DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基及其改良品種.doc

DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基及其改良品種 DMEM由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，各成份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）。細(xì)胞生長快。附著稍差的腫瘤細(xì)胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好，常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。 改良DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM（HED）細(xì)胞培養(yǎng)基 DMEM（HED）細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)CHO細(xì)胞生產(chǎn)乙肝疫苗，具有較強(qiáng)細(xì)胞維持能力，可增加收液次數(shù)，有效提高蛋白表達(dá)率。 生產(chǎn)和試驗(yàn)研究證明，DMEM（HED）細(xì)胞培養(yǎng)基在細(xì)胞生長和病毒分泌方面均優(yōu)于使用DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。 a) 使用DMEM（HED）細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞貼壁和長滿單層時(shí)間明顯快于傳統(tǒng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，維持2個(gè)月細(xì)胞未出現(xiàn)脫落現(xiàn)象。 使用DMEM（HED）細(xì)胞培養(yǎng)基，在接種后第2天， 80細(xì)胞已伸展并開始分裂增殖，第3天已長成較密單層，細(xì)胞貼壁均勻，形態(tài)清晰，呈多邊形和梭形，細(xì)胞間略有空隙，細(xì)胞數(shù)為7.5 x 106個(gè)ml。在此后轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的60 d內(nèi)細(xì)胞數(shù)保持穩(wěn)定，無明顯增加和減少，無脫落，無明顯形態(tài)變化，培養(yǎng)液中HBsAg滴度穩(wěn)定在1：1281：512之間。 而使用傳統(tǒng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，只有30和40的細(xì)胞伸展，至第4天才長成較密單層，小方瓶與雙層轉(zhuǎn)瓶結(jié)果相同。至30 d 時(shí)已長成較厚的復(fù)層，并開始大片脫落，細(xì)胞數(shù)明顯減少，HBsAg滴度降低，最低降到1：32 。此后細(xì)胞開始重新貼壁、增殖，至45 d左右部分細(xì)胞長成單層，一部分細(xì)胞因脫落，至60 d時(shí)仍未能長滿轉(zhuǎn)瓶。優(yōu)點(diǎn) DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基的成分粉末型（A）粉末型（H）粉末型(L) 配制方法 將一袋培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器.加 注射用水(水溫2030)到47.5升,輕微攪拌溶解. 加入185克碳酸氫鈉. 輕微攪拌溶解,加注射用水至50升. 用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol / L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值. 用0.