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食品微生物它雖然小但是你可別輕看它一般來說，食品企業(yè)或大或小的都有自己的微生物檢測實驗室，但是微生物檢測實驗室的地位則不盡相同。微生物檢測實驗室作為消費性部門，總不被領導們重視，特別是一些生產(chǎn)內(nèi)銷產(chǎn)品的公司，更是如此。這其實是他們還沒有真正認識到微生物檢測的重要性。我們可以從下面3個方面來了解下微生物檢測所不可忽視的作用。 1微生物檢測是產(chǎn)品的最后監(jiān)控點 微生物檢測作為生產(chǎn)的產(chǎn)品的最后監(jiān)控點，有著至關重要的作用。產(chǎn)品合格與否，衛(wèi)生是關鍵，不僅關系到產(chǎn)品的質(zhì)量問題，更有可能關系到顧客的生命安全問題，微生物檢測作為產(chǎn)品的最后監(jiān)控點，也是最后的“把關員”，這一關掌控的好，企業(yè)贏得市場的認可，贏得健康發(fā)展，贏得長遠利益，若掌控的不好，則產(chǎn)品衛(wèi)生勢必得不到保障，也許企業(yè)一時得到生存，但肯定無法長遠發(fā)展。 2、微生物檢測是產(chǎn)品衛(wèi)生的監(jiān)督員 要想生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，必須要有良好的衛(wèi)生。怎樣來監(jiān)控衛(wèi)生的好與壞呢？除了遵守SSOP等基礎生產(chǎn)操作規(guī)范以外，那就要靠微生物檢測來衡量衛(wèi)生是否合格，衛(wèi)生不合格，產(chǎn)品的微生物污染的風險就會增高，產(chǎn)品不合格率就會提升。如果生產(chǎn)出來的都是不合格品，企業(yè)豈不是要提高生產(chǎn)成本來重新處理不合格品？所以，微生物檢測作為衛(wèi)生的監(jiān)督員，至關重要，它把良好的生產(chǎn)衛(wèi)生控制在生產(chǎn)過程中，降低了微生物污染的風險，提高了產(chǎn)品的合格率，降低了公司的成本。 3微生物檢測是食品原輔料進入生產(chǎn)車間的第一道關卡 有好的基礎才能建起穩(wěn)固的大廈，同樣的有好的原輔料才能生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，而微生物檢測作為原輔料進入生產(chǎn)車間的第一道關卡，起著非常重要的作用。原輔料衛(wèi)生不合格，那么這批原輔料肯定是不能用到生產(chǎn)上的，否則，小則產(chǎn)品不能進入市場，企業(yè)承擔損失，大則產(chǎn)品進入市場，引發(fā)食物中毒等事件，企業(yè)承擔更大損失。 由此可見，我們也不難發(fā)現(xiàn)微生物檢測在一個企業(yè)中所不可忽視的作用，無論是從企業(yè)本身來說還是從消費人群來說，它理應得到該得到的重視。檢測方法生長量測定法體積測量法：又稱測菌絲濃度法。通過測定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養(yǎng)液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鐘）和轉速（如5000 rpm），離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的一個重要監(jiān)測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營養(yǎng)物，結果會有一定偏差。稱干重法：可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養(yǎng)液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，并用清水離心洗滌1-5次，進行干燥。干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干，或采用紅外線烘干，也可在800C或400C下真空干燥，干燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾后用少量水洗滌，在400C下進行真空干燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣，通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時，常采用這種方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。比濁法：微生物的生長引起培養(yǎng)物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長作定時跟蹤時，可采用一種特制的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長監(jiān)測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm 處用比色管定時測定發(fā)酵液的吸光光度值OD600，以此監(jiān)控E.Coli的生長及誘導時間。菌絲長度測量法：對于絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養(yǎng)基上測定一定時間內(nèi)菌絲生長的長度，或是利用一只一端開口并帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養(yǎng)基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長。微生物計數(shù)法血球計數(shù)板法:血球計數(shù)板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平臺，兩嵴的表比兩平臺的表面高0.1 mm，每個平臺上刻有不同規(guī)格的格網(wǎng)，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統(tǒng)計一定大格內(nèi)微生物的數(shù)量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數(shù)。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜于單細胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進行計數(shù)，并且所得結果是包括死細胞在內(nèi)的總菌數(shù)。染色計數(shù)法：為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數(shù)，而直接用血球計數(shù)板法又無法區(qū)分死細胞和活細胞的不足，人們發(fā)明了染色計數(shù)法。借助不同的染料對菌體進行適當?shù)娜旧?，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數(shù)。如酵母活細胞計數(shù)可用美藍染色液，染色后在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。比例計數(shù)法：將已知顆粒（如霉菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數(shù)方法比較粗放。并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標準。液體稀釋法：對未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋，根據(jù)估計數(shù)，從最適宜的三個連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中，經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù)，然后查最大或然數(shù)表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數(shù)，根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。平板菌落計數(shù)法：這是一種最常用的活菌計數(shù)法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合，或將菌液涂布于已凝固的固體培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后，用平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數(shù)。一般以直徑9cm的平板上出現(xiàn)50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù)，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養(yǎng)，獲得了單克隆。試劑紙法：在平板計數(shù)法的基礎上，發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數(shù)用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數(shù)快捷準確，相比而言避免了平板計數(shù)法的人為操作誤差。膜過濾法：用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發(fā)橙色熒光，而死細胞則發(fā)綠色熒光。生理指標法：微生物的生長伴隨著一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。測定含氮量：大多數(shù)細菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據(jù)含氮量6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱后產(chǎn)生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2后即可測出N2的量。測定含碳量：將少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線。還原糖測定法：還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的常規(guī)監(jiān)測。方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鐘，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入淀粉溶液，繼續(xù)加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。氨基氮的測定：方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調(diào)色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數(shù)刻，加入0.02N的使之變色，根據(jù)NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。其他生理物質(zhì)的測定：P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chǎn)酸，產(chǎn)氣，產(chǎn)CO2（用標記葡萄糖做基質(zhì)），耗氧，黏度，產(chǎn)熱等指標， 都可用于生長量的測定。也可以根據(jù)反應前后的基質(zhì)濃度變化，最終產(chǎn)氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發(fā)酵生產(chǎn)上，隨時監(jiān)測溶氧量的變化和酸堿度的變化，判斷細菌的長勢。商業(yè)化快速微生物檢測法：微生物的檢測，其發(fā)展方向是快速，準確，簡便，自動化，當前很多生物制品公司利用傳統(tǒng)微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用于醫(yī)學微生物檢測和科學研究領域。例如：1、抗干擾培養(yǎng)基和微生物數(shù)量快速檢測技術結合解決了傳統(tǒng)微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統(tǒng)奠定了堅實的基礎。中科院廣州分院合作產(chǎn)業(yè)處提供的抗干擾微生物培養(yǎng)基，新型生化鑒定管，微生物計數(shù)卡，環(huán)境質(zhì)量檢測試劑盒等，可方便的用于多項檢測。2、BACTOMETER 全自動各類總菌數(shù)及快速細菌檢測系統(tǒng)可以數(shù)小時內(nèi)獲得監(jiān)測結果，樣本顏色及光學特征都不影響讀數(shù)，對酵母和霉菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）將待測樣本與培養(yǎng)基置于反應試劑盒內(nèi)，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產(chǎn)生阻抗改變。如微生物生長時可將培養(yǎng)基中的大分子營養(yǎng)物經(jīng)代謝轉變?yōu)榛钴S小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統(tǒng)平板法更快速監(jiān)測微生物的存在及數(shù)量。測定項目包括總生菌數(shù)，酵母菌，大腸桿菌群，霉菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。隨著人們生活水平不斷提高，各種安全問題越來越受到人們的重視，微生物的污染問題也相應地備受關注。在食品和環(huán)境等各個方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物將大量繁殖而導致食源性疾病或環(huán)境污染甚至醫(yī)院內(nèi)感染。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，導致感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物對人類的威脅越來越大。傳統(tǒng)的檢驗方法，主要包括形態(tài)檢查和生化方法，其準確性、靈敏性均較高，但涉及的實驗較多、操作煩瑣、需要時間較長、準備和收尾工作繁重，而且要有大量人員參與1，2。所以，迫切需要準確、省時、省力和省成本的快速檢驗方法。本文對微生物快速檢測方法的進展情況及實際應用進行綜述，以利于預防食源性疾病及公共衛(wèi)生突發(fā)事件的發(fā)生。1 即用型紙片法3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物測試片，可分別檢測菌落總數(shù)、大腸菌群計數(shù)、霉菌和酵母計數(shù)3。由RCP Scientific Inc 公司開發(fā)上市的Regdigel系列，除上述項目外還有檢測乳桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌的產(chǎn)品4，這兩個系列的產(chǎn)品與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測餐具的表面，操作簡便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率高，已經(jīng)被列為國標方法。使用時應正確掌握操作技術和判斷標準，從而達到理想的檢測效果5。美國3M公司生產(chǎn)的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復的缺陷。霉菌快速檢驗紙片，應用于食品檢驗中的霉菌具有操作簡便，僅需36培養(yǎng)，不需要低溫設備；快速，僅需2 d就可觀察結果，比現(xiàn)在的國家標準檢驗方法縮短35 d，大大提高了工作效率。紙片法與國標法在霉菌檢出率上差異無統(tǒng)計學意義，且菌落典型，易判定。紙片熒光法利用細菌產(chǎn)生某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點而建立的一種酶底物反應法。只需檢測食品中大腸菌群、大腸桿菌的有關酶的活性，將熒光產(chǎn)物在365 nm紫外光下觀察即可。同時紙片可高壓滅菌處理，4保存，簡化了實驗準備、操作和判斷6。但由于它們價格昂貴，限制了在基層單位的實際應用。2 生物化學技術2.1 PCR技術 PCR技術采用體外酶促反應合成特異性DNA片段，再通過擴增產(chǎn)物來識別細菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個細菌的拷貝基因，因此在細菌的檢測中只需短時間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進行篩選，節(jié)約了大量時間，但PCR技術也存在一些缺點：食物成分、增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有抑制作用，可能導致檢驗結果假陰性；操作過程要求嚴格，微量的外源性DNA進入PCR后可以引起無限放大產(chǎn)生假陽性結果，擴增過程中有一定的裝配誤差，會對結果產(chǎn)生影響。由于以上原因，PCR技術對操作者的自身素質(zhì)要求很高，對于基層單位而言難以做到。短時間內(nèi)也不會有經(jīng)濟效益和社會效益，因此影響了這項技術在基層的應用。2.2 基因探針技術 基因探針技術利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當條件下互補形成穩(wěn)定的DNARNA或DNADNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細菌。基因探針的優(yōu)點是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的GENPROBE基因探針檢測系統(tǒng)，對于分離到的單個菌落，30 min完成微生物的確證試驗7，基因探針的缺點是不能鑒定目標菌以外的其他菌。3 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應底物、抗體、熒光反應底物、酶反應底物等，可使目標培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24 h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌8。Merk公司的chromocult Coliform Agar培養(yǎng)基上，大腸桿菌為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落9。這個方法對操作者要求不高，短期培訓合格后即可上崗，從而取得一定的經(jīng)濟效益和社會效益，應用前景十分廣泛。4 免疫學技術免疫學技術通過抗原和抗體的特異性結合反應，再輔以免疫放大技術來鑒別細菌。免疫方法的優(yōu)點是樣品在進行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術進行篩選。由于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時間內(nèi)達到檢出度，抗原和抗體的結合反應可在很短時間內(nèi)完成10。此技術對操作者要求也不高，是目前為止基層單位應用時間最長最為廣泛的一項快速檢測技術。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提高環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率11。膠體金免疫層析法能快速、靈敏檢測金黃色葡萄球菌12，應用膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原，可大大提高工作效率13。ATP生物發(fā)光法是近年發(fā)展較快的一種用于食品生產(chǎn)加工設備潔凈度檢測的快速檢測方法。利用ATP生物發(fā)光分析技術和體細胞清除技術，測量細菌ATP和體細胞ATP， 細菌ATP的量與細菌數(shù)成正比，用ATP生物發(fā)光分析技術檢測肉類食品細菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場衛(wèi)生學檢測，都能夠達到快速適時的目標14，15。微型自動熒光酶標分析法(mini VIDAS)是利用酶聯(lián)熒光免疫分析技術，通過抗原-抗體特異反應，分離出目標菌，由特殊儀器根據(jù)熒光的強弱自動判斷樣品的陽性或陰性。VIDAS法檢測凍肉中沙門菌具有很高的靈敏度和特異性，用于進出口凍肉的檢測，可大大縮短檢驗時間，加快通關速度16，檢測凍肉中李斯特氏菌亦如此17。5 細菌直接計數(shù)法主要包括流式細胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)和固相細胞計數(shù)(solid phase cytometry，SPC)法。FCM通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號的強度則代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，由此可通過儀器檢測散射光信號和熒光信號來估計微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細胞計數(shù)具有高度的敏感性，可同時對目的菌進行定性和定量鑒定18。目前已經(jīng)建立了細菌總數(shù)19、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌20等的FCM檢驗方法。固相細胞計數(shù)可以在單個細胞水平對細菌進行快速檢測21。濾過樣品后，存留的微生物在濾膜上進行熒光標記，采用激光掃描設備自動計數(shù)。每個熒光點可直觀地由通過計算機驅動的流動臺連接到ChemScan上的落射熒光顯微鏡來檢測，尤其對于生長緩慢的微生物檢測用時短，使該方法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計數(shù)法22。此方法要求配備特殊的儀器，財政投入較大，因此基層單位目前暫時無法應用。6 全自動微生物分析系統(tǒng)(AMS)AMS是一種由傳統(tǒng)生化反應及微生物檢測技術與現(xiàn)代計算機技術相結合，運用概率最大近似值模型法進行自動微生物檢測的技術，可鑒定由環(huán)境、原料及產(chǎn)品中分離的微生物。AMS僅需418 h即可報告結果，以常規(guī)法鑒定細菌，只能得到是或不是某種菌，要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗，而AMS則可以直接報告是什么菌23。法國生物梅里埃集團公司出品的VitekAMS自動微生物檢測系統(tǒng)屬當今世界上最為先進、自動化程度最高的細菌鑒定儀器之一。Vitek對細菌的鑒定是以每種細菌的微量生化反應為基礎，不同種類的Vitek試卡(檢測卡)含有多種的生化反應孔，可達30種，可鑒定405種細菌24。用AMS明顯縮短腸道菌生化鑒定的時間，如鑒定沙門菌屬只需4 h，鑒定志賀氏菌屬只需6 h，鑒定霍亂弧菌等致病性弧菌亦只需413 h22183-186。這套系統(tǒng)對基層單位而言具有極強的應用價值，但他昂貴的價格讓人望而生畏?？傊S著現(xiàn)代科技的發(fā)展，可以預料在不遠的將來，傳統(tǒng)的微生物檢測技術將逐漸被各種新型簡便的微生物快速診斷技術所取代。近年來興起的基因探針技術及全自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應用前景?！緟⒖嘉墨I】 1 唐靈，郭奕芳，吳翊，等.Petrifilm紙片法和國際法檢測奶制品細菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)的結果比較J. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2000,10(3):325-327.2 吳清平，周艷紅，蔡芷荷.衛(wèi)生微生物特異性顯色培養(yǎng)基的研究與應用J.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005,15(1):124-126.3 Townsend D EComparison of the simplate coliform and escherichia coli test with pertrifilm，there tube MPN，and VRBA+MUG methods for enumeratlng coiiforms and Ecoli in foodJJ Food Protection，1998，61(4)：444-4494 闞方琦，董非，李華，等兩種大腸菌群快檢紙片的質(zhì)量檢測及應用效果比較J預防醫(yī)學文獻信息，2003，9(2)：167-1685 汪琦食品中霉菌檢測兩種方法的比較J中國誤診學雜志，2004，4(4)：617-6186 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