唾液淀粉酶最適pH值的測定(論文).doc

唾液淀粉酶最適pH值的測定作者：楊璇璇 黎丁菱 甘杏萍 王雅梅 黎氏賢厚1、 前言 生物體內(nèi)的酶是對其特異底物起高效催化作用的蛋白質(zhì)和核酸，前者是機體內(nèi)催化各種代謝反應(yīng)最重要的催化劑。酶分子中的許多極性基團。在不同的PH條件下解離狀態(tài)不同，其所帶電荷的種類和數(shù)量也各不相同，酶活性中心的某些必需基團往往僅在某一解離狀態(tài)時才最容易同底物結(jié)合或具有最大的催化活性。許多具有可解離基團的底物和輔酶的荷電狀態(tài)也受PH改變的影響，從而影響酶對它們的親和力。此外，PH還可以影響酶活性中心的空間構(gòu)象，從而影響酶的活性。因此，PH的改變對酶的催化作用影響很大。 酶催化活性最高時反應(yīng)體系的PH稱為酶促反應(yīng)的最適PH。 測定酶的最適PH值，是進一步了解酶生物學(xué)活性的基礎(chǔ)。 本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受PH影響的情況。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在該酶的催化作用下會隨著時間的延長而出現(xiàn)不同程度的水解，從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產(chǎn)物。碘液與淀粉及其不同程度的水解產(chǎn)物反應(yīng)呈現(xiàn)不同顏色，即：淀粉（藍色）、紫色糊精（紫色）、紅色糊精（紅色）、麥芽糖及少量葡萄糖（黃色）。用分光光度計測量出各溶液在660nm處的吸光度A，從而間接測出唾液淀粉酶的最適pH值。 結(jié)果測得A在pH值6.08.0范圍內(nèi)變化并且隨著pH的增大先減小后增大，pH6.8左右，吸光度值最低，所以唾液淀粉酶最適pH值約為6.8。二、材料與方法1、材料與試劑1) 人唾液中的唾液淀粉酶2) 白瓷板、中試管、試管架、毛刷、吸耳球、玻璃筆、小燒杯、坐標(biāo)紙、漱口水3) 37恒溫水浴箱、分光光度計、沸水浴4) 1.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、膠頭滴管5) 0.025%淀粉溶液、0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、碘液、蒸餾水2、方法 1 ) 緩沖液的配置：根據(jù)下表，配置各個pH值的緩沖溶液各10mlPH值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 0.2mol/L（ml） 0.615 0.925 1.33 1.88 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.58 4.740.2mol/L（ml） 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.950 0.650 0.425 0.265 2） 唾液的獲?。赫麴s水漱口,然后用舌尖抵住上額或下額齒根后,微低頭.輕啟雙唇，將下嘴唇擱在燒杯邊緣，讓唾液自然流入試管中.3） 唾液的稀釋：取10支試管，分別編上號09管號 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.10.1蒸餾水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 4)唾液稀釋倍數(shù)的選?。毫砣?0支試管，分別編上09號，各取上述稀釋的唾液各1ml，分別加入相應(yīng)編號的試管里，然后向10支試管內(nèi)同時加入1ml的0.025的淀粉溶液，振蕩混勻后放入37恒溫水浴箱中，5分鐘后取出，滴加23碘液，振蕩混勻，觀察顏色，選取顏色變化適中的一支，記錄稀釋倍數(shù)。5） 測量pH： 取12支試管，分別標(biāo)上號112，按下表操作管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.02淀粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 12ml緩沖溶液pH 6.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 37水浴10分鐘稀釋唾 液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1充分混勻后繼續(xù)水浴加熱，從1號試管中每隔1min取一滴液體，滴入白瓷板中，再滴一滴碘液與之反應(yīng)，觀察顏色變化，當(dāng)顏色變黃時，取出212號試管，然后沸水浴 15min ，使酶失活，酶促反應(yīng)停止。然后后取出各試管，冷卻至室溫，往各支試管滴加12滴碘液。6）測量吸光度并記錄數(shù)據(jù)用分光光度計測出212號試管中溶液的吸光度A值，做好記錄7）作圖在坐標(biāo)紙上作出平滑曲線，取曲線最低點對應(yīng)的pH值，即為唾液淀粉酶的最適pH值 三、結(jié)果圖表四、討論 本實驗中，當(dāng)唾液淀粉酶的活性最大時，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A值最小，過酸或過堿均會抑制酶的活性，使之分解的底物減少，A值增大。 由所作曲線可知唾液淀粉酶的最適pH值在6.8左右。在PH6.8時唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而增大，在PH=6.8達到最大值，在PH6.8時唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而降低，因此唾液淀粉酶的最適pH值為6.8，如果過酸或過堿均會降低酶的催化活性。最適PH不是酶的特征性常數(shù)，它受底物濃度、緩沖液種類與濃度以及酶純度等因素的影響。溶液PH高于或低于最適PH時，酶活性降低，遠離最適PH時還會導(dǎo)致酶變性。在測定酶活性時，應(yīng)選用適宜的緩沖液以保持酶活性的相對恒定。五、參考文獻 1 許冰 ,