（黃秋明）科技創(chuàng)新項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告書修改

項(xiàng)目類別項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào)B. 理科附件3 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)項(xiàng)目結(jié)題書項(xiàng)目名稱： 兩種氨基糖苷抗生素抗體制備研究 申 請(qǐng) 人： 黃秋明、陳旭彥 所在院部： 食 品 學(xué) 院 專業(yè)年級(jí)： 03食品科學(xué)與工程(質(zhì)量與安全方向) 聯(lián)系電話：指導(dǎo)教師: 雷紅濤 職稱 講師 立項(xiàng)日期： 二五 年 四 月 七 日 結(jié)題日期： 二六 年 四 月 十 日華南農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)項(xiàng)目指導(dǎo)中心 填 表 說 明 一、 填寫結(jié)題報(bào)告書前，請(qǐng)先咨詢指導(dǎo)教師或有關(guān)專業(yè)教師。申請(qǐng)書的各項(xiàng)內(nèi)容要求實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫。表達(dá)明確、嚴(yán)謹(jǐn)，一律要求用打印稿件。 二 、申請(qǐng)書為A4復(fù)印紙，于左側(cè)裝訂成冊(cè)。一式三份（至少一份原件），由指導(dǎo)教師和所在院（部）審查并簽署意見后報(bào)大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)項(xiàng)目指導(dǎo)中心。三 、一級(jí)標(biāo)題三號(hào)宋體加粗，用“一、二、三”標(biāo)示；二級(jí)標(biāo)題四號(hào)楷體加粗，用“（一）（二）（三）”標(biāo)示；三級(jí)標(biāo)題四號(hào)仿宋加粗，用“1、2、3”標(biāo)示；四級(jí)標(biāo)題四號(hào)仿宋，用“”標(biāo)示。示例：一、XXXX課題立項(xiàng)與研究的目的意義（一）XXXX課題立項(xiàng)與研究的目的的意義1、XXXX課題立項(xiàng)與研究的目的意義XXXX課題立項(xiàng)與研究的目的意義四、如表格不夠，可以加附頁(yè)。一、簡(jiǎn)表項(xiàng)目簡(jiǎn)況項(xiàng)目名稱兩種氨基糖苷抗生素抗體制備研究項(xiàng)目類別 B、理科類；申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)1500元起止年月2005.4-2006.4項(xiàng)目組成員姓 名性別出生年月年級(jí)專業(yè)班級(jí)所在學(xué)院上學(xué)年綜合測(cè)評(píng)分項(xiàng)目中的分工本人簽字黃秋明男1983.903食工4班食品學(xué)院抗原合成陳旭彥女1984.1103食工4班食品學(xué)院抗體制備指導(dǎo)教師情況姓名雷紅濤性別男學(xué)位碩士職稱講師研究方向食品安全免疫快速檢測(cè)授課名稱食品化學(xué)綜合實(shí)驗(yàn) 高級(jí)食品分析技術(shù) 食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)項(xiàng)目簡(jiǎn)介 氨基糖苷類抗生素經(jīng)常以各種途徑殘留在肉、蛋、奶等動(dòng)物源性食品中，不但威脅人們身體健康，而且損害到我國(guó)國(guó)際貿(mào)易利益。本課題以慶大霉素和鏈霉素為對(duì)象，研究不同方法合成其人工抗原，通過紫外光譜法等方法鑒定人工抗原，進(jìn)一步研制其抗體，為建立氨基糖苷類抗生素免疫快速檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)，為我國(guó)食品安全控制做出貢獻(xiàn)。二、項(xiàng)目研究的內(nèi)容與方法1 研究?jī)?nèi)容1) 人工抗原合成和鑒定：包括慶大霉素和鏈霉素的衍生或修飾改造、與載體蛋白連接，偶聯(lián)物純化、鑒定方法研究等。2) 抗體研制：用合成的人工抗原，選擇合適的免疫方式免疫動(dòng)物，研制抗慶大霉素和鏈霉素多克隆抗體。2 研究方法1) 人工抗原合成：慶大霉素人工抗原：方法一（EDC法）：一定量的慶大霉素和BSA(免疫原載體)或OVA（包被抗原載體）溶解在1ml水中，逐滴加入一定量的EDC，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，4度下用PBS進(jìn)行充分透析。方法二（GDA法）：將一定量的BSA溶于PBS緩沖液中，加入一定量的慶大霉素及新鮮制備的1%的戊二醛，4度下反應(yīng)3小時(shí)，加入一定量的硼氫化鈉，4度下反應(yīng)1小時(shí)，透析。鏈霉素人工抗原：方法一（ACC法）：一定量的NHS與丁二酸酐溶于二氯甲烷中，加入三乙胺后室溫?cái)嚢?小時(shí)，溶液用乙酸乙酯萃取有機(jī)相后干燥。將一定量的干燥產(chǎn)物溶解于DMF中，加入一定量的BSA（溶于PBS中），室溫反應(yīng)1.5小時(shí)，超濾后，用MES緩沖液接收滲余物，加入一定量的鏈霉素（溶于MES中）及EDC，室溫反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)液超濾后用PBS緩沖液接收。方法二（GDA法）：將一定量的BSA溶于PBS緩沖液中，加入一定量的鏈霉素及新鮮制備的1%的戊二醛，4度下反應(yīng)3小時(shí)，加入一定量的硼氫化鈉，4度下反應(yīng)1小時(shí)，透析。方法三（EDC法）：一定量的鏈霉素和BSA(免疫原載體)或OVA（包被抗原載體）溶解在1ml水中，逐滴加入一定量的EDC，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，4度下用PBS進(jìn)行充分透析。包被抗原制備方法同上，僅將BSA換作OVA。2) 人工抗原鑒定：偶聯(lián)產(chǎn)物以透析分離純化，并計(jì)算其偶聯(lián)比。3) 抗體制備：常規(guī)法制備鼠多克隆抗體。用三種人工免疫抗原分別免疫小鼠，采用間接ELISA法篩選。三、項(xiàng)目研究過程與資料查閱情況1 研究過程采取上述方法，先微量后常量的方式，通過EDC、GDA等方法分別合成兩種抗生素抗原共5種人工抗原，采用紫外光譜法對(duì)人工抗原進(jìn)行了鑒定，進(jìn)行動(dòng)物免疫，通過ELISA方法檢測(cè)抗體。具體過程參見附件技術(shù)報(bào)告。2 資料查閱情況 由于該研究課題在國(guó)內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道很少，因此在課題研究過程中查閱了一定量的外文文獻(xiàn)，參考的外國(guó)期刊包括Food and Agricultural Immunology、Biosensors and Bioelectronics以及Analytica Chimica Acta，并在參考外文文獻(xiàn)中介紹的方法的基礎(chǔ)上，經(jīng)過具體操作，對(duì)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行改良。四、項(xiàng)目成果完成形式和價(jià)值 1 制備出慶大霉素和鏈霉素類毒物抗原。 2 制備出慶大霉素和鏈霉素類毒物抗體。 3 提供1份技術(shù)報(bào)告。為進(jìn)一步研制兩類抗生素的單克隆抗體和建立免疫分析方法提供了借鑒。五、經(jīng)費(fèi)使用情況實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 200元常規(guī)試劑 400元分析檢測(cè) 300元耗材 500元文獻(xiàn)檢索等 100元合計(jì) 1500元六、申請(qǐng)人對(duì)該項(xiàng)目研究工作完成后的認(rèn)識(shí)總結(jié)從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來說，基本上達(dá)到了預(yù)期目的，基本上掌握了如何開展科學(xué)研究的方法，為以后的研究奠定了基礎(chǔ)。但由于各方面原因，沒有取得可喜的成績(jī)，現(xiàn)總結(jié)如下：1、要堅(jiān)持認(rèn)真的實(shí)驗(yàn)態(tài)度。對(duì)遇到的問題不能操之過急，應(yīng)該仔細(xì)分析問題出現(xiàn)的原因，查閱有關(guān)資料，提高解決問題的能力，知難而上，而不是遇難而退。2、開始試驗(yàn)前要掌握一定的實(shí)驗(yàn)研究方法和技巧，這樣就可以在實(shí)驗(yàn)開始階段能馬上進(jìn)入狀態(tài)。另外最重要的是查閱相關(guān)文獻(xiàn)，吸取別人的研究經(jīng)驗(yàn)，少走彎路，在別人的研究基礎(chǔ)上加以創(chuàng)新。3、由于這是個(gè)新穎的課題，只能一步一步地走，難度相當(dāng)大，最后所得抗體性能尚不理想。 4、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)該都是專業(yè)學(xué)習(xí)和實(shí)際相結(jié)合的綜合運(yùn)用，但是我們并沒有做到這一點(diǎn)，在以后的研究當(dāng)中需要加強(qiáng)這一點(diǎn)。經(jīng)過半年多的實(shí)驗(yàn)，的確使我們獲益良多，在各方面包括學(xué)習(xí)和做事等能力獲得了很大的提升，回顧一步一步地走過來的實(shí)驗(yàn)歷程，每走一步就是一點(diǎn)提升，這就是付出與回報(bào)。七、指導(dǎo)教師對(duì)項(xiàng)目完成情況的意見該課題組同學(xué)前期查閱了很多資料，合理設(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)中獨(dú)立思考，知難而上，成功合成兩種