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第十章 細胞核(nucleus)與 染色體(chromosome) 細胞核主要由核被膜、核纖層、染色質(zhì)、核仁及核體組成，細胞核是遺傳信息的貯存場所，在這里進行Gene復制轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄初產(chǎn)物的加工過程，從而控制cell的遺傳和代謝活動。第一節(jié) 核被膜與核孔復合體1，核被膜位于細胞核最外層，是細胞核與細胞質(zhì)之間的界膜。2，核被膜在細胞有絲分裂過程中有規(guī)律地解體與重建。3，核被膜的功能： 構成核、質(zhì)之間的天然選擇性屏障 避免生命活動的彼此干擾 保護DNA不受細胞骨架運動所產(chǎn)生的機械力的損傷 核質(zhì)之間的物質(zhì)交換與信息交流 4，核孔復合物：指包括核孔及其相關聯(lián)的環(huán)狀結構體系。其結構相當復雜，是以一組protein顆粒以特定的方式排列形成的結構，可以從核膜上分離出來，稱核孔復合物。包括內(nèi)外核膜和環(huán)狀顆粒等。中央為含水孔道，可見許5RD以下的小分子自由通過，分子量較大的物質(zhì)則可通過核孔復合體進行運輸。 它的結構組分：胞質(zhì)環(huán)、核質(zhì)環(huán)、輻、栓。5，親核蛋白：在cell質(zhì)基質(zhì)中合成，進入核內(nèi)執(zhí)行功能的protein，其尾部含有一核定位序列，可指導親核蛋白通過核孔復合體而進入核內(nèi)。第二節(jié)1，染色質(zhì)是指間期細胞核內(nèi)由DNA、組蛋白、非組蛋白及少量RNA組成的線性復合結構，是間期細胞遺傳物質(zhì)存在的形式。染色質(zhì)與染色體是在細胞周期不同的功能階段可以相互轉(zhuǎn)變的的形態(tài)結構。染色質(zhì)與染色體具有基本相同的化學組成，但包裝程度不同,構象不同。2，凡是具有細胞形態(tài)的所有生物其遺傳物質(zhì)都是DNA。 3，在真核細胞中，每條未復制的染色體包裝一條DNA分子，一個生物貯存在單倍染色體組中的總遺傳信息，稱為該生物的基因組。 4，基因組大小通常隨物種的復雜性而增加5，核小體要點：a、每個核小體單位包括200bp左右的DNA超螺旋和一個組蛋白八聚體以及一個分子的組蛋白H1.b、組蛋白八聚體構成核小體的盤狀核心顆粒，相對分子質(zhì)量100000，由4個異二聚體組成，包括兩個H2A.H2B和兩個H3.H4c、146bp的DNA分子超螺旋盤繞組蛋白八聚體1.75圈。組蛋白H1在核心顆粒外結合額外20bpDNA，鎖住核小體DNA的進出端，起穩(wěn)定核小體的作用 d、兩個相鄰核小體之間以連接DNA相連，典型長度60bp，不同物種值不等 e、組蛋白與DNA之間的相互作用主要是結構性的，基本不依賴核苷酸的序列f、核小體沿DNA的定位受不同因素的影響。6，染色質(zhì)分類：按形態(tài)結構和染色性能分：常和異染色體，異染色體又分為結構性和兼性染色質(zhì)。按染色體的活性分活性和非活性染色質(zhì)。7，常染色質(zhì)：指間期核內(nèi)染色質(zhì)纖維壓縮程度低，處于伸展狀態(tài)，用堿性染粒色時著色淺的那些染色質(zhì)。8，異染色質(zhì)：指間期核內(nèi)，染色質(zhì)纖維壓縮程度高，處于聚縮狀態(tài)的，用堿性染色體染色較深的那些染色質(zhì)，分結構和兼性異染色質(zhì)。9，活性染色質(zhì)：指具有轉(zhuǎn)錄活性的染色質(zhì)，由于其核小體構型發(fā)生變化，往往具有疏構的染色質(zhì)結構，從而便于轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和順式調(diào)控元件的結合和RNA聚合酶在轉(zhuǎn)錄模板上的滑動。10，DNaseI超敏感位點：對染色質(zhì)進行低DNaseI處理，切割將先發(fā)生在少數(shù)特異性位點上，這些特異性位點叫做DNaseI超敏感位點，實際上是一段長100-200bp的DNA序列特異暴露的染色質(zhì)區(qū)域，富含HMG14，HMG17蛋白。11，基因座控制區(qū)：基因座控制區(qū)為染色體DNA上一種順式作用元件，具有穩(wěn)定染色質(zhì)疏松結構的功能。12，隔離子：能防止處于阻抑狀態(tài)與活化狀態(tài)的染色質(zhì)結構域之間的結構特點向兩側(cè)擴展的染色質(zhì)DNA序列，表明基因表達有位置效應。13，反式作用因子：為一種蛋白或激素復合物，既能與合成自身DNA上的調(diào)控序列結合起作用，也能與不同DNA上的調(diào)控序列結合，調(diào)節(jié)不同的基因表達。14，順式作用元件：DNA上的一種序列，本身不編碼protein，僅僅提供一個作用位點，參與基因表達的調(diào)控，常與特殊的protein編碼區(qū)連在一起，通過與反式作用因子相互作用而調(diào)節(jié)基因的表達。第四節(jié)1，染色體：細胞在有絲分裂時遺傳物質(zhì)存在的特定形式，是間期細胞染色質(zhì)結構緊密包裝的結果，可被堿性染料濃染的棒狀結構。染色體:指細胞在有絲分裂或減數(shù)分裂過程中, 由染色質(zhì)聚縮而成的棒狀結構。 2， 染色體組：指配子中所含的染色體或Gene的總和，是把各種生物為保持其生活機能協(xié)調(diào)而不可或缺的一組染色體稱作一個染色體組3，染色體：A著絲粒：在初級縊痕處兩條染色單體相連處的中央部位，即主縊痕的內(nèi)部結構B，動粒：在初級縊痕處兩條染色單體的外側(cè)表層部位的特殊結構，又稱著絲點。C，次縊痕：除主縊痕外，在chromosome上其他的淺染縊縮部位，此處部分DNA松懈，可形成核仁組織區(qū)。D，核仁組織區(qū)：是細胞核特定chr的次縊痕處，含有rRNA基因的一段染、 色 體區(qū)域，與核仁的形成有關。E. 隨體：位于chr末端的球形染色體片段，通過次縊痕區(qū)與chr主體部分相連，可分為端隨體。F.端粒：為染色體的兩個末端特化部位，位于真核生物染色體兩臂端的特殊染色粒，亦稱末端染色粒。4，染色體DNA的三種功能元件：A.自主復制DNA序列：DNA復制的起點確保chr在細胞膜周期中能夠自我復 制，為順式作用元件的一種，從而保護chr在世代傳遞中具有穩(wěn)定性和連續(xù)性。B.著絲粒DNA序列：與染色體的分離有關，是兩個相鄰的核心區(qū)，80-90bpAT 區(qū)和11bp保守區(qū)，確保chr在cell分裂時能被平均分配到兩個cell中去。C.端粒DNA序列：真核cell染色體端粒DNA序列是由端粒酶合成后添加到染色體末端，保證染色體的獨立性和遺傳穩(wěn)定性。5，核型：指染色體組在有絲分裂中期的表型，包括染色體數(shù)目，大小，形態(tài)特征的總和。6，巨大染色體：比普通染色體顯著巨大的染色體的總稱，包括雙翅目昆蟲幼蟲組織cell內(nèi)的多線染色體和某些動物的卵母cell和果蠅的精母cell內(nèi)的燈刷染色體。a.染色單體反復縱裂而形成許多線狀染色單體，它們彼此不分離，并行排列且 同源染色體間配對，緊密結合形成體積很大的多線染色體。b.燈刷染色體：為卵母cell進行減數(shù)分裂時停留在雙線期的染色體，為一個二價體，有四條染色單體，沿染色體的主軸側(cè)面有許多環(huán)狀突出物，整染色好似燈刷一樣，故稱燈刷染色體。第五節(jié) 1，核仁：是真核cell間期核內(nèi)無包膜折射率較強的球形小體。由纖維中心，致密纖維中心，顆粒組分，核仁染色質(zhì)，核仁基質(zhì)組成。核仁是rRNA合成和加工以及核糖體亞單位的裝配場所。2，核仁： a.纖維中心（Fc）：RNA基因的儲存位點。 b.致密纖維中心：轉(zhuǎn)錄在Fc和DFC交界處發(fā)生，并在此進行初加工。 c.顆粒組分：為核仁的主要結構，由核糖糖蛋白（RNP）顆粒構成。為正在加工成熟的核糖體亞單位前體顆粒。 d.核仁相隨染色質(zhì)：分核仁周邊染色質(zhì)和核仁內(nèi)染色質(zhì)。 e.核仁基質(zhì)：無定形的蛋白質(zhì)性質(zhì)的液體基質(zhì)。思考題：P364，1，2，5，6，7，9第十一章 核糖體(ribosome) 核糖核蛋白體,簡稱核糖體。核糖體是一種核糖核蛋白顆粒，是細胞內(nèi)合成蛋白質(zhì)、沒有膜包被的細胞器，其功能是按照mRNA的信息將氨基酸高效精確地合成蛋白質(zhì)多肽鏈。第一節(jié)、1，核糖體的基本類型：（附著核糖體。游離核糖體。70S的核糖體 。80S的核糖體） 主要成分 r蛋白質(zhì)：40%，核糖體表面；rRNA:60%,，核糖體內(nèi)部。按存在的部位:有三種類型核糖體，細胞質(zhì)核糖體、線粒體核糖體、葉綠體核糖體。2，核糖體結構與功能的分析方法：離子交換樹脂可分離純化各種r蛋白；純化的r蛋白與純化的rRNA進行核糖體的重組裝，顯示核糖體中r蛋白與rRNA的結構關系 雙向電泳技術可顯示出E.coli核糖體在裝配各階段中，與rRNA結合的蛋白質(zhì)的類型雙功能的交聯(lián)劑和雙向電泳分離可用于研究r蛋白在結構上的相互關系 電鏡負染色與免疫標記技術結合，研究r蛋白在核糖體的亞單位上的定位。 對rRNA，特別是對16S rRNA結構的研究 70S核糖體的小亞單位中rRNA與全部的r蛋白關系的空間模型 同一生物中不同種類的r蛋白的一級結構均不相同，在免疫學上幾乎沒有同源性。不同生物同一種類r蛋白之間具有很高的同源性， 并在進化上非常保守。 3， 核糖體上具有一系列與蛋白質(zhì)合成有關的結合位點與催化位點：a、與mRNA結合的位點 ；b、A位點 c、P位點 d、 E位點 e與肽酰tRNA從A位點轉(zhuǎn)移到P位點有關的轉(zhuǎn)移酶（即延伸因子EF-G)的結合位點 f、肽酰轉(zhuǎn)移酶的催化位點 g與蛋白質(zhì)合成有關的其他起始因子、延伸因子和終止因子的結合位點 。,4，在核糖體中rRNA是起主要作用的結構成分，其主要功能是：具有肽酰轉(zhuǎn)移酶的活性；為tRNA提供結合位點(A位點、P位點和E位點)；為多種蛋白質(zhì)合成因子提供結合位點；在蛋白質(zhì)合成起始時參與同mRNA選擇性地結合,以及在肽鏈的延伸中與mRNA結合；核糖體大小亞單位的結合、校正閱讀(proofreading)、無意義鏈或框架漂移的校正、以及抗菌素的作用等都與rRNA有關。 第二節(jié) 聚核糖體與蛋白質(zhì)的合成1，核糖體在細胞內(nèi)并不是單個獨立地執(zhí)行功能，而是由多個甚至幾十個核糖體串連在一條mRNA分子上高效地進行肽鏈的合成，這種具有特殊功能與形態(tài)結構的核糖體與mRNA的聚合體稱為多聚核糖體。, 2，多聚核糖體的生物學意義：細胞內(nèi)各種多肽的合成，不論其分子量的大小 或是mRNA的長短如何，單位時間內(nèi)所合成的多肽分子數(shù)目都大體相等。 同一條mRNA被多個核糖體同時翻譯成蛋白質(zhì),大大提高了蛋白質(zhì)合成的速率. 以多聚核糖體的形式進行多肽合成，對mRNA的利用及對其濃度的調(diào)控更為經(jīng)濟和有效。 更重要的是減輕了細胞核的負荷, 減少了基因的拷貝數(shù), 也減輕了細胞核進行基因轉(zhuǎn)錄和加工的壓力。思考題：P3831，3，5，6第十二章 細胞增殖及其調(diào)控細胞增殖(cell proliferation)的意義：細胞增殖(cell proliferation)是細胞生命活動的重要特征之一,是生物繁育的基礎。單細胞生物細胞增殖導致生物個體數(shù)量的增加。多細胞生物由一個單細胞(受精卵)分裂發(fā)育而來，增殖是多細胞生物繁殖基礎。成體生物仍然需要細胞增殖，主要取代衰老死亡的細胞，維持個體細胞數(shù)量的相對平衡和機體的正常功能。 機體創(chuàng)傷愈合、組織再生、病理組織修復等，都要依賴細胞增殖。第一節(jié) 1，細胞周期：細胞從一次有絲分裂結束到下一次有絲分完成所經(jīng)歷的一個有序過程。其間細胞遺傳物質(zhì)和其他內(nèi)含物分配給子細胞。 細胞沿著G1SG2MG1周期性運轉(zhuǎn)，在間期細胞體積增大(生長)，在 M 期細胞先是核分裂，接著胞質(zhì)分裂，完成一個細胞周期間期(interphase)。2，細胞周期時間：不同細胞的細胞周期時間差異很大；S+G2+M 的時間變化教小，細胞周期時間長短主要差別在G1期；有些分裂增殖的細胞缺乏G1、G2期。3 細胞周期中不同時相及其主要事件： G1期 S 期 G2期 M 期 G1期：G1 期是從有絲分裂完成到DNA復制前的一段時期, 又叫合成前期。此期主要合成rRNA、蛋白質(zhì)、脂類和碳水化合物。在G1期的后期, DNA合成酶的活性大大增加。G1期進入S期與S期激活因子有關。如將S期和早G1期細胞融合,S期細胞可以誘導G1期細胞提前進入S期, 表明早G1期細胞尚未出現(xiàn)S期激活因子。 G2期：是DNA合成的后期。在這一時期, 主要是大量合成ATP、RNA、蛋白質(zhì), 包括微管蛋白和成熟促進因子MPF(maturationpromoting factor)等，為有絲分裂 作準備。DNA復制完成，在G2期合成一定數(shù)量的蛋白質(zhì)和RNA分子。此時細胞核內(nèi)DNA的含量增加一倍，由G1期的2n變成了4n，即每個染色體含有4個拷貝的DNA.，其他結構物質(zhì)和相關亞細胞結構也已進行了進入M期的必要準備。 M 期-： M期即細胞分裂期，真核細胞的細胞分裂主要包括兩種方式，即有絲分裂(mitosis)和減數(shù)分裂(meiosis)。遺傳物質(zhì)和細胞內(nèi)其他物質(zhì)分配給子細胞。M期是從細胞分裂開始到結束所經(jīng)歷的過程, 也就是從染色體的凝縮、分離到平均分配到兩個子細胞為止。分裂后, S期合成的DNA減半。這一期的特點是RNA合成停止, 蛋白質(zhì)合成減少, 以及染色體高度螺旋化。 S期 即DNA合成期。細胞周期中S期是最重要的一個時期, 在此期, 除了DNA合成外, 同時還會合成組蛋白, DNA復制所需的酶都在這一時期合成。 在S期, 組蛋白的mRNA水平可增加50倍。也就是說, DNA的合成和組蛋白的合成在時間上是同步的, 在密度上是相應的, 從而使新合成的DNA得以及時包裝成核小體。另外, 推測組蛋白起到DNA復制延長因子的作用, 沒有組蛋白的合成, DNA的復制就會停止。此外, 還發(fā)現(xiàn)DNA復制時, 不同序列的復制先后是不同的: 常染色質(zhì): 先; 異染色質(zhì): 后;能轉(zhuǎn)錄的DNA: 先; 不能轉(zhuǎn)錄的DNA: 后;GC含量高: 先; AT含量高: 后;4， 細胞周期長短測定： 脈沖標記DNA復制和細胞分裂指數(shù)觀察測定法 流式細胞儀測定法(Flow Cytometry)縮時攝像技術，可以得到準確的細胞周期時間及分裂間期和分裂期的準確時間。5，細胞同步化(synchronization)是指在自然過程中發(fā)生或經(jīng)人為處理造成的細胞周期同步化，前者稱自然同步化，后者稱為人工同步化。自然同步化如有一種粘菌的變形體plasmodia，某些受精卵早期卵裂 人工同步化方法： 選擇同步化有絲分裂選擇法、細胞沉淀分離法。 誘導同步化DNA合成阻斷法、中期阻斷法、 藥物誘導法、饑餓法。 1）有絲分裂選擇法：使單層培養(yǎng)的細胞處于對數(shù)增殖期，此時分裂活躍。有絲分裂細胞變圓隆起，與培養(yǎng)皿的附著性低，此時輕輕振蕩，M期細胞脫離器壁，懸浮于培養(yǎng)液中，收集培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液，依法繼續(xù)收集，則可獲得一定數(shù)量的中期細胞。其優(yōu)點是，操作簡單，同步化程度高，細胞不受藥物傷害，缺點是獲得的細胞數(shù)量較少。（分裂細胞約占1%2%）2）細胞沉降分離法：不同時期的細胞體積不同，而細胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比，因此可用離心的方法分離。其優(yōu)點是可用于任何懸浮培養(yǎng)的 細 胞，缺點是同步化程度較低。藥物誘導法：1）DNA合成阻斷法：選用DNA合成的抑制劑，可逆地抑制DNA合成，而不影響其他時期細胞的運轉(zhuǎn)，最終可將細胞群阻斷在S期或G/S交界處。5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使細胞同步化。其中高濃度TDR對S期細胞的毒性較小，因此常用TDR雙阻斷法誘導細胞同步化：在細胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量TDR，（Hela，2mol/L；CHO，7.5mol/L）。S期細胞被抑制，其它細胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)，最后停在G1/S交界處。移去TDR。洗滌細胞并加入新鮮培養(yǎng)液、細胞又開始分裂。當釋放時間大于TS時，所有細胞均脫離S期，再次加入過量TDR，細胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)至G1/S交界處，被過量TDR抑制而停止。優(yōu)點是同步化程度高，適用于任何培養(yǎng)體系。可將幾乎所有的細胞同步化。缺點是產(chǎn)生非均衡生長，個別細胞體積增大。2）中期阻斷法：利用破壞微管的藥物將細胞阻斷在中期，常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺，后者毒性較少。優(yōu)點是無非均衡生長現(xiàn)象，缺點是可逆性較差。6，特異的細胞周期是指那些特殊的細胞所具有的與標準的細胞周期相比有著鮮明特點的細 胞周期。 例如：爪蟾早期胚胎細胞的細胞周期；細菌的細胞周期； 酵母細胞的細胞周期 ；植物細胞的細胞周期；第二節(jié) 細胞增殖方式：無絲分裂，又稱直接分裂、有絲分裂、減數(shù)分裂。1，胞質(zhì)分裂開始于細胞分裂后期，在赤道板周圍細胞表面下陷，形成環(huán)形縊縮，稱為分裂溝(furrow)。分裂溝的位置與紡錘體極性微管和鈣離子濃度升高的變化有關 胞質(zhì)分裂開始時，大量肌動蛋白和肌球蛋白在中體處組裝成微絲并相互組成微絲束，環(huán)繞細胞，稱為收縮環(huán)（contractile ring)。收縮環(huán)收縮、收縮環(huán)處細胞膜融合并形成兩個子細胞。 2，復制：主要指遺傳物質(zhì)的自我復制。3、聯(lián)會：指在減數(shù)分裂中同源染色體相互配對的現(xiàn)象，一般發(fā)生在第一次分裂前期的偶線期。4、限制點：G1期cell對一些環(huán)境因素有一敏感點，可以限制細胞通過周期，所以稱其為限制點，簡稱元點，是控制cell增殖的關鍵5、著絲點：在主縊痕處2個染色單體的外側(cè)表層部位的特殊結構，它與染色體微管接觸， 是微管蛋白的組織中心，又稱動粒。6、著絲粒：主縊痕外2條染色單體互相聯(lián)系在一起的特殊部位。7、赤道板：細胞有絲分裂中期，染色體的著絲粒準確地排列在紡錘體的赤道平面上，因此叫做赤道板。8、紡錘體：減數(shù)和有絲分裂中期，細胞質(zhì)中出現(xiàn)的紡錘形結構，由能收縮的微管和微絲縱向成束排列而成。9、同源染色體：形狀、大小一般相同，帶有相應的遺傳信息，兩者是成對的染色體。10姐妹染色單體：染色體在有絲分裂的間期進行自我復制，形成由一個著絲點連接著的兩條完全相同的染色單體。11,有絲分裂：真核生物cell在形成染色體和紡錘體等絲狀結構的同時發(fā)生復雜的核內(nèi)變化，故稱有絲分裂。前期：染色質(zhì)濃縮形成有絲分裂染色體、細胞骨架解聚紡錘體開始裝配 前中期：核膜破裂、核纖層解聚、 紡錘體組裝。 中期：所有染色體排列到赤道面上。 后期：動粒微管去裝備變短，染色體向兩極運動。末期：動粒微管消失，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重新形成。12, 減數(shù)分裂：是一種特殊形式的有絲分裂，僅發(fā)生于有性生殖細胞形成過程中的某個階段。特點：一次DNA復制，兩次細胞分裂，染色體減半；S期時間較長；配對聯(lián)會基因重組；同源染色體配對在中極板上，第一次分裂同源染色體分開。階段： 前期I(細線期、偶線期、粗線期、雙線期、終變期）、中期I、后期I、期I、減數(shù)分裂II 意義：a、確保世代間遺傳的穩(wěn)定性 b、增加變異機會，確保生物的多樣性，增強生物適應環(huán)境變化的能力 c、減數(shù)分裂是生物有性生殖的基礎，是生物遺傳、生物進化和生物多樣性的重要基礎保證。第三節(jié) 1，MPF即細胞促分裂因子 ，它是一種使多種底物蛋白磷酸化的蛋白激酶； 由M期Cyclin周期蛋白，Cdk周期蛋白依賴激酶(Cyclin-dependent protein kinase)形成的復合物。2，MPF=CDK1=p34cdc2+cyclinB【MPF即CDK1激酶：由P34cdc2蛋白和周期蛋白B結合而成?！?，G2向M期轉(zhuǎn)化受CDK1激酶調(diào)控，M期向后期轉(zhuǎn)化受APC調(diào)控，G1期向S期轉(zhuǎn)化受 G1-CDK激酶調(diào)控。思考題P439：1，3，4，9第十三章 細胞衰老與凋亡 第一節(jié) 細胞衰老1，Hay Hick界限：關于cell增殖能力和壽命是有限的觀點。Cell，至少是培養(yǎng)的 細胞，不是不死的，而是有一定的壽命，它們的增殖能力不是無限的，而是有一定的界限，這個界限稱Hay Hick界限。2、動物細胞死亡：凋亡、壞死、自噬。 A，細胞凋亡是一個主動的由基因決定的自動結束生命的過程，所以也常常稱為細胞編程死亡（programmed cell death, PCD）。凋亡細胞將被吞噬細胞吞噬。包括：凋亡的起始；凋亡小體的形成；凋亡小體逐漸為鄰近的cell吞噬并消化。生物學意義：細胞凋亡對于多細胞生物個體發(fā)育的正常進行，自穩(wěn)平衡的保持以及抵御外界各種因素的干擾方面都起著非常關鍵的作用。例如：蝌蚪尾的消失，骨髓和腸的細胞凋亡；脊椎動物的神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育；發(fā)育過程中手和足的成形過程。 凋亡的特征：DNA發(fā)生核小體間的斷裂，電泳時形成了特征性的梯狀條帶， DNA ladders。細胞凋亡的檢測：形態(tài)學觀測：染色法、透射和掃描電鏡觀察DNA電泳：DNA片段就呈現(xiàn)出梯狀條帶TUNEL測定法，即DNA斷裂的原位末端標記法彗星電泳法（comet assay）單個細胞懸浮裂解電泳熒光染色調(diào)亡細胞中形成的DNA降解片段，在電場中泳動速度較快，使細胞核呈現(xiàn)出一種彗星式的圖案；而正常的無DNA斷裂的核在泳動時保持圓球形。流式細胞分析根據(jù)凋亡細胞DNA斷裂和丟失，采用碘化丙啶使DNA產(chǎn)生激發(fā)熒光，用流式細胞儀檢出凋亡的亞二倍體細胞，同時又能觀察細胞的周期狀態(tài)。 誘導細胞凋亡的因子：物理性因子，包括射線（紫外線，等）激冷，激熱如（激刺度溫的和溫較，）等線射化學及生物因子：包括活性氧基團和分子，DNA和蛋白質(zhì)合成的抑制劑，激素，細胞生長因子，腫瘤壞死因子（TNF抗，）Fas/Apo-1/CD95抗體等B，細胞壞死：機體局部，組織、器官或細胞的死亡稱壞死。細胞壞死性死亡：由于某些外界因素造成cell的急速死亡稱cell壞死性死亡，常引起炎癥反應。C，細胞凋亡與壞死(necrosis)：細胞凋亡過程中，細胞質(zhì)膜反折，包裹斷裂的染色質(zhì)片段或細胞器，然后逐漸分離，形成眾多的凋亡小體（apoptotic bodies），凋亡小體則為鄰近的細胞 所吞噬。 整個過程中，細胞質(zhì)膜的整合性保持良好，死亡細胞的內(nèi)容物不會逸散到胞外環(huán)境中去，因而不引發(fā)炎癥反應。細胞壞死時，細胞質(zhì)膜發(fā)生滲漏，細胞內(nèi)容物，包括膨大和破碎的細胞器以及染色質(zhì)片段，釋放到胞外，導致炎癥反應。第二節(jié)、1，細胞衰老：指體外培養(yǎng)的正常細胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂后，停止分裂，細胞形態(tài)和生理代謝活動發(fā)生顯著改變的現(xiàn)象。2，細胞核衰老是核膜內(nèi)折；糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少；線粒體數(shù)量減少體積變大； 密體累積；膜系統(tǒng)發(fā)生變化。思考P467：1，2，3，5第十四章 細胞分化與基因表達調(diào)控第一節(jié)1，細胞分化(cell differentiation)：在個體發(fā)育中，由一種相同的細胞類型經(jīng)細胞分裂后逐漸在形態(tài)、結構和功能上形成穩(wěn)定性差異，產(chǎn)生各不相同的細胞類群的過程。細胞分化是多細胞生物發(fā)育的基礎與核心；細胞分化的關鍵在于特異性蛋白質(zhì)合成；合成特異性蛋白質(zhì)實質(zhì)在于組織特異性基因在時間和空間上的差異性表達；差異性