課題2　月季的花藥培養(yǎng) (5).ppt

月季的花藥培養(yǎng) 基礎(chǔ)知識(shí) 一 被子植物的花粉發(fā)育 二 產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑 三 影響花藥培養(yǎng)的因素 被子植物的花粉發(fā)育 雄蕊 花絲 花藥 囊狀結(jié)構(gòu) 內(nèi)有很多花粉粒 花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的 因此 花粉是單倍體的生殖細(xì)胞 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 四分體時(shí)期 單核期 雙核期 注意 二核花粉粒 成熟的花粉粒中 只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核 精子在花粉管中形成 三核花粉粒 有些植物的花粉 在成熟前 生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂 形成兩個(gè)精子 這樣的花粉在成熟時(shí) 含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子 兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同 1花粉母細(xì)胞 4個(gè)小孢子 減分 有分 4個(gè)花粉管細(xì)胞核 4個(gè)生殖細(xì)胞核 有分 8個(gè)精子 產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑 花粉 花粉 胚狀體 愈傷組織 從芽 從芽 生根 移栽 脫分化 分化 再分化 誘導(dǎo) 人工種子 又稱人造種子 合成種子或無(wú)性種子 就是將組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細(xì)胞胚 不定芽 頂芽 腋芽或小鱗莖等繁殖體 包裹在能提供營(yíng)養(yǎng)的膠囊 人造胚乳 里 再在外面包上一層具有保護(hù)功能和防止機(jī)械損傷的外膜 人造種皮 造成一種類似種子的結(jié)構(gòu) 能在一定的條件下萌發(fā)生長(zhǎng) 形成完整植株 影響花藥培養(yǎng)的因素 一 材料的選擇 花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株 一般 月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬 即月季的初花期 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素 一般來(lái)說(shuō) 在單核期 細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期 花藥培養(yǎng)成功率最高 為了挑選到單核期的花藥 通常選擇完全未開(kāi)放的花蕾 培養(yǎng)基的組成 小麥中為N6 馬鈴薯 月季中為MS 油菜中為B5培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)操作 一 材料的選取二 材料的消毒三 接種和培養(yǎng) 一 材料的選取 選擇花藥時(shí) 一般通過(guò)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期 最常用的方法有醋酸洋紅法 但是 某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色 需采用焙花青 鉻礬法 這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色 二 材料的消毒 1 花蕾用V V為70 的酒精浸泡30秒2 無(wú)菌水清洗3 無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 1 的氯化汞溶液中2 4分鐘 也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液 5 無(wú)菌水沖洗3 5次用于培養(yǎng)花藥 實(shí)際上多數(shù)未熟 由于它的外面有花萼 花瓣或穎片保護(hù) 通常處于無(wú)菌狀態(tài) 所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可 三 接種和培養(yǎng) 滅菌后花蕾 要在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣 并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上 在剝離花藥時(shí) 要盡量不損傷花藥 否則接種后 容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織 同時(shí)還要徹底去除花絲 因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成 通常每瓶接種花藥7 10個(gè) 溫度控制在25 左右 不需要光照 幼小植株形成后才需要光照 一般經(jīng)過(guò)20 30天培養(yǎng)后 會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂 長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體 將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上 以便進(jìn)一步分化出再生植株 如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體 則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株 必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi) 分別移植到新的培養(yǎng)基上 否則這些植株將很難分開(kāi) 在花藥培養(yǎng)中