高效液相色譜法習(xí)題答案.doc

高效液相色譜法思考題和習(xí)題1 簡(jiǎn)述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點(diǎn)。相同點(diǎn)：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線(xiàn)檢測(cè) 不同點(diǎn)： 分析對(duì)象及范圍流動(dòng)相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，占有機(jī)物的20%流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點(diǎn)、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機(jī)物的80%流動(dòng)相為液體或各種液體的混合。它除了起運(yùn)載作用外，還可通過(guò)溶劑來(lái)控制和改進(jìn)分離。室溫、高壓下進(jìn)行2離子色譜法、反相離子對(duì)色譜法與離子抑制色譜法的原理及應(yīng)用范圍有何區(qū)別？離子色譜法(Ion Chromatography) ：用離子交換樹(shù)脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。離子色譜法是溶液中陰離子分析的最佳方法，也可用于陽(yáng)離子分析。反相離子對(duì)色譜法(IPC或PIC) ：反相色譜中，在極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑，使被測(cè)組分與其中的反離子形成中性離子對(duì)，增加k和tR，以改善分離。適用于較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿。反相離子抑制色譜：在反相色譜中，通過(guò)加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值，抑制組分解離，增加其k和tR，以達(dá)到改善分離的目的。適用于極弱酸堿物質(zhì)（pH=37弱酸；pH=78弱堿；兩性化合物）3速率理論方程式在HPLC中與在GC中有何異同？如何指導(dǎo)HPLC實(shí)驗(yàn)條件的選擇？解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。在高效液相色譜中，對(duì)液液分配色譜，Van Deemter方程的完整表達(dá)形式為由此，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度流動(dòng)相，流速不宜過(guò)快；柱溫適當(dāng)。4試討論影響HPLC分離度的各種因素，如何提高分離度？(1) 色譜填充性能液相色譜柱分離性能的優(yōu)劣，是由固定相粒度、柱長(zhǎng)、由柱內(nèi)徑和填充狀況決定的柱壓降這三個(gè)參數(shù)度決定的。這三個(gè)參數(shù)度也決定了樣品組分的保留時(shí)間，保留時(shí)間不僅與色譜過(guò)程的熱力學(xué)因素k有關(guān)，還直接與決定柱效與分離度的柱性能參數(shù)及流動(dòng)相的黏度有關(guān)，這些參數(shù)都是影響色譜分離過(guò)程動(dòng)力學(xué)的重要因素。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般都是購(gòu)買(mǎi)商品柱，很少自行制備。(2) 流動(dòng)相及流動(dòng)相的極性液相色譜中，改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接因素。液相色譜不可能通過(guò)增加柱溫來(lái)改善傳質(zhì)。因此大多是恒溫分析。流動(dòng)相選擇在液相色譜中顯得特別重要，流動(dòng)相可顯著改變組分分離狀況。(3) 流速流速大于0.5 cm/s時(shí)， Hu曲線(xiàn)是一段斜率不大的直線(xiàn)。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。5指出苯、萘、蒽在反相色譜中的洗脫順序并說(shuō)明原因。三者極性順序從大到小是苯、萘、蒽，因此在反相色譜中的洗脫順序?yàn)楸?、萘、蒽，苯最先出峰?宜用何種HPLC方法分離下列物質(zhì)？（1）乙醇和丁醇；（2）Ba2+和Sr2+；（3）正戊酸和正丁酸；（4）相對(duì)分子質(zhì)量的的葡糖苷。（1）正相鍵合相色譜法 （2）離子交換色譜法（3）離子對(duì)色譜法（4）空間排阻色譜法7外標(biāo)法測(cè)定黃芩顆粒中的黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 8內(nèi)標(biāo)校正因子法計(jì)算炔諾酮和炔雌醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 9測(cè)定生物堿試樣中黃連堿和小檗堿的含量，稱(chēng)取內(nèi)標(biāo)物、黃連堿和小檗堿對(duì)照品各0.2000g配成混合溶液。測(cè)得峰面積分別為3.60105, 3.43105和4.04105mVs。稱(chēng)取0.2400g內(nèi)標(biāo)物和試樣0.8560g同法配制成溶液后，在相同色譜條件下測(cè)得峰面積為4.16105, 3.71105和4.54105mVs。計(jì)算試樣中黃連堿和小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。（黃連堿26.2%，小檗堿27.3%）10用15cm長(zhǎng)的ODS柱分離兩個(gè)組分。柱效n=2.84104m1；測(cè)得t0=1.31min；組分的min；=4