已閱讀5頁,還剩39頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
2017/11/2,高效毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用,山東藥品食品職業(yè)學(xué)院 任玉紅,2010年執(zhí)業(yè)藥師繼續(xù)教育,2017/11/2,該內(nèi)容共分兩部分進(jìn)行介紹第一部分 概述第二部分 高效毛細(xì)管電泳技術(shù)的分離模式及應(yīng)用,2017/11/2,第一部分 概述 高效毛細(xì)管電泳法(HPCE )又稱毛細(xì)管電泳法(capillary electrophoresis,CE)。 是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓電場為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)供試品中各組分之間淌度(單位電場強(qiáng)度下的遷移速度)和(或)分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的新型液相分離分析技術(shù)。,2017/11/2,1937年,Tiselius(瑞典)將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩沖溶液之間,兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳,第一次將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和、球蛋白;第一次的自由溶液電泳; 一臺電泳儀;,Tiselius建立了移動(dòng)界面電泳,將電泳發(fā)展成分離技術(shù)。 1948年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。,2017/11/2,1981年,Jorgenson和Luckas,用75m內(nèi)徑石英毛細(xì)管進(jìn)行電泳分析,柱效高達(dá)40萬/m,促進(jìn)電泳技術(shù)發(fā)生了根本變革,迅速發(fā)展成為可與GC、HPLC相媲美的嶄新的分離分析技術(shù)高效毛細(xì)管電泳。 19881989年出現(xiàn)了第一批毛細(xì)管電泳商品儀器。,目前,在生命科學(xué)、藥物分析、以及從小分子、離子到單細(xì)胞分析的一系列領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。,2017/11/2,一、高效毛細(xì)管電泳法的特點(diǎn),高效毛細(xì)管電泳法是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物。 與高效液相色譜法(HPLC)相比,其相同處在于都是高效分離技術(shù),儀器操作均可自動(dòng)化,且二者均有多種不同分離模式。二者之間的差異在于:HPCE用遷移時(shí)間取代HPLC中的保留時(shí)間,HPCE與HPLC相比,分析速度快;柱效高;所需樣品量及流動(dòng)相用量少;但HPCE僅能實(shí)現(xiàn)微量制備,而HPLC可作常量制備;同時(shí),HPCE沒有泵輸液系統(tǒng),因此成本相對較低,通過改變操作模式和緩沖液的成分,有很大的選擇性,可以根據(jù)不同分子性質(zhì)(諸如大小、電荷數(shù)、疏水性等)對極廣泛的對象進(jìn)行有效的分離。而HPLC為達(dá)到同樣的目的,需要消耗價(jià)格昂貴的柱子和大量的溶劑。,2017/11/2,HPCE和普通電泳相比,由于其采用高電場,因此分離速度快;檢測器則除了未能和原子吸收及紅外光譜連接以外,其它類型檢測器均已和HPCE實(shí)現(xiàn)了連接檢測;一般電泳定量精度差,而HPCE和HPLC相近;HPCE操作自動(dòng)化程度比普通電泳要高,與傳統(tǒng)的電泳相比主要有四個(gè)特點(diǎn),即高效、快速、微量和自動(dòng)化。,2017/11/2,毛細(xì)管電泳技術(shù)兼有高壓電泳及高效液相色譜等優(yōu)點(diǎn),其突出特點(diǎn)是:,1.儀器簡單、易自動(dòng)化 電源、毛細(xì)管、檢測器、溶液瓶2.分析速度快、分離效率高 在3.1min內(nèi)分離36種無機(jī)及有機(jī)陰離子,4.1min內(nèi)分離了24種陽離子;分離柱效:105107/m理論塔板數(shù)3.操作模式多,開發(fā)分析方法容易 4.操作方便、消耗少 進(jìn)樣量極少,水介質(zhì)中進(jìn)行5.應(yīng)用范圍極廣,2017/11/2,二、毛細(xì)管電泳的基本裝置與操作,毛細(xì)管電泳的基本裝置由高壓電源、毛細(xì)管、檢測器、電解質(zhì)貯液槽、進(jìn)樣器、控制系統(tǒng)及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。,1溫度控制系統(tǒng);2高壓電源;3高壓電極槽;4毛細(xì)管;5檢測器;6低壓電極槽;7鉑絲電極;8記錄/數(shù)據(jù)處理檢測器,2017/11/2,幾個(gè)主要部分的特點(diǎn):,進(jìn)樣:最常用的進(jìn)樣方式為流體力學(xué)方式和電動(dòng)方式兩種。 分離:分離部件主要包括毛細(xì)管、毛細(xì)管恒溫系統(tǒng)和電源。毛細(xì)管材料應(yīng)具有化學(xué)和電學(xué)惰性、紫外可見光透光性、柔韌性、強(qiáng)度高和便宜等特性。熔融石英是毛細(xì)管的首選材料,最常用的是內(nèi)徑為2575m的毛細(xì)管。 檢測:紫外可見光檢測是最常用的檢測方式,但是受到儀器、單波長等因素的限制,目前應(yīng)用最廣泛的是二極管陣列(PDA)檢測器。 液體的處理:該系統(tǒng)包括自動(dòng)進(jìn)樣裝置、緩沖液更換系統(tǒng)和緩沖液的水平系統(tǒng)等。,2017/11/2,完成典型的HPCE實(shí)驗(yàn),一般包括以下操作步驟:,移開進(jìn)樣端的電解質(zhì)貯液槽,換上樣品管使用低壓或電遷移方式進(jìn)樣換電解質(zhì)貯液槽加上分離電壓樣品分離,用檢測器進(jìn)行檢測,2017/11/2,電泳 是指在電場作用下,溶液中的帶電粒子作定向移動(dòng)的現(xiàn)象。單位電場下的電泳速度稱為淌度或電遷移率。 離子所帶電荷越多,解離度越大,體積越小,溶液粘度越小,有效淌度就越大,其電泳速度就越快。這也是電泳分離及其條件選擇的根本依據(jù)之一。,物質(zhì)離子在電場中差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。,三、毛細(xì)管電泳法的基本理論,2017/11/2,電滲 高效毛細(xì)管電泳操作中一個(gè)基本組成部分是電滲流(electroosmosis,EOF)。電滲流是毛細(xì)管內(nèi)壁表面電荷所引起的管內(nèi)液體的整體流動(dòng),來源于外加電場對管壁溶液雙電層的作用。 CE所用的石英毛細(xì)管柱,在pH3的情況下,其內(nèi)表面帶負(fù)電,和溶液接觸時(shí)形成雙電層。在高電壓的作用下,雙電層中的水合陽離子引起流體整體向負(fù)極方向遷移的現(xiàn)象叫電滲。 電滲流是毛細(xì)管中的溶劑因軸向直流電場的作用而發(fā)生的定向流動(dòng)。,2017/11/2,電滲流的方向,電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì): 內(nèi)表面帶負(fù)電荷,溶液帶正電荷,電滲流流向陰極; 內(nèi)表面帶正電荷,溶液帶負(fù)電荷,電滲流流向陽極; 粒子在毛細(xì)管內(nèi)電解質(zhì)中的遷移速度等于電泳和電滲流(EOF)兩種速度的矢量和,正離子的運(yùn)動(dòng)方向和電滲流一致,故最先流出;中性粒子的電泳流速度為“零”,故其遷移速度相當(dāng)于電滲流速度;負(fù)離子的運(yùn)動(dòng)方向和電滲流方向相反,但因電滲流速度一般都大于電泳流速度,故它將在中性粒子之后流出,從而因各種粒子遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。,2017/11/2,多數(shù)情況下,電滲流速度是電泳速度的5-7 倍。 因此,在毛細(xì)管電泳中利用電滲流可將正、負(fù)離子和中性分子一起朝一個(gè)方向產(chǎn)生差速遷移,在一次CE 操作中同時(shí)完成正、負(fù)離子的分離測定。由于電滲流的大小和方向可以影響CE 分離的效率、選擇性和分離度,所以成為優(yōu)化分離條件的重要參數(shù)。用來控制電滲流的方法主要有改變緩沖溶液的成分和濃度;改變緩沖溶液的pH 值;加入添加劑;毛細(xì)管內(nèi)壁改性;外加徑向電場;改變溫度等。,2017/11/2,四、影響高效毛細(xì)管電泳分離的因素,1.緩沖溶液 CE中常用的緩沖試劑有:磷酸鹽、硼砂或硼酸、醋酸鹽等。緩沖液濃度升高,離子強(qiáng)度增加,電滲流減小,分析效率提高;同時(shí),增強(qiáng)樣品的富集現(xiàn)象,從而提高分析靈敏度。,2pH值 pH能影響樣品的解離能力,樣品在極性強(qiáng)的介質(zhì)中離解度增大,電泳速度也隨之增大,從而影響分離選擇性和分離靈敏度。,2017/11/2,3. 分離電壓 相對較高的分離電壓會提高分離度和縮短分析時(shí)間,但電壓過高又會使譜帶變寬而降低分離效率。,4. 溫度的影響,毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高,使溶液的黏度下降,電滲流增大。5. 添加劑的影響6. 進(jìn)樣,2017/11/2,第二部分 高效毛細(xì)管法的分離模式及應(yīng)用,2017/11/2,一、高效毛細(xì)管電泳的分離模式,1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)2、毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)3、毛細(xì)管等速電泳(CITP)4、毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)5、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEKC或MECC)6、毛細(xì)管電色譜 (CEC),2017/11/2,1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳 CZE,將待分析溶液引入毛細(xì)管進(jìn)樣一端,施加直流電壓后,各組分按各自的電泳流和電滲流的矢量和流向毛細(xì)管出口端,按陽離子、中性粒子和陰離子及其電荷大小的順序通過檢測器。中性組分彼此不能分離。 正離子在負(fù)極最先流出;中性粒子:無電泳現(xiàn)象,受電滲流影響,在陽離子后流出;陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。,CZE最基本的操作模式,應(yīng)用最廣泛,是其它各種操作模式的母體。用以分析帶電溶質(zhì),如多種蛋白質(zhì)、肽、氨基酸的分析。,2017/11/2,2、毛細(xì)管凝膠電泳 CGE,將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 其具有多孔性,類似分子篩的作用,試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散,所得峰型尖銳,分離效率高。 蛋白質(zhì)、DNA等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān),CZE模式很難分離,采用CGE能獲得良好分離,DAN排序的重要手段。 特點(diǎn):抗對流性好,散熱性好,分離度極高。 毛細(xì)管凝膠電泳分凝膠和無膠篩分兩類。無膠篩分技術(shù):采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺,稱為毛細(xì)管無膠篩分。柱便宜、易制備。,2017/11/2,CGE 是毛細(xì)管自由溶液區(qū)帶電泳派生出的一種電泳方式 ,用多孔性的凝膠或其它篩分劑作介質(zhì),網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),按分子的大小分離,2017/11/2,1) 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子(充滿毛細(xì)管)和尾隨離子,試樣離子的淌度全部位于兩者之間,并以同一速度移動(dòng)。 2)負(fù)離子分析時(shí),前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負(fù)離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn),逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。陰極進(jìn)樣,陽極檢測。,3、毛細(xì)管等速電泳 capillary isotachophoresis ,CITP,2017/11/2,3)不同離子的淌度不同,所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同(=E),淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度小,使溶質(zhì)按其電泳淌度不同得以分離。 4)特點(diǎn):界面明顯,富集、濃縮作用;常用于分離離子型物質(zhì),目前應(yīng)用不多。,2017/11/2,1)緩沖溶液中加入離子型表面活性劑,其濃度達(dá)到臨界濃度,形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。,4、 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC,MEKC),在電場力的作用下,膠束在柱中移動(dòng)。被分離物質(zhì)在水和膠束相之間發(fā)生分配并隨電滲流在毛細(xì)管內(nèi)遷移,達(dá)到分離。,2)電泳流和電滲流的方向相反,且電滲流 電泳 ,負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng);,2017/11/2,3)中性分子在膠束相和溶液(水相)間分配,疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢,流出時(shí)間長; 特點(diǎn):1)可用來分離中性物質(zhì),擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍;2)色譜與電泳分離模式的結(jié)合。,2017/11/2,1) 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù); 2) 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)(合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物),當(dāng)施加直流電壓(68V)時(shí),管內(nèi)將建立一個(gè)由陽極到陰極逐步升高的、穩(wěn)定的、連續(xù)的、線性的 pH梯度; 3)氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān),在酸性溶液中帶正電荷,反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時(shí),呈電中性,淌度為零;,5、毛細(xì)管等電聚焦 CIEF,2017/11/2,4)聚焦:具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下遷移,分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)pH的位置時(shí),呈電中性,停止移動(dòng),形成窄溶質(zhì)帶而相互分離;,5)陽極端裝稀磷酸溶液,陰極端裝稀NaOH溶液; 6)加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測; 7)電滲流在CIEF中不利,應(yīng)消除或減小。 毛細(xì)管等電聚焦電泳已經(jīng)成功用于測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn),分離異構(gòu)體等方面。,2017/11/2,是將細(xì)粒徑固定相填充到毛細(xì)管中,或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂覆固定相,以電滲流驅(qū)動(dòng)操作緩沖溶液(流動(dòng)相),使試樣組分在兩相間進(jìn)行分離的電動(dòng)色譜過程。此模式兼具電泳和液相色譜的模式。CEC可分為開管CEC(即管壁涂漬固定相)和填充CEC。,6、毛細(xì)管電色譜 capillary electroosmostic chromatography ,CEC,2017/11/2,二、高效毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用,高效毛細(xì)管技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用大致可以分為兩部分:一是原料藥的定量、原料藥中雜質(zhì)的測定、藥物制劑分析以及對它們穩(wěn)定性的評價(jià)等以藥品質(zhì)量控制為目的的測定方法。二是對進(jìn)入人體內(nèi)的藥物或代謝物的吸收、分布、代謝、排泄等體內(nèi)動(dòng)態(tài)的研究,即臨床藥物分析。,2017/11/2,(一)HPCE在藥品質(zhì)量控制方面的研究應(yīng)用,1HPCE在中藥分析中的應(yīng)用 具有分離效率高、分析速度快、分析時(shí)間短、樣品前處理簡便、進(jìn)樣量少、有機(jī)溶劑消耗少、操作簡便、分析成本低等優(yōu)點(diǎn)。另外,HPCE在中藥復(fù)方制劑復(fù)雜成分分析中還具有以下優(yōu)越性:(1)毛細(xì)管柱易于全面清洗,可保持高柱效而使復(fù)雜成分較好分離;(2)分離模式多,適合于中藥制劑中各類化學(xué)成分的分析;(3)不同電泳技術(shù)之間及HPCE與NMR、MS等多種技術(shù)聯(lián)用可提高分析的精密度,更可拓寬其應(yīng)用范圍。,2017/11/2,目前已有報(bào)道,采用HPCE對丸劑、膠囊劑、片劑、合劑、口服液、顆粒劑以及注射劑等中藥制劑或中藥中有效成分進(jìn)行分析。例如,用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC)法測定牡丹皮、白芍、赤芍及其不同炮制品的牡丹酚、芍藥甙的含量;選擇毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)分離模式,以麻黃素為內(nèi)標(biāo),建立了適合莨菪類生物堿一阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、樟柳堿優(yōu)化分離與顛茄酊劑及片劑定量分析的方法,可用于莨菪類生物堿中藥制劑的質(zhì)量控制等。 由此可見,HPCE在中藥制劑質(zhì)量控制及中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中必將發(fā)揮巨大作用。,2017/11/2,2HPCE在天然產(chǎn)物分析中的應(yīng)用(1)蛋白質(zhì)、DNA、多肽、氨基酸的分析: 主要包括肽、蛋白的鑒別、結(jié)構(gòu)分析、微量制備以及蛋白的定量測定、純度檢測;測定氨基酸的組成、序列和一些物化常數(shù)(如分子量和等電點(diǎn)等)、鑒別結(jié)構(gòu)和種類不同的蛋白質(zhì)。在肽和蛋白質(zhì)的鑒別分析中應(yīng)用最多的是CZE。對擴(kuò)散系數(shù)小的生物大分子而言,CE還可以作為收集非常純的單一餾分的微量制備的手段。 例如分離多聚核苷酸并對產(chǎn)物進(jìn)行純度測定等,結(jié)果使人滿意。,2017/11/2,采用MEKC模式,在25分鐘內(nèi)分離了23種丹?;被幔籋PCE可取代傳統(tǒng)的氨基酸分析儀,實(shí)例1:,2017/11/2,DNA排序,實(shí)例2:,2017/11/2,(2)糖及其綴合物的分析 糖分析的難點(diǎn)是糖類物質(zhì)一般為電中性,且親水性強(qiáng),多數(shù)沒有吸光基團(tuán),檢測上存在困難。 各種新的糖衍生化反應(yīng)和檢測技術(shù)的應(yīng)用,使CE成為分析單糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等糖類化合物的有效手段。單糖的解離常數(shù)值一般大于11,需選用pH11強(qiáng)堿性的緩沖液,直接進(jìn)行電泳分離后紫外檢測。這種方法也能用來測定簡單寡糖。多糖一般利用酸解或酶解的方法將其轉(zhuǎn)化為寡糖后進(jìn)行分析。,2017/11/2,在糖的檢測方面,UV,EC和LIF(激光誘導(dǎo)熒光)是主要手段。例如:葡萄糖、果糖、綿子糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、水蘇糖等單糖可以利用CZE,膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC)結(jié)合UV進(jìn)行檢測;寡糖和多糖主要采用CZE結(jié)合EC的方法進(jìn)行檢測;其他糖類(氨基糖等)則選擇LIF(激光誘導(dǎo)熒光)檢測。,2017/11/2,3HPCE在藥物制劑分析中的應(yīng)用,CE法具有能排除高含量復(fù)雜基體干擾、檢測痕量成分的能力,且樣品只需經(jīng)簡單預(yù)處理即可分析其有效成分含量,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于片劑、注射劑、糖漿、滴耳液、乳膏劑及復(fù)方制劑等各種劑型中主藥成分的定量測定。 如有文獻(xiàn)報(bào)道用低pH值的緩沖液測定糖漿中堿性主藥的含量時(shí),因賦形劑呈中性,將停留在進(jìn)樣端不遷移而在清洗時(shí)被沖走,故可將糖漿樣品稀釋后直接進(jìn)樣,無需前處理。,2017/11/2,例如,采用此方法,經(jīng)過篩選比較,確定緩沖液pH3.0,在HPCE柱上富集測定福莫特羅干糖漿;采用CZE技術(shù)測定
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024年度法院執(zhí)行離婚協(xié)議書規(guī)范文本集3篇
- 2024版二手車翻新銷售及質(zhì)保合同2篇
- 2024年度鞋類產(chǎn)品用戶體驗(yàn)優(yōu)化與技術(shù)支持合同3篇
- 2024版?zhèn)€人工業(yè)廠房買賣合同樣本3篇
- 2024版建筑工程擔(dān)保合同范本與執(zhí)行細(xì)則3篇
- 2024年度裝配式建筑構(gòu)件運(yùn)輸及施工承包合同3篇
- 2024年標(biāo)準(zhǔn)包銷協(xié)議條款法律效果探討版
- 2024年度定制五金配件加工及供應(yīng)合同3篇
- 2024年展覽版權(quán)許可合同:展品版權(quán)保護(hù)協(xié)議3篇
- 2024年新材料研發(fā)投資合作三方協(xié)議書3篇
- 民辦學(xué)校教職工入職背景審查制度
- 2024年新人教版四年級數(shù)學(xué)上冊《教材練習(xí)21練習(xí)二十一(附答案)》教學(xué)課件
- 2024年湛江市農(nóng)業(yè)發(fā)展集團(tuán)有限公司招聘筆試沖刺題(帶答案解析)
- 商業(yè)倫理與社會責(zé)任智慧樹知到期末考試答案2024年
- MOOC 創(chuàng)新思維與創(chuàng)業(yè)實(shí)驗(yàn)-東南大學(xué) 中國大學(xué)慕課答案
- 二級公立醫(yī)院績效考核三級手術(shù)目錄(2020版)
- 6人小品《沒有學(xué)習(xí)的人不傷心》臺詞完整版
- GB/T 16865-1997變形鋁、鎂及其合金加工制品拉伸試驗(yàn)用試樣
- 副市長在全市財(cái)政工作會議上的講話
- 業(yè)務(wù)費(fèi)用管理辦法
- 馬克思的平均利潤理論對我國發(fā)展市場經(jīng)濟(jì)有何啟示
評論
0/150
提交評論