17β-羥甾類固醇脫氫酶Ⅱ在異位子宮內(nèi)膜的表達(dá)缺陷及其意義.doc

17-羥甾類固醇脫氫酶在異位子宮內(nèi)膜的表達(dá)缺陷及其意義作者：曲軍英,歐湘紅,宋保志,楊代興單位：福建醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院,福州 350005 1.婦產(chǎn)科; 2.中心實驗室【摘要】 目的 研究子宮內(nèi)膜異位癥的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜17β-羥甾類固醇脫氫酶(17β-HSD)的表達(dá),探討其在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中的意義。 方法 采用RT-PCR檢測67例子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位子宮內(nèi)膜、32例在位內(nèi)膜組織17β-HSD mRNA的表達(dá),并與35例對照組正常子宮內(nèi)膜比較。 結(jié)果 (1)正常子宮內(nèi)膜自增生晚期始有17β-HSD mRNA微量表達(dá),分泌期逐漸增高并于分泌晚期達(dá)到高峰;在位內(nèi)膜的表達(dá)趨勢與正常子宮內(nèi)膜一致,但強(qiáng)度低于正常內(nèi)膜(P<0.01);(2)異位內(nèi)膜未檢出17β-HSD mRNA。 結(jié)論 子宮內(nèi)膜異位癥存在17β-HSDmRNA表達(dá)缺陷,導(dǎo)致異位內(nèi)膜局部雌激素代謝障礙,持續(xù)的雌激素微環(huán)境改變,促進(jìn)異位內(nèi)膜生長。 【關(guān)鍵詞】 子宮內(nèi)膜異位癥; 17-羥甾類脫氫酶類; 雌激素類 Expression Deficiency of 17-Hydroxysteroid Dehydrogenase in Ectopic Endometrium of Endometriosis QU Junying1, OU Xianghong1, SONG Baozhi1, YANG Daixing2, LIN Jing’an1, MA Yanhui1 1.Dpartment of Obstetrics and Gynecology; 2.Department of Pathology, The Affliated First Hospital, Fujian Medicine University, Fuzhou 350005, China ABSTRACT: Objective To study the expression of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase(17β-HSD) in the ectopic and eutopic endometrium of patients with endometriosis. Methods RT-PCR was used to assess 17β-HSD messenger RNA(mRNA) expression in 67 ectopic and 32 eutopic endometrium with endometriosis, and compared with the 35 cases of normal endometrium. Results In normal uterine endometrium the expression of 17β-HSD mRNA presented weak in the late proliferative phase and gradually increased in the secretory phase, and the highest in the late secretory phase. 17β-HSD RNA expression was not appared in ectopic endometrium of endometriosis. In the eutopic endometrium of endometriosis of the expression of 17β-HSD mRNA was lower than normal uterine endometrium(P<0.01) also. Conclusion Deficiency of 17β-HSD expression in the endometrium may elicie disturbance of local estrogen metabolism and promotes overgrowth of ectopic endometrium. KEY WORDS: 17-hydroxysteroid dehydrogenases; endometriosis; estrogen 子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)是一種雌激素依賴性疾病。研究表明,異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中有雌激素合成酶芳香化酶P450表達(dá),能合成雌激素,使局部雌激素濃度增高,給予異位內(nèi)膜生長的原動力1。筆者檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜17β-HSD的表達(dá),探討局部雌激素代謝情況。 1 材料與方法 1.1 材料 1.1.1 臨床資料 子宮內(nèi)膜異位癥組選自福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和福建省婦幼保健院2003年12月2004年11月因子宮內(nèi)膜異位癥行腹腔鏡或開腹手術(shù)的異位病灶共67例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫(巧囊)壁45例,盆腹膜異位灶22例,其中增生早期16例,增生中、晚期13例,分泌早期23例,分泌中晚期15例。32例同時刮取子宮前、后壁近宮底部內(nèi)膜各1條,其中增生早期7例,增生中晚期8例,分泌早期9例,分泌中晚期8例。對照組以同樣方法取同期輸卵管因素不孕行腹腔鏡手術(shù)者的子宮內(nèi)膜和未經(jīng)放、化療治療的宮頸癌期患者子宮內(nèi)膜,共35例,其中增生早期9例,增生中、晚期7例,分泌早期10例,分泌中晚期9例。所有入選者均為已婚,術(shù)前未用任何激素類藥物治療,無內(nèi)科合并癥,有正常月經(jīng)周期(2631)d,年齡(29±5)歲(2340歲)。 巧囊標(biāo)本實驗前行H-E染色,光鏡下經(jīng)組織病理學(xué)鑒定為子宮內(nèi)膜異位灶;在位內(nèi)膜和對照組正常內(nèi)膜月經(jīng)期分別根據(jù)其月經(jīng)周期推算,其病理學(xué)圖像符合Noye’s分期標(biāo)準(zhǔn)3。 1.1.2 試劑 Trizol(RNA提取試劑,美國Invitrogen公司);M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)(加拿大MBI公司);5 U/μL Taq DNA聚合酶(上海博亞生物技術(shù)有限公司);DNA Mark(深圳晶美生物制品有限公司);凝膠掃描圖像分析系統(tǒng)(GD2000,美國BIO-RAD公司)。 1.2 方法 1.2.1 取材 所有標(biāo)本取材后即用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次,離體后20 min內(nèi)取新鮮組織50 mg,立即凍存于-72 超低溫冰箱中,2 h內(nèi)提取總RNA。為保證mRNA的完整性,盡量將總RNA立即逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,置于-20 冰箱備用。 1.2.2 17β-HSDmRNA表達(dá) 引物由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成。 17β-HSD引物序列: F:5’-CGGTGCTCCAAATGGACATCAC-3’ R:5’-GGATGGAAGCAACTTTAATTCCCC-3’ 擴(kuò)增目的基因片斷長度為384 bp。 內(nèi)參基因β-actin引物序列: F:5’-GGCATGGGTCAGAAGGATTCC-3’ R:5’-ATGTCACGCCACGATTTCCCGC-3’ 擴(kuò)增判斷長度為500 bp。 反應(yīng)條件:95 預(yù)變性5 min,95 變性30 s→57 退火30 s→72 延伸30 s,共35個循環(huán),72 再延伸10 min。 1.2.3 PCR產(chǎn)物分析 取PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5瓊脂糖凝膠電泳,以100 bp DNA梯度標(biāo)準(zhǔn)的DNA Mark作為相對分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。電泳完畢后進(jìn)行圖像分析。以17β-HSD2與β-actin兩條帶灰度值的比值作為17β-HSD mRNA的相對表達(dá)水平。 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析,組間和組內(nèi)比較用LSD檢驗。 2 結(jié) 果 2.1 子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜 17β-HSDmRNA表達(dá) 2瓊脂糖電泳發(fā)現(xiàn)陽性表達(dá)者在同一泳道384 bp和500 bp處可見17β-HSD2、β-actin RT-PCR產(chǎn)物的清晰條帶,周圍無雜帶。134份標(biāo)本均可見其內(nèi)參照β-actin條帶,67例異位內(nèi)膜均無17β-HSD2 mRNA表達(dá)(圖1,表1)。 2.2 在位內(nèi)膜、正常對照組各月經(jīng)周期中17β-HSDmRNA表達(dá) 正常內(nèi)膜增生早、中期無表達(dá),增生晚期開始出現(xiàn)弱表達(dá),分泌晚期比分泌早、中期表達(dá)高(P<0.01)。在位內(nèi)膜變化趨勢與正常內(nèi)膜基本一致,但在位內(nèi)膜分泌期總17β-HSD mRNA表達(dá)水平低于正常內(nèi)膜(P<0.05,圖1,表1)。表1 正常內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜17β-HSDmRNA表達(dá) 3 討 論 正常子宮內(nèi)膜的生長主要依賴循環(huán)雌激素濃度,本身無芳香化酶表達(dá),不能合成雌激素,但存在雌激素的代謝酶——17β-羥甾類固醇脫氫酶(17β-HSD),能將E2氧化成雌酮而減弱雌激素活性;17β-HSD能將雌酮轉(zhuǎn)化為雌二醇3。二者調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜局部組織E2水平,調(diào)整雌激素對靶組織的作用。 3.1 17β-HSD的結(jié)構(gòu)和功能 17β-HSD調(diào)節(jié)組織中雄激素和雌激素水平。迄今為止,已確定由不同基因編碼的6種具有17β-HSD活性的酶,其中17β-HSD、是NADPH依賴的還原酶,而17β-HSD、是NAD依賴的氧化酶,它能催化高活性的17β-羥類固醇與低活性酮類固醇之間的轉(zhuǎn)換。17β-HSD的活性調(diào)控性腺類固醇內(nèi)多種產(chǎn)物的產(chǎn)量,影響類固醇激素作用于靶組織的強(qiáng)度,是局部雌激素活性的主要調(diào)節(jié)酶。17β-HSD可將17β-雌二醇(E2)轉(zhuǎn)化成雌酮(E1),睪酮(T)轉(zhuǎn)化成雄烯二酮(A2),20a-羥孕酮轉(zhuǎn)變成孕酮3。17β-HSD作用與其相反,可將E1轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的E2。這一對氧化還原酶主要存在于雌激素作用的靶組織(如子宮內(nèi)膜、肝臟、胎盤等部位),但二者的表達(dá)存在濃度及時相差異,導(dǎo)致雌激素作用的不同效應(yīng)。 3.2 17β-HSD2在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜組織的表達(dá)及意義 人正常子宮內(nèi)膜主要表達(dá)17β-HSD、4。17β-HSD在增生期和分泌期子宮內(nèi)膜均有表達(dá),能將E1轉(zhuǎn)化成活性更高的E2;而17β-HSD主要表達(dá)于分泌期內(nèi)膜的腺上皮。17β-HSD對子宮內(nèi)膜的主要生物學(xué)作用是通過將E2轉(zhuǎn)化成E1而降低局部組織E2的水平,也可通過將20α-羥孕酮轉(zhuǎn)換成孕酮而升高局部組織孕酮的水平。17β-HSD這種局部作用是正常子宮內(nèi)膜重要的保護(hù)機(jī)制。有研究認(rèn)為這種酶的產(chǎn)生和激活受分泌期卵巢黃體顆粒細(xì)胞分泌的孕酮和宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中孕激素受體的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)5。本研究表明,在位和正常內(nèi)膜17β-HSD mRNA都自增生晚期始出現(xiàn)少量表達(dá),分泌早期漸增多,分泌晚期達(dá)高峰,作用是降低子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)E2濃度,增強(qiáng)孕酮作用,促進(jìn)分泌期子宮內(nèi)膜成熟與凋亡,防止內(nèi)膜過度增生,這是子宮內(nèi)膜生理性保護(hù)通道,該結(jié)果與國外學(xué)者的報道一致。筆者還發(fā)現(xiàn):在位內(nèi)膜分泌中晚期17β-HSD表達(dá)水平低于正常內(nèi)膜,說明患者子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜的自身保護(hù)機(jī)制劣于正常內(nèi)膜,致使經(jīng)期逆流的經(jīng)血中子宮內(nèi)膜碎屑雌激素水平高于正常人,這可能是90婦女有經(jīng)血逆流,卻只有10患病的原因之一。 3.3 17β-HSD在異位內(nèi)膜組織的表達(dá)及意義 本研究發(fā)現(xiàn),異位內(nèi)膜無論增生期或分泌期均無17β-HSD表達(dá),而芳香化酶P450持續(xù)存在1?？梢姰愇粌?nèi)膜不僅依賴于卵巢分泌的雌激素并能自分泌產(chǎn)生高雌激素活性的E2,但缺乏轉(zhuǎn)化雌二醇為雌酮這一重要降解途徑,提示異位子宮內(nèi)膜局部雌激素代謝障礙是導(dǎo)致雌激素依賴性組織生長的重要條件;由于17β-HSD缺乏,削弱孕酮對抗雌激素誘導(dǎo)的增生作用,促進(jìn)異位內(nèi)膜生長。但也有文獻(xiàn)報道,與正常子宮內(nèi)膜比較17β-HSD、17β-HSD、硫酸脂酶及ERβ在卵巢的異位子宮內(nèi)膜表達(dá)顯著增高,而17β-HSD和PR表達(dá)卻沒有明顯變化;異位內(nèi)膜中17β-HSD并不缺乏,反而較在位內(nèi)膜及對照組內(nèi)膜更高表達(dá)6-7。圍繞局部雌激素代謝,尚有許多疑問,17β-HSD的確切作用有待進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】 1 歐湘紅,曲軍英,林 蓉,等. 異位子宮內(nèi)膜芳香化酶P450A的表達(dá)及其意義J. 福建醫(yī)藥雜志, 2006,28(4):1-3.2 Stanley R. 女性生殖道病理學(xué)M. 北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社, 2005:248.3 Vihko P,Isomaa V,Ghosh D. 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