卵巢上皮性癌組織中p15、p16基因突變及其臨床意義.doc

卵巢上皮性癌組織中p15、p16基因突變及其臨床意義中華婦產(chǎn)科雜志 2000年第7期第35卷 論著摘要作者：李紅霞江森李文軍單位：李紅霞（現(xiàn)在北京鐵路總醫(yī)院婦產(chǎn)科）；江森（250021 濟南，山東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科）；李文軍（重慶第三軍醫(yī)大學婦產(chǎn)科）p15、p16基因是近年來發(fā)現(xiàn)和分離的兩個抑癌基因。研究表明，p15、p16基因突變與人類腫瘤的發(fā)生有關，在多種原發(fā)性腫瘤及其腫瘤細胞系中均存在p15、p16基因純合性缺失與點突變1。本研究旨在通過檢測卵巢上皮性癌（OEC）中p15、p16基因純合性缺失與點突變，探討其在OEC發(fā)生、發(fā)展中的作用，并評價其可否作為腫瘤標記物應用于OEC的診斷、監(jiān)測及預后的判斷。一、資料與方法1.研究對象：43例OEC、11例卵巢良性上皮性瘤及4例卵巢交界性上皮性瘤取自山東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院、山東省立醫(yī)院及解放軍第九醫(yī)院婦產(chǎn)科19951997年住院的手術患者。OEC患者平均年齡53歲（2974歲）；病理類型包括，漿液性囊腺癌23例、粘液性囊腺癌12例、未分類癌6例及子宮內膜樣癌2例；按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟1988年手術病理分期，早期（期）12例、晚期（期）31例；按世界衛(wèi)生組織標準，病理分級為G1G2級32例、G3級11例；同時伴有腹膜、鄰近器官或淋巴結等轉移者29例?；颊呔鶠槌醮问中g，術前均未予化學治療（化療）和放射治療（放療）。卵巢良性上皮性瘤患者平均年齡46 歲（2972歲），其中漿液性囊腺瘤6例，粘液性囊腺瘤5例。卵巢交界性上皮瘤患者平均年齡34歲（2159歲），其中漿液性及粘液性腫瘤各2例。2.方法：（1）標本制備及DNA提?。喝』颊吣[瘤及瘤旁組織（有轉移者同時取轉移灶組織）共145份，以組織包埋劑包埋，立即置于液氮中速凍，然后轉移至-80冰箱中保存。使用時先制成5 m厚的冰凍切片，行顯微分離腫瘤組織，對照蘇木素伊紅染色，于光學顯微鏡下觀察，選擇腫瘤細胞富集區(qū)（腫瘤細胞與間質細胞比例70%），以手術刀片分離、刮取腫瘤細胞并提取DNA。（2）p15、p16基因純合性缺失和點突變的檢測及判斷標準2：采用多聚酶鏈反應及瓊脂糖凝膠電泳方法檢測p15、p16基因純合性缺失，以多聚酶鏈反應單鏈構象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)檢測p15、p16基因點突變。判斷標準：p15、p16基因純合性缺失的標準為腫瘤組織p15（或16）與正常組織p15（或16）的比值0.25 ；PCR-SSCP分析p15、p16基因點突變， 則是與自體正常組織對比,腫瘤組織出現(xiàn)異常遷移帶者表示有基因點突變。3.統(tǒng)計學處理：采用SAS軟件作2檢驗（四格表確切概率法）及相關分析。二、結果1. 卵巢良性、交界性上皮性腫瘤及OEC癌旁組織中p15、p16基因純合性缺失和點突變的檢測：卵巢良性、交界性上皮性腫瘤及OEC癌旁組織中未檢測到p15、p16基因純合性缺失和點突變，OEC組織中p15基因純合性缺失率為46.5%（20/43），與良性腫瘤比較，差異有顯著性（P0.01）。OEC組織中p15基因純合性缺失包括E1、E2共同缺失4例，占缺失總數(shù)的20.0%;僅E1缺失10例;僅E2缺失者6例。PCR-SSCP檢測未發(fā)現(xiàn)p15基因點突變。OEC組織中p16基因純合性缺失率及點突變率分別為16.0%（7/43）及7.0%（3/43），其中E1缺失者5例，E1、E2、E3完全缺失者1例，E2、E3共同缺失者1例。p16基因發(fā)生點突變的3例均位于E2，且表現(xiàn)為雜合性。p16基因的純合性缺失及點突變率，OEC組織與良性、交界性腫瘤組織比較，差異均無顯著性(P0.05)。OEC組織中p15、p16基因總變異率（包括純合性缺失率及點突變率）為70.0%。在p16基因突變（包括純合性缺失與點突變）的10例中，9例同時存在p15基因的純合性缺失；而在p16基因正常的33例中，僅有1例有p15基因的純合性缺失，兩者比較，差異有顯著性（P0.01）。p15、p16基因突變之間存在正相關性（r=0.48）。2. p15、p16基因突變與臨床病理：病理分級G3級中p15基因的純合性缺失率為63.6%，較G1、G2級的40.0%有升高趨勢，但兩者比較,差異無顯著性(P0.05)。p15、p16基因變異多發(fā)生于漿液性囊腺癌，與其他類型OEC比較，差異也無顯著性(P0.05)。見表1。腫瘤轉移灶組織中p15、 p16基因純合性缺失率分別為64.0%及38.5%,與原發(fā)灶比較，差異無顯著性(P0.05)。表1p15、p16 基因突變與臨床病理參數(shù)的關系類別總例數(shù) p15基因缺失P值p16基因突變P值例數(shù) 百分率（%）例數(shù) 百分率（%）手術病理分期早期12 5 41.7216.6晚期31 15 48.40.058 18.6 0.05病理分級G1G2級32 1340.6 7 21.9G3級11 7 63.60.053 27.3 0.05 淋巴結轉移有 29 1241.37 24.1無 14 857.10.053 21.40.05病理類型漿液性囊腺癌 23 13 56.5 6 26.0粘液性囊腺癌 123 25.0 3 25.0未分類癌 6 4 4/6*1 1/6*子宮內膜樣癌2 0 0/2*0.050 0/2*0.05*例數(shù)少于10，不計百分率三、討論1.p15、p16基因突變與OEC形成和發(fā)展的關系：本研究結果顯示，OEC組織中p15、p16基因總突變率高達70.0%，且p15、p16基因突變之間存在正相關，提示，p15、p16基因突變是OEC形成中的一個普遍現(xiàn)象，兩者共同參與了OEC發(fā)生、發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，p15基因變異的形式為純合性缺失而非點突變，表明純合性缺失為該基因失活的主要方式，與其他作者的報道一致3。值得注意的是，本組資料中的3例p16基因點突變均為雜合性，其他作者亦有類似報道，提示，p16的1個等位基因是因突變而失活，而另外1個等位基因失活可能是由于其他機理，如甲基化作用、雜合性缺失；或如p53基因一樣，p16亦為顯性基因，其中1個等位基因突變，即引起細胞周期正常演進的紊亂4，其確切機理尚有待于進一步的探討。2.p15、p16基因突變的臨床意義：本研究結果顯示，在卵巢良性及交界性上皮性腫瘤中未檢測到p15、p16基因純合性缺失和點突變，提示，p15、p16基因變異是惡性腫瘤的特征性改變，有望作為腫瘤標記物用于OEC的診斷及與良性腫瘤的鑒別診斷中。因p15、p16基因突變率在患者各預后影響因素如臨床分期、病理分級以及有無腫瘤轉移等之間的差異無顯著性，故其價值尚有待于進一步探討。參考文獻1，F(xiàn)ujita M, Enomoto T, Haba T, et al. Alteration of p16 gene and p15 genes in human epihtelial ovarian tumors. Int J Cancer,1997, 74:148-155.2，Wong YF, Chung TK, Cheung TH, et al. P16INK4A and p15INK4B alterations in primary gynecologic malignancy. Gynecol Oncol，1997, 65:319-324.3，Roesler JM, Livignston EH, Strivatsan E, et al. Deletion of p15(MTS2) in head ang neck squamous cell carcinomas. J Surg Res, 1998, 77:50-54.4，Pinyol M, Francese C, Bea S, et al. P16INK4A gene