免疫原性和抗原特異性的物質。 4、半抗原：只能與特異抗體作用但不能引起機體免疫應答的簡單物質。 5、抗體：是機體經(jīng)抗原刺激由免疫活性細胞產(chǎn)生的一組免疫球蛋白，通常由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈組成。 6、免疫原：是人工將抗原制成能刺激機體引起體液及細胞免疫反應的物質。 7、單克隆抗體：建立在經(jīng)細胞融合而獲得的雜交瘤細胞基礎上的，針對某一特殊抗 原決定簇的抗體。 8、效價：又稱滴度，指某一物質與一定容量的另一物質產(chǎn)生反應所需要的量 9、 免疫擴散法：根據(jù)抗原和抗體在瓊脂介質中擴散的結果，對其性質進行分析的一種方法。這里瓊脂介質是指瓊脂凝膠 ，絕大多數(shù)的抗原抗體的相對分子量都在 20 萬以下，能夠在瓊脂凝膠中自由擴散，其擴散運動服從氣體自由擴散定律，在擴散過程中，凝膠中形成擴散物的濃度梯度，在抗原 /抗體最適比例處，形成肉眼可見的免疫沉淀；由于不同抗原物質擴散系數(shù)不同，擴散速度就不同，這樣就可以達到分離的目的。 10、克隆酶給予體免疫分析（ CEDIA）：是利用 重組 DNA 技術，合成B-galactosidase 的兩個獨立存在時無酶活性的蛋白質片段，但兩者結合時則顯示出酶活性的原理。 三、應掌握的知識點 1、通常物質的抗原性指免疫原性和抗原特異性。 2、大多藥物分子，相對分子量較小，通常被認為是半抗原。 3、半抗原的選擇：半抗原結構中最好含有芳香結構，選擇半抗原時應考慮抗原-抗體反應的微環(huán)境，合理地利用分子類似物間的交叉反應。 4、合成抗原通常以蛋白質為載體。 5、合成抗原的測定：定性測定方法包括光譜分析和熱分析；定量測定方法包括相對含量測定和絕對含量測定。 6、抗 體具有高度特異性，在免疫分析中 IgG 是最常用的抗體。 7、免疫分析中，常用到的兩類抗體為抗血清和單克隆抗體?？寡逵煽乖苯用庖邉游锏玫?，而單克隆抗體需將預先免疫過的小鼠細胞與體外培養(yǎng)的骨髓瘤細胞經(jīng)細胞融合技術產(chǎn)生雜交瘤細胞，再篩選而得。 8、抗血清的制備分為以下幾個步驟：免疫原的制備，動物免疫、放血、抗血清分離及抗血清分析鑒定。 9、常用的免疫原有水劑、福氏完全佐劑和福氏不完全佐劑。 10、免疫分析中用于制備抗血清的動物通常為家兔和羊，而家兔是首選的免疫動物。 11、通常利用合成抗原制備兔抗半抗原免疫血清 時常采用常量免疫法。 12、效價測定方法有雙向免疫擴散法、單向免疫擴散法、對流電泳法、被動血凝法和 ELISA 法。 13、對提純單克隆抗體的含量測定方法通常采用紫外吸收法。 14、均相免疫分析方法是基于競爭結合原理來測定體液中藥物濃度。 15、氯胺 T 法式目前最成熟采用最多的放射性標記法，主要用于對蛋白質、多肽激素和含碘氨基酸的標記。 16、分離結合或游離的放射性物質常用以下幾種方法：柱層析法和電泳法、吸附法、沉淀法、抗抗體法、微孔濾膜法、固相法。 17、用紫外光照射蛋白質，可誘導蛋白質產(chǎn)生熒光，色氨酸是產(chǎn)生熒 光的主要成分。 18、經(jīng)典的酶聯(lián)免疫分析法實驗步驟可概括為包被、洗滌、與特異性抗體反應、與酶聯(lián)抗抗體反應、顯色和測定。 19、 ELISA 實驗技術主要包括直接法和夾心法兩種。 20、 ELISA 使用的微孔板通常為聚苯乙烯板，它和蛋白類抗原有較強的相互作用。 21、半抗原通常以半抗原 -載體結合物的形式包被。 22、免疫擴散包括單向簡單擴散、簡單輻射擴散、單向雙擴散和兩向雙擴散。 23、 四、重點與難點 1、 免疫分析法的應用主要集中在以下幾個方面：（ 1）在實驗藥物動力學和臨床藥物學中測定生物利用度和藥物代謝動力學參 數(shù)等生物藥劑學中的重要數(shù)據(jù)，以便了解藥物在體內的吸收、分解、代謝和排泄的情況；（ 2）在藥物的臨床檢測中，對治療指數(shù)小、超過安全劑量易發(fā)生嚴重不良反應或最佳治療濃度和毒性反應濃度有交叉的藥物的血藥濃度進行檢測； (3)在藥物生產(chǎn)中從發(fā)酵液或細胞培養(yǎng)液中快速測定有效成分的含量，以實現(xiàn)對生產(chǎn)過程的在線監(jiān)測（ 4）對藥品中是否存在特定的數(shù)量有害雜質進行評價。 2、 免疫分析法的定義及種類 免疫分析法是以特異性抗原 -抗體反應為基礎的分析方法。 基于競爭結合原理的均相免疫分析法有以下幾種：（ 1）放射免疫分析法 RIA，是最早建 立的經(jīng)典免疫分析法，反射免疫分析中常用的標記物采用最多的是 125I標記物和氚標記物。分離結合或游離的放射性物質進而進行測定是放射免疫分析的關鍵。（ 2）熒光免疫分析法 FIA：包括熒光淬滅法，熒光增強法，熒光偏振法，時間分辨熒光免疫分析法等。（ 3）克隆酶給予體免疫分析法：是利用重組 DNA 技術，合成 B-galactosidase 的兩個獨立存在時無酶活性的蛋白質片段，但兩者結合時則顯示出酶活性的原理。 液 -固免疫分析體系：利用各種理化方法，實現(xiàn)抗原或抗體與不溶性介質如聚苯乙烯微孔板、各類凝膠載體、膜的連接，并利用高 靈敏的檢測手段來測定抗原 -抗體反應，進而實現(xiàn)對抗體或抗原的分析。主要有酶聯(lián)免疫分析法。 3 3、抗體的效價及測定方法 與一定的抗原能發(fā)生反應的抗體的最大稀釋度。 常用的測定方法包括免疫擴散法、間接血凝法和 ELISA。 4、酶聯(lián)免疫分析法的基本原理和方法步驟 基本原理： ELISA 是一種固相免疫測定技術，它先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。測定時，將待檢樣本和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附抗體或抗原發(fā)生反應，后加入酶標抗體與免疫復合物結合，用洗滌的方法分離抗原抗體復合物和游離的未結 合成分，最后加入酶反應底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度（ A）值的發(fā)小進行定性或定量分析的方法。 （ 1）雙抗體夾心法：首先，將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；其次，加受檢標本，形成固相抗原復合物；再次，加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合；最后，加底物，根據(jù)顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。 （ 2）間接法：首先，將特異性抗原與固相載體連接形成固相抗原；其次，加稀釋的受檢血清；再次，加酶標抗抗體；最后加底物顯色。 （ 3）競爭法：首先，用已知特異性抗體寶貝固相載體；其次測 定管加待測抗原和一定量的酶標抗原，經(jīng)過溫育，使二者與固相抗體結合，對照管只加一定量酶標抗原與固相抗體 直 接結合；最后加底物顯色。 5、蛇毒的酶聯(lián)免疫測定法 蛇毒是從各種毒蛇蛇頭毒腺 (相當于唾液腺 )中分泌的一類物質，其成分比較復雜，蛋白質約占干重的 90%，約含 20 30 種蛋白質組分，其中包括 5 15 種酶、3 12 種非酶活性蛋白質或多肽，例如神經(jīng)毒素、膜活性肽、舒緩激肽增強肽、肌肉毒素、出血因子等。利用酶聯(lián)免疫測定法測定蛇毒的方法步驟如下。 （ 1）方法：雙抗夾體心型 ELISA，聚苯乙烯微量反應板法。 （ 2）原 理：固相的抗蛇毒抗體和蛇毒、酶標記的抗蛇毒抗體依次反應形成結合物，最后使底物顯色。 （ 3）材料： 蛇毒精制品 兔抗蛇毒血清 堿性磷酸酯酶 戊二醛 0.05mol/LNa2CO3-NaHCO3(pH9.6)緩沖液 0.01mol/LPBS-0.05%吐溫 20（ pH7.4）（ PBS-吐溫） 底物緩沖液（ pH9.8）： 0.05mol/L；碳酸鹽緩沖液內含 10-3mol/LMgCl2、1mg/mL4-硝基酚磷酸鹽 待測血清標本、正常人血清 （ 4）操作步驟 按戊二醛一 步法制得堿性磷酸酯酶和兔抗蛇毒抗血清的結合物 兔抗蛇毒抗血清用 0.05mol/L 碳酸鹽緩沖液（ pH9.6）以 1:300 稀釋，在聚苯乙烯微量反應 板的每個孔內加入 0.3mL。 37 孵育 5h 后。用 PBS-吐溫洗滌三次，每次 3min。 蛇毒精制品用健康人血清以 1 1000ng/mL 濃度分別稀釋后，再用 PBS-吐溫以 1:200 稀釋；待測的血清同樣用 PBS-吐溫以 1： 200 稀釋。 已包被的孔內加入上述樣品或血清標本 0.3mL， 4 過夜后同上洗滌。 酶結合物用 PBS-吐溫以 1:100 稀釋，每孔內加入 0.3mL， 37 孵育 3h 后，同上洗滌。 每孔內加入底物溶液 0.3mL，室溫下靜止 30min 后用 3mol/LNaOH 溶液 50L終止反應。 判定結果可用目測法或分 光光度計測定吸光度值（ A400nm）。 根據(jù)蛇毒 精制品的測定結果可繪制成劑量 -反應曲線，對待測血清中的蛇毒加以定量。 6、載體的選擇原則 （ 1）實驗設計中應考慮載體對檢測系統(tǒng)的影響。在免疫過程中，合成抗原免疫動物，不僅可以產(chǎn)生抗半抗原抗體，也會產(chǎn)生大量的抗載體蛋白抗體。因此選擇載體蛋白是應考慮載體對檢測系統(tǒng)的影響。這通常包括兩方面 ：其一為選擇的載體應和檢驗體系不發(fā)生交叉反應。 其二，為在進行酶聯(lián)免疫吸附測定（ ELISA）等免疫分析時，常將包被合成 抗原用作競爭抗原或作為陽性對照，此時用于包被的合成抗原的載體應和用于免疫動物產(chǎn)生抗體的合成抗原的載體蛋白不同。（ 2）免疫過程中應考慮載體相應的影響。在人工抗原誘導的免疫反應中，抗體的特異性依賴于半抗原分子結構中的免疫決定區(qū)，但整個載體蛋白大分子對于抗體反應的性質和量也有影響。常見的載體有牛血清百蛋白（），卵清蛋白（），破傷風類毒素（）和鑰孔蛋白（ KLH）。 第四章 電泳分析法 一、學習要點 1、掌握電泳分析的概念及基本原理 2、掌握各類重要電泳分析技術的基本操作 3、掌握影響電泳分離的因素 4、了解電泳的分類和發(fā)展 二、名詞 1、電泳法：是指帶電荷的供試品在惰性支持介質中，在電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計算其百分含量的方法。 2、電滲現(xiàn)象：液體在電場中，對于固體支持介質的相對移動 。 3、免疫電泳技術：將瓊脂電泳與免疫擴散結合起來，也就是說利用電場作用下帶電蛋白質在瓊脂凝膠中具有不同的遷移率，以及相同的蛋白質具有完整的抗原性的特點，用于分析抗原或抗體性質的一種技術。 三、應掌握的知識點 1、電泳法可分為三類： 自由界面電泳、區(qū)帶電泳、高效毛細管電泳。其中區(qū)帶電泳是目前應用最廣泛的電泳技術。 2、影響遷移率的主要因素有：帶電顆粒的性質；電場強度；緩沖液的性質；電滲作用；溶液的溫度和黏度；分子篩效應。 3、電泳按支持介質不同可分為紙電泳，醋酸纖維素薄膜電泳，瓊脂糖凝膠電泳；，聚丙烯酰胺凝膠電泳， SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。 4、毛細管電泳 CE 也稱高效毛細管電泳 HPCE，是近十幾年迅速發(fā)展起來的一種新的分離方法。 5、免疫電泳包括簡單免疫電泳、對流免疫電泳、“火箭”免疫電泳和雙向免疫電泳。 四、重點與難點 1、電泳分析 法的基本原理 不同帶電顆粒，因其所帶電荷性質和多少以及形狀和大小等差異，使其在同一電場強度、相同的支持介質和緩沖液的條件下，各自的泳動速度不同，從而使各種帶電顆粒如蛋白質、核酸等生物大分子得以分離。 2、影響遷移率的因素 帶電顆粒的性質包括大小、形狀及所帶電荷量；緩沖液的性質包括 pH 值和離子強度；電場強度，保持穩(wěn)定的電場強度是電泳成敗的重要條件；溶液的溫度和黏度；電滲作用；分子篩效應。 3、電泳分析法的分類 （ 1）按支持介質不同可分為紙電泳，醋酸纖維素薄膜電泳，瓊脂糖凝膠電泳；，聚丙烯酰胺凝膠電泳， SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。 （ 2）按用途不同可分為：分析電泳，制備電泳，定量免疫電泳，連續(xù)制備電泳。 4、 HPCE 較 HPLC 的優(yōu)點 （ 1） HPCE 較 HPLC 分析時間短； （ 2） HPCE 較 HPLC 柱效高很多； （ 3） HPCE 較 HPLC 流動相用量少很多； （ 4） HPCE 可做微量制備。 二者都是高效的分離技術，也都有多種分離模式，儀器操作均可自動化。但是 HPCE分離速度更快，使用樣品量更少（ pg 量級）效率更高，可分離的范圍更廣（從離子到大分子化合物），但是維持費用則更低。因此具有更明顯的優(yōu)勢。但是， HPCE目前只能實現(xiàn)微量制備，不能取代 HPLC。 5、瓊脂糖凝膠電泳法對肝素鈉的鑒別 肝素鈉是從豬或牛的腸粘膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的鈉鹽，屬黏多糖類物質，具有延長血凝時間的作用。利用電泳法可以對肝素鈉進行鑒別。 （ 1）溶液的制備及制膠 醋酸 -鋰鹽緩沖液（ pH3.0）。取冰醋酸 50mL，加水 800mL 混勻后，用氫氧化鋰調節(jié) pH 值至 3.0，再加水至 1000mL。 苯甲胺藍溶液。取苯甲胺藍 0.1g，加水 100mL 使溶解。 制膠。取瓊脂糖約 0.2g，加水 10mL，置水浴鍋中加熱使溶脹完全，加溫熱的醋酸 -鋰鹽緩沖液（ pH3.0） 10mL，混勻，趁熱將膠液涂布與大小適宜（ 2.5cm 7.5cm或 4cm 9cm）的玻板上，厚度約 3mm，靜置，待凝膠結成無氣泡的均勻薄層，即得。 （ 2）供試品和對照品溶液的制備：取本品與肝素標準品，分別加水制成每 1mL中含 2.5mg 的溶液即得 （ 3）電泳：在電泳槽內加入醋酸 -鋰鹽緩沖液（ pH3.0），將凝膠板置于電泳槽架上，經(jīng)濾紙橋浸入緩沖液。于凝膠板負極端分別點樣 1mL，立即接通電源，在電壓梯度約 30V/cm、電流強度 1 2mA/cm 的條件下，電泳約 20min，立即關閉電源。取下凝膠板，用甲苯胺藍溶液染色，用水洗去多余的染色液至背景無色為止。 （ 4）結果判斷：供試品和標準品所顯斑點的遷移距離之比應為 0.9 1.1。 第五章 高效液相色譜法 一、學習要點 1、掌握 HPLC 的基本理論 2、掌握 HPLC 的常用定性方法和定量方法及其優(yōu)缺點 3、熟悉 HPLC 的基本組成部件和工作流程 4、熟悉 HPLC 的固定相、流動相及其選擇 5、了解 HPLC 的發(fā)展過程和 HPLC 的優(yōu)點及適用范圍 6、了解 HPLC 的分類 7、了解 HPLC 的應用 二、名詞 1、液相色譜法：以液體為流動相的色譜法。 2、經(jīng)典液相色譜法：用常壓輸送流動相的方法，這種色譜法的柱效能低、分離周期長。 3、高效液相色譜法（ HPLC）：是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上發(fā)展起來的，用高壓輸送流動相，又稱高壓液 相色譜法或者高速液相色譜法。 4、色譜圖：色譜儀以電信號強度對時間做圖所繪制的曲線。 5、峰高：色譜峰頂?shù)交€的垂直距離。 6、峰寬：峰兩側拐點處所做的兩條切線與基線的兩個交點間的距離。 7、峰面積：峰和峰底所包圍的面積。峰面積或峰高是定量分析的主要依據(jù)。 8、保留時間：樣品通過色譜柱所需的時間，即從進樣開始到柱后出現(xiàn)組分濃度極大值所需的時間。 9、保留體積：從進樣開始到柱后被測組分出現(xiàn)濃度最大值時流出溶劑的總體積。 10、分離度：表示相鄰兩峰的分離程度。 三、應掌握的知識點 1、 HPLC 具有分離效能高、選 擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快等優(yōu)點。 2、高效液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。 4 3、根據(jù)分離機制不同， HPLC 可分為化學鍵合色譜法、液 -固吸附色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法、空間排阻色譜法，液 -液分配色譜，親和色譜等。 4、 HPLC 利用純物質對照法來進行定性。常用的定量方法有內標法、外標法、主要成分自身對照法、面積歸一化法等。 5、 HPLC 廣泛應用于生物藥物的鑒別、檢查和含量測定。 6、色譜柱參數(shù)主要有：相平衡參數(shù)，柱選擇參數(shù)和柱效參數(shù)（包括理論塔板數(shù)和理論塔板 高） 7、要獲得較好的色譜分離有兩個途徑，一是最大峰間的距離要大，二是色譜峰要窄。 8、通常用理論塔板數(shù)來定量地表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。如果峰形對稱并符合高斯分布，理論塔板數(shù)可用峰寬和保留時間來表示： 22 16 wtRtRn 為標準偏差； w 為峰寬。 也可用半高峰寬（ Wh/2）和保留時間的關系來表示： 22/54.5 hWtRn9、理論塔板數(shù)與柱長成正比，柱子越長， n 值越高。用 n 表示理論塔板數(shù)時應注明柱長，如果未注明，則表示柱長為 1m 時的理 論塔板數(shù)。 10、分離度越長，色譜峰分離越好，但并非要求其值很大，二是爭取在最短的時間內獲得最佳分離效果。如果得到的是高斯曲線，分離度 R=1.5（ 6 的峰間距離）對于定量分析就足夠了。 11、高效液相色譜法可以用于定性分析藥物，比如用于藥物的鑒別和檢查，也可以用于定量分析藥物。 12、高效液相建立實驗方法的時候，首先需要考慮，樣品的性質；色譜分離的類型；溶劑的選擇；檢測器的選擇。 13、溶劑的處理主要有溶劑的純化，溶劑的脫氣，緩沖液的防腐。 14、 HPLC 操作過程中經(jīng)常會遇到問題，比如無柱后流出液或無柱壓， 可能由于溶劑的管路有滲漏；如果出現(xiàn)平頭峰，可能會是柱子過載或檢測器過載；如果柱壓過高，有可能樣品或溶劑組分有殘留；檢測器具有低背景噪音，可能參比池臟了或有其外來物等等。 四、重點與難點 1、 HPLC 的定義及特點 HPLC 是一種以高壓輸出的液體為流動相的色譜技術。具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快等優(yōu)點。 2、常用的化學鍵合相的種類及在液相色譜法中的應用 常用的化學鍵合相有十八烷基硅烷，辛烷基，氨基及氰基等。 化學鍵合相廣泛應用于正相與反相色譜法，離子交換色譜法，手性色譜法及親和色譜法等。 3、 HPLC 對流動相的要求 流動相一般采用分析純試劑，必要時進一步純化；避免使用引起柱效損失或保留特性變化的溶劑；對試樣要有適宜的溶解度；溶劑的粘度要??；易與檢測器相匹配。 4、正相色譜與反相色譜的定義及適用分離的組分 最早， 液 -液色譜有正相和反相之分 ，目前已被正相鍵合色譜法和反相鍵合色譜法所代替， 如果采用極性固定相和相對非極性流動相，就稱為正相；如果采用相對非極性固定相和極性流動相，則稱為反相。 所以正相色譜一般可用于分離極性化合物 ， 反相色譜一般可用于分離非極性或弱極性化合物。 5、高效液相色譜儀的組成及主 要部件 組成主要為高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。 主要部件包括儲液罐，攪拌超聲脫氣器，梯度淋洗裝置，高壓輸液泵，流動相流量顯示，柱前壓力表，輸液泵泵頭，過濾器，阻尼器，六通進樣閥，保護柱，色譜柱，檢測器，記錄儀，回收廢液罐。 6、利用反相高效液相色譜法測定生長抑素的含量 （ 1）色譜條件：色譜柱規(guī)格為 Ominispher C18 柱（ 250mm 46mm， 5m，美國Varian 公司）。流動相 A 液： 含 0.1%三氟乙酸的水溶液；流動相 B 液：含 0.1%三氟乙酸的乙腈溶液；采用梯度洗脫，洗脫程序：流動相 A 與流動相 B 比列在 2min維持 100:0，然后， 20min 內由 100:0 調至 65:35，流速 1mL/min；檢測波長 215nm，注溫為室溫；進樣量 20L。理論塔板數(shù)按生長抑素峰計算大于 20000，樣品色譜圖如圖（ a）所示。 （ 2）樣品含量測定：精密稱取合成的生長抑素原料約為 10mg，置 50mL 量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得貯備液。再吸取 4mL 置 10mL 量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，取 20L 進樣測定，記錄峰面積。 第六章 生物檢定法 一、學習要點 1、掌握生物檢定法的概念、特點 2、掌握效價檢定的基本概念，生物檢定的常用方法 3、掌握抗生素的微生物檢定法 4、熟悉對比檢定的原理與計算 5、了解實驗設計和統(tǒng)計分析 6、了解生物檢定的應用范圍 二、名詞 1、生物檢定法：利用藥物對生物體（整體動物、離體組織、微生物等）的作用以測定其效價或生物活性的一種方法。 2、質反應：當一定劑量的藥物注入動物體內后，觀察某一反應或反映的某一特定程度出現(xiàn)與否，只有出現(xiàn)與不出現(xiàn)兩種情況，故不能用量來表示個體的反 應程度，只能用一組動物中出現(xiàn)正或負反應的百分率來表示，這類反應成為質反應。 3、量反應：藥物對生物體所引起的反應隨著藥物劑量的增加產(chǎn)生的量變。 4、瓊脂擴散法：也稱管碟法，是利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內的擴散作用，采用量反應平行線原理的設計，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。 5、抗生素微生物檢定法：利用抗生素在低微濃度下選擇性地抑制或殺死微生物的特點，以抗生素的抗菌活性為指標，來衡量抗生素中的有效成分效力的方法。 三、應掌握的知識點 1、生物檢定的應用范圍主要用 于藥物的效價測定、微量生理活性物質的測定、中藥質量的控制、某些有害雜質的限度檢查等。 2、生物反應基本上可分為質反應和量反應，質反應是特殊的量反應。 3、生物檢定統(tǒng)計方法包括質反應的直接測定法和量反應的平行線測定法。 4、微生物檢定法測定抗生素效價一般可分為稀釋法、濁度法和瓊脂擴散法三類。其中濁度發(fā)和瓊脂擴散法被列為抗生素微生物檢定的國際通用方法。我國一直將管碟法作為微生物檢定的經(jīng)典方法。 5、生物反應是生物檢定的基礎，被測物特有的生物學作用都可作為生物法分析的基礎。 6、由于抗生素多為結構復雜的多組分物質 ，異構體多，且不穩(wěn)定，容易產(chǎn)生降解雜質，故各國藥典均以微生物檢定法為主要含量測定法。 7、生物制品的效力，從實驗室檢定來講，一是指制品中的有效成分的含量水平，二是指制品在機體中建立自動免疫或被動免疫后所引起的抗感染作用的能力。 四、重點與難點 1、生物檢定法的定義與常用的生物檢定方法 生物檢定法是利用藥物對生物體（整體動物、離體組織、微生物等）的作用以測定其效價或生物活性的一種方法。 常用的生物檢定法有：胰島素生物檢定法，肝素生物檢定法，抗生素的微生物檢定法。 2、微生物檢定法測定抗生素常用方法及原理 方法 主要有稀釋法、比濁法和擴散法，其中擴散法中的管碟法應用最為廣泛。 （ 1）稀釋法是將等量的試驗菌菌液加入到含有不同濃度抗生素的液體培養(yǎng)基中，觀察液體培養(yǎng)基中有無細菌生長，多得的結果是一種范圍而不是絕對值。 （ 2）比濁法是將一定量的抗生素加入至培養(yǎng)基中，混勻后，短期培養(yǎng)，培養(yǎng)基變渾濁，通過測定其透光率可知道細菌的生長情況。 （ 3）管碟法式利用抗生素在攤布特定試驗菌的固體培養(yǎng)基內呈球面形擴散，形成含一定濃度抗生素球形區(qū)，抑制了試驗菌的繁殖而呈現(xiàn)出透明的抑菌圈。 3、管碟法測定抗生素效價的影響因素 實驗菌種， 培養(yǎng)基，雙碟的制備，雙碟的培養(yǎng)溫度和時間，抗生素污染，標準品。 4、生物檢定法在生物藥物分析中的應用 生物檢定主要用于藥物的效價測定、微量生理活性物質的測定、中藥質量的控制、某些有害雜質的限度檢查等。 5、生物制品的效力檢定方法可分為： （ 1） 動物保護力試驗 （ 2）活菌數(shù)和活病毒滴度測定 （ 3）類毒素和抗毒素的單位測定 （ 4）血清學試驗 （ 5）其他相關效力的檢定與評價 6、生物檢定效價測定中劑量與反應的關系 生物檢定是利用藥物不同劑量引起生物體反應程度的變化進行藥物效價測定的，要計算效價，首先要 研究劑量與反應之間的關系。 在生物鑒定中，劑量與反應中一般都是曲線關系，可通過各種坐標轉換的方法，使劑量與反應間呈直線關系。最便于處理和應用。 生物反應基本上可分為以下兩種類型，即 質反應和量反應。 （ 1）質反應，當一定劑量的藥物注入動物體內后，觀察某一反應或反應的某一特定程度出現(xiàn)與否，例如死或不死，驚厥或不驚厥，只有出現(xiàn)與不出現(xiàn)兩種情況，故不能用量來表示個體的反應程度，只能用一組動物中出現(xiàn)正（或負）反應的百分率來表示，如死亡率、驚厥率，這類反應稱質反應。 在質反應中，將動物分組，分別給以不同劑量，通過調節(jié)劑 量，是最大劑量組接近但不全部產(chǎn)生陽性反應，最小劑量組接近但不全部產(chǎn)生陰性反應，則各組陽性反應動物的百分率將隨劑量的增加而遞升，劑量與反應率之間的關系是一條長尾的“肩斜”形曲線，如將劑量轉換為對數(shù)，反應率轉換為適當?shù)暮瘮?shù)后則呈直線關系，常見的轉換方法有概率單位 等。 （ 2）量反應，藥物對生物體所引起的反應隨著藥物劑量的增加產(chǎn)生的量變可以測量者稱為量反應。例如血壓的變化值，血糖濃度，組織器官重量的增減，抑菌圈直徑的大小等。時反應雖有某些特殊性，但基本上仍屬于量反應，它是觀察某一反應或反應的某種程度出現(xiàn)所需的時間， 例如血液的凝結時間、動物生存的時間等。 在一定劑量范圍內，很多量反應中反應與劑量的關系是一種先銳后鈍 的類似對數(shù)曲線，此時將劑量轉換成對數(shù)劑量，即可成一條直線，屬于這一類的有抗生素效價測定中藥濃度與抑菌圈的直徑、催產(chǎn)素與大鼠離體子宮的收縮高度等。 但大部分時反應中，劑量與反應呈現(xiàn)先銳的曲線，將劑量轉換為對數(shù)，反應值亦可以轉換為對數(shù)，則二者呈直線關系，屬于這一類型的有肝素濃度與體外血凝時間，凝血因子 VIII 與體外促凝時間。 通常利用對數(shù)進行坐標轉換已能解決大部分曲線的直線化問題，其他方法還有將 5 反應值轉為平方根， 立方根或倒數(shù)等。 第七章 生物藥物的雜質與安全性檢查 一、學習要點 1、掌握一般雜質檢查的原理、方法、計算，特殊雜質檢查方法的類型、特點以及藥物安全性檢查的項目和方法。 2、掌握生物安全性檢查的主要方法 3、熟悉雜質檢查方法以及一般雜質檢查和特殊雜質檢查方法的區(qū)別 4、了解雜質的概念、來源、分類及限量的制定 二、名詞 1、雜質：任何影響藥物純度的物質均稱為雜質。 2、一般雜質：指在自然界分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等。 3、特殊雜質 ：指在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質。 4、信號雜質：指非毒性雜質 ,由于具有和供試品類似的結構或官能團，而在檢測時也具有同樣的信號，干擾供試品的檢測的物質 。 5、雜質限量：指藥物中所含雜質的最大允許量。 6、重金屬：指在實驗條件下能與顯色劑作用顯色的金屬雜質，一般包括銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、砷、銻、錫、鋅、鈷、鎳等。 7、灼熾殘渣：藥物（多為有機藥物）經(jīng)高溫加熱分解或揮發(fā)后殘留下的不揮發(fā)物質（多數(shù)為金屬氧化物、氯化物、碳酸鹽、磷酸鹽、硅酸鹽）。 8、干燥失重：指藥物在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后，所減少的重量 ，主要指水分，也包括其他揮發(fā)性物質如乙醇等。 9、熱原：是指在藥品中能夠引起人及動物的體溫異常升高的致熱性物質，目前一般認為熱原反應主要是由于細菌內毒素引起的。 三、應掌握的知識點 1、雜質檢查是控制藥物雜質，確保安全、有效用藥，保證藥品質量的重要措施。 2、藥物中的雜質是藥物純度的一個重要方面，所以藥物的雜質檢查又叫純度檢查。 3、雜質會由下列各種情況引入藥品中： （ 1）在合成藥物生產(chǎn)過程中，未反應完全的原料、反應的中間體和副產(chǎn)物，在精制時未能完全除去，就會成為產(chǎn)品中的雜質。 （ 2）從動植物原料中提取 分離藥物時，由于原料中常常含有與藥物結構、性質相近的物質，在提取過程中，分離不完全，便可能引入產(chǎn)品中。如由哺乳動物睪丸中提取得到的玻璃酸梅，是一種能水解玻璃粘多糖的酶，若提取不周，易把睪丸中的另一組分酪氨酸引入。 （ 3）在藥物的生產(chǎn)過程中，還常加入試劑、溶劑等，如不能完全除去，也會使產(chǎn)品中存在有關雜質。如使用酸性或堿性試