第七章生物化學(xué)制藥ppt課件

第七章生物化學(xué)制藥一 概述二 生化藥物制備技術(shù)三 生化藥物制備實(shí)例 生化藥物 所謂生化藥物是指以天然的動(dòng)物 植物 微生物等生物體組織和器官為原料 通過(guò)化學(xué)方法進(jìn)行提取 精制或者用化工合成方法制成的內(nèi)源性生理生化物質(zhì) 用于預(yù)防 治療 診斷疾病 包括由上述這些已知藥物加以結(jié)構(gòu)改造或人工合成創(chuàng)造出的自然界所沒(méi)有的新藥物 由于約定俗成 生化藥物不包括抗生素 抗生素早已自成體系 也不包括用微生物 細(xì)菌 病毒 主克次體 微生物和動(dòng)物毒素 人和動(dòng)物的血液及組織等制成的供預(yù)防 治療和診斷特定傳染病或其它有關(guān)疾病的生物制品 習(xí)慣上也不包括中藥制成的中藥制劑 生物化學(xué)制藥主要采用化學(xué)提取法 3 中國(guó)的三大藥源 化學(xué)藥物 生物藥物 中草藥 生化藥品 生物制品 現(xiàn)代生物技術(shù)藥物 中國(guó)藥典2005年分為1部 2部和3部藥典1部收載藥材及飲片 植物油脂和提取物 成方制劑和單方制劑等 藥典2部收載化學(xué)藥品 抗生素 生化藥品 放射性藥品及藥物輔料等 藥典3部收載生物制品 首次將 生物制品規(guī)程 并入藥典 生化藥物的分類 一 按藥物的化學(xué)本質(zhì)來(lái)分類 二 按藥物的來(lái)源來(lái)分類 一 按藥物的化學(xué)本質(zhì)來(lái)分類 1 氨基酸及其衍生物類藥物2 多肽和蛋白質(zhì)類藥物 蛋白質(zhì)類藥物有白蛋白 丙種球蛋白 胰島素 多肽類有催產(chǎn)素 降鈣素 胰高血糖素 3 酶與輔酶類藥物 消化酶 氧化還原酶 抗腫瘤酶 4 核酸及其衍生物類藥物 DNA RNA 單核苷酸 堿基 5 糖類藥物 以粘多糖為主6 脂類藥物 脂肪酸類 磷脂類 膽酸類 固醇類 卟啉類 國(guó)內(nèi)主要的生化藥品種類和廠家一覽表 二 按藥物的來(lái)源來(lái)分類 1 人體來(lái)源的生物藥物 人血液制品 胎盤制品 尿制品 2 動(dòng)物來(lái)源的生物藥物 蛇毒 蜂毒 3 植物來(lái)源的生物藥物 是中草藥的主要成份 4 微生物來(lái)源的生物藥物 氨基酸 維生素 酶 5 海洋生物來(lái)源的生物藥物 種類繁多 成份復(fù)雜 人體來(lái)源的藥物 人體來(lái)源藥物的特點(diǎn)人體來(lái)源藥物的種類人體來(lái)源藥物的前景和問(wèn)題 人體來(lái)源藥物的特點(diǎn) 1 安全性好 藥物與人體具有同源性 不會(huì)發(fā)生排斥反應(yīng)2 效價(jià)高 療效可靠 純化的血漿因子制劑 要比原血漿高出10 1000倍 3 穩(wěn)定性好 提純產(chǎn)品均可制成凍干制劑 有利于貯存 運(yùn)輸 使用 人體來(lái)源藥物的種類 人血液制品人細(xì)胞因子人體來(lái)源的其它原料物質(zhì)人體激素 血液成份制品又可為 1 紅細(xì)胞 RBC 2 白細(xì)胞 WBC 3 血小板 4 血漿在使有輸入全血的治療措施中 有50 以上的患者只要輸入紅細(xì)胞就已經(jīng)足夠了 另30 則只須輸入血液中的其它成份就能達(dá)到滿意的療效 因此 利用血液的單一成份進(jìn)行治療 已經(jīng)成為目前的一個(gè)趨勢(shì) 分離血液成份的技術(shù)有 離心法 過(guò)濾法 人血液制品 全血制品血細(xì)胞制品血漿制品 紅細(xì)胞制劑 用紅細(xì)胞代替全血 在國(guó)內(nèi)已經(jīng)逐漸推廣應(yīng)用 是心臟病 慢性腎病 肝病患者補(bǔ)充血紅蛋白的首選品種 全血和紅細(xì)胞保存于4 2 內(nèi)可保存35天冰凍貯藏紅細(xì)胞 是長(zhǎng)期保存紅細(xì)胞的有效方法 是指地 80 到 196 之間的低溫進(jìn)行保存 其優(yōu)點(diǎn)是可以貯備多年 重融之后性能很好 缺點(diǎn)是貯藏費(fèi)用太高 白細(xì)胞濃縮液 白細(xì)胞是生產(chǎn)干擾素 INFa 的重要原料 所采集到的人體白細(xì)胞具有組織相容的HLA位點(diǎn) 不同人體之間的白細(xì)胞存在著抗原 抗體凝聚反應(yīng) 和細(xì)胞毒性作用 這是制約白細(xì)胞制劑應(yīng)用的原因之一 另外 目前白細(xì)胞的體外保存技術(shù)尚未解決 這是制約白細(xì)胞制劑應(yīng)用的原因之二 100 000 300 000 mm3 4 6million mm3 嗜堿性粒細(xì)胞Eosinophil 血小板制劑 血小板制劑的分離和使用在國(guó)外已經(jīng)比較普遍 而在國(guó)內(nèi)尚未推廣應(yīng)用 血小板制劑的適應(yīng)癥為白血病 淋巴瘤 再生障礙性貧血等等疾病 血小板保存于特制的袋內(nèi) 在22 2 內(nèi)并不斷振蕩 可保存5天血小板制劑輸入人體之后 常常很快會(huì)產(chǎn)生抗體 從而使輸入的血小板制劑遭到破壞 因此 最好輸入那種HLA相容的血小板制劑 新鮮冰凍血漿 FFP 新鮮冰凍血漿是指剛采集到的新鮮血液 在 30 的溫度下 保存時(shí)間不超過(guò)1年的血漿 新鮮冰凍血漿能夠有效地保存血漿中各種生物活性成份的功能 可在許多臨床疾病的治療中使用 組成人體血漿的成份 血漿占人體體重的量 8 血漿占全血的量 50 血漿中的水分占血漿的量 92 血漿中的蛋白質(zhì)占血漿的量 6 7 白蛋白 Alb 免疫球蛋白 IgG 65 免疫球蛋白 IgG IgM 纖維蛋白原 Fg 補(bǔ)體 C3 轉(zhuǎn)鐵蛋白 Tr 巨球蛋白 a2M 觸珠蛋白 Hp a1抗胰蛋白酶 a1AT 血色素結(jié)合蛋白 Hpx a1 酸性糖蛋白G a1AG 25 其它百作種微量蛋白質(zhì)和多肽成份 10 血漿成分制品 轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最惷庖咔虻鞍啄到y(tǒng)蛋白補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白蛋白酶抑制物類 轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最?轉(zhuǎn)輸?shù)鞍资侵改軌驅(qū)C(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 代謝產(chǎn)物 激素 藥物進(jìn)行轉(zhuǎn)輸?shù)难獫{蛋白 具體有 1 白蛋白 轉(zhuǎn)輸脂肪酸 色素 陽(yáng)離子 藥物 VC 2 前白蛋白 轉(zhuǎn)輸甲狀腺素結(jié)合蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白 3 類脂蛋白 轉(zhuǎn)輸脂質(zhì) 膽固醇 激素 4 類脂蛋白 轉(zhuǎn)輸脂質(zhì) 膽固醇 激素 5 觸珠蛋白 轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白 6 血紅蛋白結(jié)合蛋白 轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白 7 轉(zhuǎn)鐵蛋白 將鐵轉(zhuǎn)輸給網(wǎng)織紅細(xì)胞和其它組織 8 銅藍(lán)蛋白 轉(zhuǎn)輸銅 調(diào)節(jié)銅吸收形成酶 9 轉(zhuǎn)鈷胺蛋白 轉(zhuǎn)輸VB12 10 GC球蛋白 轉(zhuǎn)輸維生素B族 免疫球蛋白 免疫球蛋白構(gòu)成機(jī)體防御感染的體液免疫系統(tǒng) 免疫球蛋白種類 IgG IgA IgM IgD IgE 凝血系統(tǒng)蛋白 凝血系統(tǒng)蛋白維持機(jī)體的正常凝血機(jī)制 分為 1 凝血因子 凝血系統(tǒng)共有13種凝血因子 2 抗凝血因子 抗凝血因子有纖溶酶原 Pg 當(dāng)它被尿激酶激活之后 就具有溶解血栓的作用 內(nèi)源性凝血 外源性凝血 接觸異面 組織損傷 a a a Ca2 血小板磷脂 a Ca2 血小板磷脂 凝血酶原激活物 a Ca2 血小板磷脂 凝血酶原 凝血酶 a 纖維蛋白原 纖維蛋白單體 纖維蛋白多聚體 a Ca2 接觸因子 Ca2 血小板磷脂 凝血酶原激活物 Ca2 在凝血過(guò)程中的作用血小板磷脂的作用血凝過(guò)程的正反饋纖維蛋白對(duì)血小板的聚集凝血酶對(duì)血小板聚集的促進(jìn)作用凝血酶對(duì)自身形成的促進(jìn)作用 13種凝血因子 因子1 纖維蛋白原 Fg 因子2 凝血酶原 FII 因子3 組織因子 FIII 因子4 鈣離子因子5 前加速素 易變因子 FV 因子6 因子7 前轉(zhuǎn)化素 穩(wěn)定因子 FVII 因子8 抗血友病因子 AHF 因子9 血漿凝血激酶成份 PTC 因子10 Stuart因子 FX 因子11 血漿凝血激酶前質(zhì)因子12 接觸因子 FXII 因子13 纖維蛋白穩(wěn)定因子 FSF 激肽酶原 pK 高分子量激肽酶原 HMW 纖溶酶原 Pg 蛋白C PC 纖溶酶原 纖溶酶 血管內(nèi)皮纖維溶酶原激活物 組織纖維溶酶原激活物 血漿纖維溶酶原激活物 血漿纖維溶酶原激活物原 a 纖維蛋白 降解物 血漿中的抗纖溶酶 補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白 補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體的主要防御系統(tǒng)之一 1 補(bǔ)體系統(tǒng)在細(xì)胞吞噬 調(diào)理 趨化性 細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用 2 補(bǔ)體系統(tǒng)在自身性免疫疾病中 起著損傷機(jī)體的作用 補(bǔ)體的作用方式分為三種途徑 1 補(bǔ)體傳統(tǒng)活化途徑 9種補(bǔ)體成份 C1q C1r C1s C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 其中C1q C1r C1s為識(shí)別單位 C2 C3 C4為活性單位 C5 C6 C7 C8 C9為膜攻擊單位 2 補(bǔ)體旁路活化途徑 B因子 D因子 P因子 3 補(bǔ)體旁路活化過(guò)程中的調(diào)節(jié)因子 C36 INA IH 蛋白酶抑制物類 a1 抗胰蛋白酶 a1 AT 能夠保護(hù)機(jī)體的正常細(xì)胞不受蛋白酶的破壞和損傷 能協(xié)助控制感染和炎癥 a1抗糜蛋白酶 a1X 能夠保護(hù)機(jī)體的正常細(xì)胞不受蛋白酶的破壞和損傷 維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境恒定 a間胰酶抑制劑 IaI 具有制約 中和 清除某些蛋白酶的作用 能防止凝血系統(tǒng)蛋白酶的自身消化 抗凝血酶III ATIII 在肝素的促進(jìn)下 與凝血酶形成復(fù)合物 使得凝血酶失活 防止血栓形成 Ci脂酶抑制劑 Ci INH a2巨球蛋白 a2M 具有制約 中和 清除某些蛋白酶的作用 能防止凝血系統(tǒng)蛋白酶的自身消化 a2抗纖溶酶 a2AP 人細(xì)胞因子 1 骨骼生長(zhǎng)因子 BGF 來(lái)源于人骨 2 骨形成蛋白 BMP 來(lái)源于人骨 3 干擾素 IFN IFN 來(lái)源于白細(xì)胞 調(diào)節(jié)免疫活性IFN 來(lái)源于成纖維細(xì)胞 調(diào)節(jié)免疫活性IFN 來(lái)源于淋巴細(xì)胞 調(diào)節(jié)免疫活性 4 血小板衍化生長(zhǎng)因子 PDGF 來(lái)源于血小板 5 結(jié)締組織活性肽 III CATP III 來(lái)源于血小板 6 白細(xì)胞介素 1 IL 1 來(lái)源于人血 巨噬細(xì)胞 7 白細(xì)胞介素 2 IL 2 來(lái)源于人T淋巴細(xì)胞 8 B細(xì)胞生長(zhǎng)因子 BCGF 來(lái)源于人末梢血管淋巴細(xì)胞 9 骨肉瘤衍化生長(zhǎng)因子 ODGF 來(lái)源于人骨肉瘤細(xì)胞株 10 紅細(xì)胞生長(zhǎng)因子 EPO 來(lái)源于胎兒腎 11 集落刺激因子 CSF 來(lái)源于人組織 血 尿 12 促生長(zhǎng)因子 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素 SM 來(lái)源于人血漿 13 巨噬細(xì)胞集落刺激因子 M CSF 來(lái)源于人巨噬細(xì)胞人細(xì)胞因子由于數(shù)量十分稀少 目前已經(jīng)被基因工程產(chǎn)品所代替 如干擾素a 白細(xì)胞介素 2 IL 2 的生產(chǎn) 人體來(lái)源的其它原料物質(zhì) 1 人胎盤2 人尿 人胎盤 從人的胎盤中提取的蛋白主要有 1 人胎盤丙種球蛋白 2 人胎盤白蛋白 3 人胎盤RNA抑制劑 從人的胎盤中提取的激素有 1 絨毛膜促性腺激素 HCG 2 絨毛膜促乳激素 HCS 人尿 從健康的男性人尿可以制備 1 尿激酶 2 激肽釋放酶 3 尿抑胃素 4 蛋白酶抑制劑 5 睡眠因子 6 集落刺激因子 CSF 7 表皮生長(zhǎng)因子 EGF 從妊娠婦女和絕經(jīng)期婦女尿液中可以提取 1 絨毛膜促性腺激素 HCG 人體激素 人體激素主要有 1 蛋白質(zhì)類激素 2 多肽類激素 3 氨基酸衍生物類激素 4 脂類激素人體激素很少是大分子蛋白質(zhì) 因此很少出現(xiàn)免疫反應(yīng) 1 血液的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)血漿蛋白質(zhì)總共可以分為五個(gè)組分 目前僅僅利用了其中的第1組分 纖維蛋白原 第2組分 免疫球蛋白 第5組分 白蛋白 而對(duì)于第3組分和第4組分中所含有的大量血漿蛋白成份 基本上沒(méi)有加以利用 其原因是由于這些物質(zhì)含量較低 提純難度較大 第3組分中含有IgA IgM 凝血因子II VII IX X 蛋白C 纖溶酶原 2 巨球蛋白 微球蛋白 補(bǔ)體成份C3 C4 C5 C8 球蛋白 球蛋白 第4組分中含有抗凝血酶III 1抗胰蛋白酶 銅藍(lán)蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白 觸珠蛋白 補(bǔ)體Ci脂酶抑制物 前白蛋白 人體來(lái)源藥物的前景和問(wèn)題 2 其它原料的進(jìn)一步開(kāi)發(fā) 對(duì)于胎盤 尿液的提取技術(shù)也在不斷發(fā)展之中 3 現(xiàn)代生物技術(shù)的進(jìn)一步應(yīng)用 基因工程 蛋白質(zhì)工程 細(xì)胞工程 酶工程在血液制品的生產(chǎn)中有了較大的發(fā)展和應(yīng)用 4 人體組織器管制藥的法律問(wèn)題和倫理問(wèn)題 國(guó)際上禁止利用人的器官和組織來(lái)生產(chǎn)藥物 動(dòng)物來(lái)源的藥物 利用動(dòng)物的組織器官生產(chǎn)藥物 在我國(guó)于1950年代開(kāi)始生產(chǎn) 當(dāng)時(shí)被稱為 臟器制藥 1980年之后被稱為 生化藥物 目前我國(guó)國(guó)內(nèi)已經(jīng)能夠生產(chǎn)200多種來(lái)源于動(dòng)物機(jī)體的生化藥物動(dòng)物來(lái)源藥物的種類和用途動(dòng)物來(lái)源藥物的前景和問(wèn)題 動(dòng)物來(lái)源藥物的種類和用途 1 動(dòng)物多肽類藥物2 動(dòng)物蛋白質(zhì)類藥物3 動(dòng)物酶與輔酶類藥物4 動(dòng)物核苷酸類藥物5 動(dòng)物糖類藥物6 動(dòng)物脂類藥物7 動(dòng)物細(xì)胞因子 乳汁中分泌人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因山羊 1 動(dòng)物多肽類藥物 1 多肽激素 2 多肽類細(xì)胞因子 1 多肽激素 下丘腦激素 促甲狀腺激素釋放激素 TRH 生長(zhǎng)激素抑制激素 GRIF 促性腺激素釋放激素 LHRH 垂體多肽激素 促腎上腺皮質(zhì)激素 ACTH 促黑激素 MSH 脂肪水解激素 LPH 催產(chǎn)素 OT 加壓素 AVP 甲狀腺所分泌的激素 甲狀腺素 T4 甲狀旁腺素 PTH 降鈣素 CT 胰腺所分泌的激素 胰島素 胰高血糖素 胰解痙多肽 胃腸道激素 胃泌素 膽囊收縮 促胰酶素 CCK PZ 腸泌素 腸血管活性肽 VIP 抑胃肽 GIP 緩激肽 P物質(zhì) 胸腺所分泌的激素 胸腺素 胸腺肽 胸腺血清因子 2 多肽類細(xì)胞因子 腦氨肽蛇毒胎盤提取物脾水解物肝水解物心臟激素轉(zhuǎn)移因子抗癌肽 2 動(dòng)物蛋白質(zhì)類藥物 1 蛋白質(zhì)類激素 生長(zhǎng)素 GH 催乳激素 PRL 促甲狀腺素 TSH 促黃體生成素 LH 促卵泡激素 FSH 人絨毛膜促性腺激素 HCG 絕經(jīng)尿促性腺激素 HMG 血清性促性腺激素 SGH 胰島素 胰抗脂肝素 松馳素 尿抑胃素 2 血漿蛋白質(zhì) 動(dòng)物血漿蛋白質(zhì)與人體的血漿蛋白質(zhì)有差異 動(dòng)物血漿蛋白質(zhì)制品不能直接應(yīng)用于人體 3 蛋白質(zhì)類細(xì)胞因子 4 粘蛋白 胃膜素 硫酸糖肽 內(nèi)在因子 血型物質(zhì)A 血型物質(zhì)B 5 膠原蛋白 明膠 阿膠 氧化聚合明膠 6 其它蛋白 硫酸魚(yú)精蛋白 胰蛋白酶抑制劑 3 動(dòng)物酶與輔酶類藥物 1 促消化酶類 胰酶 淀粉酶 脂肪酶 蛋白酶 纖維素酶 木瓜蛋白酶 黑曲霉的酶 胃蛋白酶 2 消炎酶類 蛋白酶 溶菌酶 菠蘿蛋白酶 a 胰凝乳蛋白酶 胰蛋白酶 明膠肽酶 酶RNA酶 3 治療心血管疾病的相關(guān)酶 纖溶酶 尿激酶 蚓激酶 鏈激酶 凝血酶 激肽釋放酶 彈性蛋白酶 4 抗腫瘤的酶 L 門冬氨酸酶 谷氨酰胺酶 蛋氨酸酶 組氨酸酶 酪氨酸氧化酶 5 與生物氧化過(guò)程電子傳遞有關(guān)的治療酶 細(xì)胞色素C 超氧化物歧化酶 SOD 過(guò)氧化物酶 6 其它藥用酶 有機(jī)磷解毒酶 青霉素酶 透明質(zhì)酸酶 7 動(dòng)物輔酶類藥物 輔酶Q10 輔酶A 4 動(dòng)物核苷酸類藥物 1 核糖核酸 RNA 用于治療精神遲緩 記憶衰退 動(dòng)脈硬化性疾呆 靜注治療慢性肝炎 肝硬化 初期肝癌 2 脫氧核糖核酸 DNA 具有抗放射性作用 能夠改善機(jī)體虛弱疲勞 3 免疫核糖核酸 iRNA 可用于治療乙肝 肺癌 4 轉(zhuǎn)移因子 TF 治療惡性腫瘤 5 聚肌胞苷酸 聚肌胞 poly C 是干擾素的誘導(dǎo)物 具有廣譜抗病毒作用 6 核酸 氨基酸混合物 用于氣管炎 神經(jīng)衰弱 7 輔酶A CoA 用于動(dòng)脈硬化 白細(xì)胞減少 血小板減少 肝病 腎病 8 脫氧核苷酸鈉 用于放療化療引起的急性白細(xì)胞減少癥 9 一磷酸腺苷 AMP 對(duì)外周血管具有擴(kuò)張作用 治療靜脈曲張性潰瘍 10 三磷酸鳥(niǎo)苷 GTP 用于慢性肝炎 進(jìn)行性肌肉萎縮 11 輔酶I NAD 用于白細(xì)胞減少 冠狀動(dòng)脈硬化 12 輔酶II NADP 促進(jìn)體內(nèi)物質(zhì)生物氧化 5 動(dòng)物糖類藥物 動(dòng)物糖類藥物以粘多糖為主 1 粘多糖的種類 2 粘多糖的藥用價(jià)值 3 粘多糖的制備方法 1 粘多糖的種類 廣義的粘多糖包括 1 粘多糖 2 粘蛋白 3 糖蛋白 4 糖脂 粘多糖主要分布于動(dòng)物的骨 軟骨 皮 角 血管 腸 滑膜液 腦 角膜 肺 肝 心 尿等等原料之中 2 粘多糖的藥用價(jià)值 甲殼質(zhì) 幾丁質(zhì) 用作人造皮膚 人造血管 手術(shù)線 具有消炎 止酸作用 硫酸軟骨素 CS 治療關(guān)節(jié)炎 神經(jīng)痛 腰痛 眼病 具有抗血栓作用 用于治療多種心臟疾病 肝素 抗凝血藥物 治療血栓疾病 透明質(zhì)酸 HA 用于眼科手術(shù) 燒傷 化妝品 3 粘多糖的制備方法 1 原料處理 2 提取 3 去除非粘多糖 4 脫色 5 脫蛋白 6 純化 7 乙醇分級(jí)沉淀 8 季銨鹽絡(luò)合沉淀 9 離子交換柱層析分離 10 分子篩分離 11 親和層析 6 動(dòng)物脂類藥物 動(dòng)物脂類藥物主要包括 1 脂肪酸及其衍生物 2 磷脂類 3 膽酸類 4 固醇類 5 卟啉及其衍生物類 動(dòng)物脂類藥物主要分布在脂肪組織 肝臟 磷脂類物質(zhì)主要分布在腦 脊髓之中 1 動(dòng)物脂類藥物的種類和分布 2 動(dòng)物脂類藥物的制備方法 1 動(dòng)物脂類藥物的種類和分布 腦磷脂 分布在腦 酵母之中 用于止血 防止動(dòng)脈硬化以及神經(jīng)衰弱 磷脂酰膽堿 卵磷脂 分布于腦 大豆 卵黃之中 防止動(dòng)脈硬化以及神經(jīng)衰弱 肝病 花生四烯酸 分布于動(dòng)物的腎上腺 降血脂 用于合成前列腺素E2 魚(yú)肝油脂肪酸鈉 分布在魚(yú)肝油中 止血 治療靜脈曲張 前列腺素E1 E2 分布于羊精囊之中 降血壓 中期引產(chǎn) 催產(chǎn) 原卟啉 分布于動(dòng)物血紅蛋白之中 治療急 慢性肝炎 血卟啉衍生物 腫瘤放療輔助劑 膽紅素 從膽汁中來(lái) 消炎 抗氧化膽酸鈉 從膽汁中來(lái) 治療膽酸缺乏癥 膽酸 從膽汁中來(lái) 合成人工牛黃的原料 豬去氧膽酸 從膽汁中 降膽固醇 治療氣管炎 人工牛黃 配制 消炎 解毒 膽固醇 于腦 脊髓 合成人工牛黃的原料 輔酶Q10 分布心肌 治療高血壓 急性肝壞死 2 動(dòng)物脂類藥物的制備方法 提取法 索氏提取法 可用于提取腦磷脂 磷脂酰膽堿 卵磷脂 脂肪酸 水解法 通過(guò)水解血紅素 可以制得原卟啉 生物轉(zhuǎn)化法 花生四烯酸通過(guò)生物轉(zhuǎn)化 可變成前列腺素E1 E2 化學(xué)合成和半合成法 不常用 7 動(dòng)物細(xì)胞因子 1 骨髓生長(zhǎng)因子 BGF 2 骨髓衍化生長(zhǎng)因子 BDGF 3 軟骨衍化生長(zhǎng)因子 CDGF 4 軟骨衍化因子 CDF 5 骨形成蛋白 BMP 6 細(xì)胞分裂因子 CDF 7 內(nèi)皮細(xì)胞衍化生長(zhǎng)因子 ECDGF 8 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 ECGF 9 表皮生長(zhǎng)因子 EGF 10 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 FGF 11 酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 AFGF 12 腦成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 BFGF 13 胰島素樣生長(zhǎng)因子 IGF 14 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 NGF 15 多功能集落刺激因子 Multi CSF 16 乳腺刺激因子 MSF 17 睪丸衍化生長(zhǎng)因子 動(dòng)物來(lái)源藥物的前景和所要注意的問(wèn)題 1 發(fā)展前景2 問(wèn)題 1 發(fā)展前景 1 動(dòng)物來(lái)源藥物的原料十分豐富 可以從中制備出人體所需要的各種生物活性物質(zhì) 2 動(dòng)物來(lái)源藥物的活性成份的深入研究 尤其是動(dòng)物毒素的研究 3 利用生物技術(shù) 化學(xué)技術(shù)進(jìn)行合成和半合成 4 現(xiàn)代生物技術(shù)在動(dòng)物來(lái)源藥物制造上的應(yīng)用 2 所應(yīng)該注意的問(wèn)題 組織相容性問(wèn)題 是動(dòng)物來(lái)源藥物的核心難題 動(dòng)物來(lái)源藥物的蛋白質(zhì)注射到人體內(nèi) 會(huì)產(chǎn)生抗原反應(yīng) 嚴(yán)重者會(huì)危及生命 植物來(lái)源的藥物 植物來(lái)源的藥物的種類和用途植物來(lái)源的藥物的研究前景 植物來(lái)源的藥物的種類和用途 植物來(lái)源的藥物是我國(guó)中草藥的主要來(lái)源 經(jīng)過(guò)詳細(xì)記載的就有5000種 分類1 根據(jù)藥用價(jià)值來(lái)分類2 根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)分類種類1 植物蛋白質(zhì) 多肽 酶類以及藥理作用2 植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用3 植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用 1 根據(jù)藥用價(jià)值來(lái)分 1 抗腫瘤藥物 喜樹(shù)堿 秋水仙堿 硫酸長(zhǎng)春堿 硫酸長(zhǎng)春新堿 靛玉紅 2 強(qiáng)心藥 鈴蘭毒苷 去乙酰毛花洋地黃苷 洋地黃毒苷 地高辛 3 抗菌消炎藥 魚(yú)腥草素 秦皮乙素 黃苓苷 穿心蓮內(nèi)脂 鹽酸小檗堿 4 抗凝血藥 雙豆香素 5 鎮(zhèn)痛藥 鹽酸嗎啡 顱痛定 延胡索已素 桉油 6 作用于神經(jīng)系統(tǒng)的藥物 咖啡因 鹽酸可卡因 刺烏頭堿 天麻素 7 搞瘧藥物 鹽酯奎寧 青蒿素 8 止咳平喘藥物 磷酸可待因 茶堿 艾葉油 牡荊油 蕓香草油 滿山紅油 2 根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)分 1 糖和糖苷類 2 苯丙素類 苯丙烯 苯丙酸 香豆素 3 醌類 輔酶Q10 紫草素 4 黃酮類 黃酮醇 花色素 黃苓苷 5 鞣質(zhì) 奎寧酸 槲皮素 6 萜類物質(zhì) 青蒿素 齊墩果酸 7 甾體類物質(zhì) 烏沙苷原 毛地黃毒苷 8 生物堿 咖啡因 喜樹(shù)堿 1 植物蛋白質(zhì) 多肽 酶類以及藥理作用 1 天花粉蛋白 用于引產(chǎn) 能夠水解糖苷鍵 2 蓖麻毒蛋白 抗癌 3 植物凝集素 PHA 凝集紅細(xì)胞 白細(xì)胞 4 胰蛋白酶抑制劑 抑制胰蛋白酶 治療胰腺炎 燒傷 5 相思豆毒蛋白 抗癌 6 苦瓜胰蛋白 降血糖 7 菠蘿蛋白酶 消炎 水解蛋白質(zhì) 促消化 8 木瓜蛋白酶 促消化 消炎 9 無(wú)花果蛋白酶 驅(qū)蟲(chóng)劑 10 木瓜凝乳蛋白酶 促消腫 消炎 11 辣根過(guò)氧化物酶 HRP 診斷試劑 12 麥芽淀粉酶 助消化 13 脲酶 分解尿素 14 植物SOD酶 抗氧化 15 辣根過(guò)氧化物酶的提取 2 植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用 1 單糖類 葡萄糖 果糖 核糖 脫氧核糖 木糖 2 單糖酸類 維生素C 3 單糖醇類 木糖醇 山梨醇 肌醇 甘露醇 4 低聚糖類 蔗糖 麥芽糖 棉籽糖 5 多聚糖類 淀粉 纖維素 人參多糖 黃芪多糖 海藻酸 6 糖的衍生物類 葡萄糖 6 磷酸 果糖 1 6 二磷酸 磷酸肌醇 氨基葡萄糖 植物糖類藥用成份舉例 植酸鈣 是營(yíng)養(yǎng)劑 具有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的作用 肌醇 治療肝硬化 血管硬化 降血脂 葡萄糖 大輸液 補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng) 葡萄糖醛酸內(nèi)酯 治療肝炎 肝中毒 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 葡萄糖酸鈣 補(bǔ)鈣劑 甘露醇 抗腦水腫 降顱壓 山梨醇 抗腦水腫 降顱壓 海藻酸 增加血容量 抗休克 人參多糖 增強(qiáng)免疫機(jī)能 5 植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用 天然藥物化學(xué)中的 1 醌類 2 黃酮類 3 萜類 4 甾體類 5 苯丙酸類 6 鞣質(zhì) 等等均屬于植物脂類藥物 1 脂肪和脂肪酸類 亞油酸 亞麻酸 花生四烯酸等不飽和脂肪酸 2 磷脂類 大豆磷脂 含卵磷脂 3 固醇類 谷甾醇 大豆固醇 4 黃酮類 茶葉中提取茶多酚 植物來(lái)源的藥物的研究前景 1 植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)由于植物細(xì)胞體型大 接種量大 培養(yǎng)周期長(zhǎng) 易污染雜菌等等缺陷 目前仍存在著較大的困難 尤其是沒(méi)有理想的培養(yǎng)設(shè)備和裝置 2 植物組織培養(yǎng)技術(shù)通過(guò)組織培養(yǎng)生產(chǎn)植物藥有效成份 有利于解決生藥資源斷缺的難題 如從紅豆杉中提取紫杉醇 已經(jīng)給紅豆杉這一珍稀樹(shù)種帶來(lái)了滅頂之災(zāi) 3 天然植物來(lái)源藥物分離純化 功能結(jié)構(gòu)測(cè)定 微生物來(lái)源的藥物 1 細(xì)菌 抗生素 氨基酸 維生素 酶制劑2 真菌類 1 冬蟲(chóng)夏草 2 靈芝多糖 3 藻類多糖 4 香菇多糖 海洋生物技術(shù) 海洋生物技術(shù)是指以海洋生物為對(duì)象 綜合應(yīng)用基因工程 細(xì)胞操作技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等手段 提取海洋生物中的天然藥物由于海洋藥物中的天然活性成份含量低 分離提純的生產(chǎn)成本較高 因此 人們研究了海洋微生物的培養(yǎng)和發(fā)酵技術(shù) 以期提高產(chǎn)量 近10年中 已經(jīng)有5000種新的海洋天然藥物被發(fā)現(xiàn) 海洋生物來(lái)源的藥物 海洋生物藥物的種類和用途海洋生物藥物的研究前景 海洋生物藥物的種類和用途 1 海藻類 分為綠藻門 褐藻門 藍(lán)藻門 紅藻門等10個(gè)門類 目前已經(jīng)生產(chǎn)出褐藻酸鈉 煙酸甘露醇脂 用于抗腫瘤和治療心血管疾病 2 腔腸動(dòng)物類 從柳珊瑚中提取出前裂腺素A2 萜類藥物用于抗菌 從海葵中已經(jīng)分離出具有抗癌作用的Polytoxin 3 軟體動(dòng)物類 軟體動(dòng)物有8萬(wàn)種 如螺類 蛤類 烏賊 從軟體動(dòng)物中分離出的物質(zhì)有多糖 多肽 毒素 酶 凝聚素等等物質(zhì) 具有抗病毒 抗菌 抗腫瘤 降血壓 止血 平喘等作用 4 節(jié)肢動(dòng)物類 從蝦 蟹殼中提取出甲殼素 可以用作丸片賦形劑 緩釋藥物載體 醫(yī)用膜材料 此外 甲殼素還具有抗血栓的功能 5 棘皮動(dòng)物類 有6000多種 包括海星 海膽 海參等 海膽的毒至少具有溶血作用 海膽中還含有二十碳五烯酸 EPA 用于防治冠心病 海參素具有抗癌作用 6 魚(yú)類 有20000多種 用于制造藥物的有 魚(yú)肝油 魚(yú)軟骨素 魚(yú)細(xì)胞色素C 卵磷脂 腦磷脂 魚(yú)類中的抗癌藥物有 1 鯊魚(yú)抗問(wèn)號(hào)蛋白 2 河豚魚(yú)肝油等 7 海洋爬行動(dòng)物類 主要有蛇毒 蛇毒中含有蛋白酶 透明質(zhì)酸酶 轉(zhuǎn)氨酶 膽堿脂酶 RNA酶 DNA酶 磷脂酰膽堿酶等等 具有鎮(zhèn)痛作用 8 海洋哺乳動(dòng)物類 海洋哺乳動(dòng)物的臟器和腺體已經(jīng)制成了多種藥物 如鯨魚(yú)肝臟抗貧血?jiǎng)?海狗骨骼肌17肽具有擴(kuò)張血管 降低血壓等作用 9 其它海洋動(dòng)物 有海綿動(dòng)物 環(huán)節(jié)動(dòng)物 兩棲動(dòng)物等等 具有藥用價(jià)值的海洋藥物 1 鯊魚(yú)抗癌蛋白 抗Lewis肺癌 2 棘皮動(dòng)物抗癌肽 抗白血病 3 軟體動(dòng)物抗癌肽 蛤素 抑制非病毒性腫瘤 4 海扇抗癌糖蛋白 抑制肉瘤P180結(jié)節(jié)性腫瘤 5 海兔卵抗癌肽 抑制P180淋巴白血病細(xì)胞 6 沙群?？?抑制P388淋巴白血病細(xì)胞和K細(xì)胞 B細(xì)胞生長(zhǎng) 7 降鈣素 降低血鈣 血磷 抑制骨鈣流失 8 海蛇毒素 鎮(zhèn)痛 9 海葵毒素 強(qiáng)心作用 10 海綿抗生肽 抗真菌 抗細(xì)菌 11 軟體動(dòng)物抗生肽 抗病毒 抗細(xì)菌 12 抗炎肽 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 13 硫酸軟骨素 降血脂 抗動(dòng)脈硬化 抗凝血 治療冠心病 14 刺參酸性粘多糖 廣譜抗腫瘤 抗凝血 15 甲殼質(zhì) 藥用賦形劑 16 海參苷 抗腫瘤 抗真菌 抗輻射 17 海星皂苷 抗腫瘤 抗真菌 抗輻射 18 海綿毒素 溶血活性 19 肽類藥物 具有免疫 抗腫瘤 抗病毒作用 20 鮑魚(yú)多糖 具有抗腫瘤生長(zhǎng)作用 21 紫菜多糖 具有抗腫瘤 防止心血管疾病的作用 22 芋螺毒素 是理想的不會(huì)成癮的麻醉鎮(zhèn)痛劑 23 由海綿中分離出的多環(huán)胍生物堿 具有抗病毒 抗癌 抗真菌作用 24 膜海鞘素 具有抗病毒 抗癌 免疫抑制作用 25 從紅海海綿中分離的AvaroneAvarol 對(duì)艾滋病病毒有抑制作用 26 從海洋細(xì)菌中分離出的大環(huán)內(nèi)酯化合物 具有抗病毒 抗癌 抗菌作用 海洋生物藥物的研究前景 1 目前已經(jīng)取得進(jìn)展的相關(guān)領(lǐng)域2 海洋藥物研究的主攻方向 1 目前已經(jīng)取得進(jìn)展的相關(guān)領(lǐng)域 1 具有抗癌活性的海洋藥物 目前進(jìn)入臨床的有 從群體?？腥√幍膁idemnin 從截尾海兔中提取的dolastatin10 從多室草苔蟲(chóng)中提取的bryostatin1 bryostatin4 從海洋細(xì)菌中提取的marinactan 從海綿中提取的manoalide 2 具有抗菌活性的海洋藥物 日本從海洋細(xì)菌中提取出廣譜抗菌素 伊他霉素 3 具有抗心血管疾病活性的海洋藥物 從海洋藥物中提取的喹啉酮類具有增強(qiáng)心肌收縮力 抗心率失常的作用 4 具有抗放射性活性的海洋藥物 日本已經(jīng)從海洋藻類中提取出SOD 5 海洋前列腺素 從珊瑚中提取前列腺素 6 從海洋生物中提取的保健品 這類產(chǎn)品有螺旋藻 藍(lán)藻 二十碳五烯酸 EPA 二十二碳六烯酸 DHA 7 從海洋生物中提取的醫(yī)用生物材料 鱟試劑 河豚毒素試劑 甲殼素 珊瑚骨科材料 2 海洋藥物研究的主攻方向 1 海洋生物活性物質(zhì)的研究 2 促進(jìn)生物技術(shù)在海洋藥物研究上的應(yīng)用 3 開(kāi)發(fā)海洋中成藥制劑和新的劑型 4 開(kāi)發(fā)海洋生物 生產(chǎn)營(yíng)養(yǎng)保健品 5 從海洋生物中開(kāi)發(fā)新的醫(yī)用生物材料 如利用甲殼質(zhì)生產(chǎn)創(chuàng)可貼 手術(shù)縫合線 利用海洋生物多糖類產(chǎn)品生產(chǎn)膠囊輔料 利用海洋藻類生產(chǎn)SOD 二 生化藥物的制備技術(shù) 一 原料的選擇 預(yù)處理 保存 二 提取 三 分離純化 一 原料的選擇 預(yù)處理 保存 1 原料選擇2 原料預(yù)處理3 原料保存 1 原料選擇 1 有效成份含量高 2 原料豐富易得 3 雜質(zhì)含量少 4 原料成本低 植物原料應(yīng)注意采收的時(shí)期 以免有效成份積累不足 動(dòng)物原料要注意動(dòng)物的年齡和性別 微生物原料應(yīng)注意其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 2 原料預(yù)處理 動(dòng)物原料采集后應(yīng)立即去除結(jié)締組織 脂肪組織 并就地冷凍 植物原料采集后就地除去不用的部分 微生物材料采集后應(yīng)將細(xì)菌細(xì)胞和培養(yǎng)液分開(kāi) 并進(jìn)行保鮮處理 3 原料保存方法 1 冷凍法 常用 40 進(jìn)行速凍 2 有機(jī)溶劑脫水法 常用的有機(jī)溶劑是丙酮 因?yàn)樗鼘?duì)于沒(méi)有破壞作用 如用它來(lái)保存腦垂體 3 防腐劑保鮮 如用乙醇 苯酚 該方法適用于液體原料 如發(fā)酵液 提取液 二 生物藥物的提取 1 生物組織破碎2 有效成份的提取 1 生物組織破碎 1 磨切法 組織搗碎機(jī) 膠體磨 勻漿器 勻質(zhì)機(jī) 球磨機(jī) 乳缽 2 壓力法 加壓破碎 減壓破碎 3 反復(fù)凍融法 4 超聲波震蕩破碎法 5 自溶法 6 酶解法 2 有效成份的提取 1 提取試劑 水 緩沖溶液 鹽溶液 乙醇 氯仿 丙酮 2 提取方法 鹽析 萃取 滲透 過(guò)濾 三 生物藥物的分離純化方法 1 蛋白質(zhì)藥物2 核酸類藥物3 糖類藥物4 脂類藥物5 氨基酸藥物 1 蛋白質(zhì)藥物的分離純化方法 1 沉淀法 2 按分子大小分離 3 按分子所帶電荷進(jìn)行分離 4 層析法分離 1 沉淀法 鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法等電點(diǎn)沉淀法與靶物質(zhì)特異性結(jié)合沉淀法 2 按分子大小分離 超濾法透析法凝膠層析法超速離心法 3 按分子所帶電荷進(jìn)行分離 離子交換術(shù)層析法電泳法等電點(diǎn)聚焦法 4 層析法 親和層析法 與靶物質(zhì)特異性結(jié)合 再進(jìn)行層析的方法 疏水層析法 用于分離非極性藥物 2 核酸類藥物的分離純化方法 1 提取法生產(chǎn)方法 先得取核酸與蛋白質(zhì)的復(fù)合物 再解離核酸與蛋白質(zhì) 然后分離RNA與DNA 3 糖類藥物的分離純化方法 1 提取方法 2 分離方法 1 提取方法 非降解法 主要用于提取動(dòng)物組織中的粘多糖 提取所采用的溶劑是水 鹽溶液 降解法 主要用于提取結(jié)合牢固的粘多糖 如從軟骨中提取硫酸軟骨素就是采用堿降解法 提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖則常常采用酶解法 2 分離方法 沉淀法 乙醇沉淀是最常用的方法 4 5倍量的乙醇能使任何組織中的粘多糖完全沉淀 離子交換層析法 采用陰離子交換劑 如Dowex I X2離子交換樹(shù)脂 DEAE 離子交換纖維素等 洗脫液用氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫 4 脂類藥物的分離純化方法 提取方法 常用的溶劑有氯仿 甲醇 純化方法 1 沉淀法 利用脂質(zhì)在丙酮中溶解度不同而將其沉淀 2 吸附層析法 常用的吸附劑有硅膠 氧化鋁 洗脫常常采用逐漸增大極性的洗脫液來(lái)進(jìn)行洗脫 非極性的脂肪先流出 極性的脂肪后流出 3 離子交換層析法 如TEAE 纖維素對(duì)于分離脂肪酸和膽汁酸特別有效 5 氨基酸藥物的分離純化方法 1 氨基酸的生產(chǎn)方法 2 氨基酸的分離方法 1 氨基酸的生產(chǎn)方法 蛋白質(zhì)水解法 有酸水解 堿水解 酶水解三種方法 其中以鹽酸水解最為常用 鹽酸水解的優(yōu)點(diǎn)是水解迅速 完全 產(chǎn)物全部是L 型氨基酸 鹽酸水解的缺點(diǎn)是色氨酸全部被破壞 絲氨酸部份被破壞 堿水解易產(chǎn)生消旋作用 故較少使用 酶水解常常不夠完全徹底 2 氨基酸的分離方法 沉淀法 依據(jù)不同氨基酸的溶解度差異進(jìn)行沉淀分離 吸附法 利用活性炭對(duì)其進(jìn)行吸附 離子交換法 常用離子交換劑為強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 洗脫方法主要采用PH梯度洗脫 生物化學(xué)制藥實(shí)例 一 人體來(lái)源的生物藥物二 動(dòng)物來(lái)源的生物藥物三 植物來(lái)源的生物藥物四 海洋生物來(lái)源的生物藥物 一 人體來(lái)源藥物的制備實(shí)例 一 人血白蛋白 Alb 制劑的制備 二 尿激酶 URK 的制備 三 絨毛膜促性腺激素 HCG 的制備 四 白細(xì)胞介素 2 IL 2 的制備 一 人血白蛋白 Alb 制劑的制備 白蛋白又稱清蛋白 約占血漿總蛋白的65 同種白蛋白制品無(wú)抗原性 白蛋白為單鏈分子 由548個(gè)氨基酸組成 白蛋白的制備方法有二種 1 從健康人體的血漿中分離制取 2 從健康產(chǎn)婦的胎盤中分離制取白蛋白的制備工藝分為6步 1 絡(luò)合 2 解離 3 濃縮 4 熱處理 5 除菌 6 干燥 1 工藝 人血漿在攪拌下用NaHCO3調(diào)節(jié)PH 6 8 加入等體積的2 利凡諾溶液 充分?jǐn)嚢韬?靜置2 4小時(shí) 分離出上清液 絡(luò)合物沉淀 在絡(luò)合物沉淀中加入滅菌蒸餾水 用0 5mol L的HCl調(diào)節(jié)PH值至弱酸性 加入NaCl量為0 15 0 2 充分?jǐn)嚢?65 恒溫加熱1小時(shí) 離心除去雜蛋白 分離出上清液 上清液進(jìn)行超濾濃縮 60 恒溫?zé)崽幚?0小時(shí) 滅活病毒 除菌過(guò)濾 白蛋白溶液 進(jìn)行冷凍干燥 白蛋白產(chǎn)品 2 人血白蛋白產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法 1 外觀為白色疏松物體 2 白蛋白的含量 95 以上 3 水分 1 4 水溶后PH 6 6 7 2 5 硫酸銨殘留量 0 01 6 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)合格 7 熱原檢測(cè)合格 二 尿激酶 URK 的制備 尿激酶有多種分子形式 主要有分子量為31 3KD 54 7KD二種 屬絲氨酸蛋白酶 底物 血纖溶酶原 作用其Arg Val鍵 使纖溶酶原轉(zhuǎn)為纖溶酶 尿激酶用于治療各種血栓和血栓性梗塞 1 工藝 尿激酶的生產(chǎn)工藝分為10步 1 沉淀 2 酸化 3 吸附 4 洗滌 5 洗脫 6 除去熱原和色素 7 濃縮 8 洗脫 9 透析 10 凍干 工藝路線 工藝流程框圖 所收集到的男性應(yīng)該在8小時(shí)之間進(jìn)行處理 收集流出的活性部分 用1mol L的Hac調(diào)節(jié)PH 4 2 用蒸餾水調(diào)節(jié)電導(dǎo)率至16 17M 歐姆 裝入羧甲基纖維素柱 CM C 用10倍體積的 PH 4 2的Hac NaAc緩沖液洗滌柱床 促進(jìn)吸附 酸化以后的尿加入1 的硅藻土 在5 下攪拌1小時(shí) 在溫度10 以下操作 尿液的原始PH 8 5 透析液進(jìn)行冷凍干燥 得尿激酶產(chǎn)品 上述收集液用飽和的NaH2PO4調(diào)節(jié)PH 8 0 加入NaCl 調(diào)節(jié)電導(dǎo)率為22M 歐姆 通過(guò)DEAE Sephadex A 50層析柱 除去熱原和色素 用0 1 氨水 0 1mol L的NaCl PH 11 5 11 8 的洗脫液進(jìn)行洗脫 用0 02 氨水 0 1mol L的NaCl的洗脫液進(jìn)行洗脫 當(dāng)流出的洗脫液從澄清開(kāi)始變混濁時(shí) 加以收集 將硅藻土的吸附物用5 的冷水洗滌 裝入層析柱 用鹽酸調(diào)節(jié)尿液的PH 6 5以下 電導(dǎo)率為20 30M 歐姆 細(xì)菌數(shù)量在1000個(gè) 毫升以下 收集洗脫液中的活性成份 雜質(zhì)被吸附在層析柱中 在4 的蒸餾水中進(jìn)行透析 2 尿激酶產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1 外觀為白色凍干粉末 2 酶活力 15000IU mg蛋白質(zhì) 三 絨毛膜促性腺激素 HCG 的制備 絨毛膜促性腺激素是一種糖蛋白 由 兩個(gè)亞基組成 絨毛膜促性腺激素由胎盤滋養(yǎng)層合體細(xì)胞分泌 婦女妊娠45 70天 尿中HCG的含量達(dá)30000 50000IU 24小時(shí) 絨毛膜促性腺激素主要用于治療女性不育癥 由于黃體功能不全引起的子宮出血 習(xí)慣性流產(chǎn) 1 工藝 絨毛膜促性腺激素的生產(chǎn)工藝包括12步 1 粗制 2 提取 3 透析 4 吸附 5 洗滌 6 洗脫 7 干燥 8 精制溶解 9 精制透析 10 精制吸附 11 精制解吸 12 精制干燥 孕婦尿 用HCl調(diào)節(jié)PH 4 5 加入苯甲酸 乙醇飽和液 孕婦尿 苯甲酸乙醇飽和液 乙醇 1 0 075 5 攪拌1小時(shí) 靜置2 3小時(shí) 上清液1 上清液2合并 在5 以下 用蒸餾水進(jìn)行透析 取透析內(nèi)液進(jìn)行離子交換層析 先將CM Sepharose柱用0 01mol L的醋酸鹽緩沖液進(jìn)行平衡 將樣品加到層析柱上 HCG粗品中加入10倍量的4 0 067mol L PH 4 8的醋酸鹽緩沖液 攪拌提取4小時(shí) 離心 取上清液1 離心后的沉淀物再用10倍量的4 0 067mol L PH 4 8的醋酸鹽緩沖液提取 取上清液2 過(guò)濾 棄濾液 得沉淀吸附物 攪拌下加入95 乙醇 直到苯甲酸全部溶解為止 即有絮狀沉淀物產(chǎn)生 靜置過(guò)夜 離心 沉淀物用95 的乙醇和丙酮洗滌 干燥 得HCG粗品 先用0 01mol L PH 4 8的醋酸鹽緩沖液洗出洗脫峰 1再用0 01mol L PH 5 9的磷酸鹽緩沖液沖出洗脫峰 2再用0 2mol L PH 8 5的醋酸鹽緩沖液沖出洗脫峰 3 從洗脫峰 3上得到的就是HCG 30 以下冷凍干燥 得HCG精品 HCG精品在10 以下的蒸餾水中溶解 溶解液用0 5mol L PH 6 8的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行透析 透析內(nèi)液進(jìn)行羥基磷灰石柱層析 步驟 1 安裝羥基磷灰石柱層析柱 2 用0 5mol L PH 6 8的磷酸鹽緩沖液平衡 3 樣品上柱 先用0 5mol L PH 6 8的磷酸鹽緩沖液洗脫 得峰 1再用1 0mol L PH 6 8的磷酸鹽緩沖液洗脫 得峰 2 從洗脫峰 2上得到的就是HCG純品 30 以下冷凍干燥 得HCG產(chǎn)品 四 白細(xì)胞介素 2 IL 2 的制備 白細(xì)胞介素 2是由活化的淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的 含有133個(gè)氨基酸的糖蛋白 1 工藝 白細(xì)胞介素 2的生產(chǎn)工藝分為10步 1 誘生 2 病毒滅活 3 硫酸銨分級(jí) 4 硫酸銨沉淀 5 除鹽 6 親和層析 7 洗滌 8 解吸 9 凝膠層析 10 洗脫 工藝流程圖示 取上清液 加入飽和硫酸銨溶液至0 35飽和度 4 靜置24小時(shí) 離心 棄去沉淀 用雞瘟病毒和絲裂原培養(yǎng)液聯(lián)合刺激人外周血白細(xì)胞 37 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 形成誘生白細(xì)胞培養(yǎng)液 得到白細(xì)胞介素 2 IL 2 組分 透析內(nèi)液裝入Sepharose 4B層析柱 用200ml PH 6 5的平衡柱緩沖液洗去不吸附的蛋白質(zhì) 用含有0 4mol L的NaCl的 PH 6 5的磷酸鈉緩沖液 PBS 洗滌親和柱 用含有1 0mol L的NaCl的 PH 6 5的磷酸鈉緩沖液 PBS 進(jìn)行解析 將沉淀物溶解于10mol L PH 6 5的磷酸鈉緩沖液 PBS 緩沖液含2 g ml 的正丁醇 0 15mol L的NaCl 然后裝入透析袋中 用10mol L PH 6 5的磷酸鈉緩沖液透析24小時(shí) 期間更換5次透析外液 取上清液 補(bǔ)充加入飽和硫酸銨溶液至0 85飽和度4 靜置24小時(shí) 離心 收集沉淀 進(jìn)行病毒滅活和固 液分離 1 用6mol L的HCl溶液調(diào)節(jié)PH 2 0 2 5 2 用6mol L的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH 7 2 7 4 3 離心除去變性沉淀的雜蛋白 對(duì)組分進(jìn)行超濾濃縮 裝入到UltrogelACA44層析柱進(jìn)行凝膠層析 要求PH 7 6 用0 2mol L的Tris HCl 0 5mol L的甘氨酸 0 1 的聚乙二醇 PEG Mr 6000 2 的正丁醇所構(gòu)成的洗脫劑進(jìn)行洗脫 得白細(xì)胞介素 2 IL 2 純品 二 動(dòng)物來(lái)源藥物的制備實(shí)例 一 胰島素的制備 二 超氧化物歧化酶 SOD 的制備 三 核糖核酸 RNA 的制備 四 透明質(zhì)酸的制備 五 肝素的制備 六 冠心舒的制備 七 硫酸軟骨素的制備 一 胰島素的制備 胰島素由二條鏈組成 A鏈21個(gè)氨基酸 B鏈30個(gè)氨基酸 胰島素是所有蛋白質(zhì)中研究得最清楚的一個(gè)蛋白 1 工藝 胰島素的生產(chǎn)工藝分為10步 1 提取 2 堿化 3 酸化 4 濃縮 5 去脂 6 鹽析 7 除去酸性蛋白 8 鋅沉淀 9 結(jié)晶除去堿性蛋白 10 洗滌 11 干燥 工藝流程圖示 取上清液進(jìn)行鋅沉淀上清液用氨水調(diào)節(jié)PH 6 2 6 4加入3 6 的醋酸鋅溶液 加入量為溶液量的20 再用氨水調(diào)節(jié)PH 6 04 下 放置過(guò)夜收集沉淀 用冷丙酮洗滌洗滌后的沉淀物進(jìn)行干燥 得胰島素粗品 鹽析物除酸性蛋白操作鹽析物加入7倍量的蒸餾水進(jìn)行溶解再加入3倍量的冷丙酮 用氨水調(diào)節(jié)PH 4 2 4 3補(bǔ)加丙酮 使得丙酮 水 3 7攪拌后過(guò)夜 離心 除去酸性蛋白質(zhì)沉淀 濃縮液迅速升溫 然后迅速降溫 除去脂肪 去脂液用NaCl溶液進(jìn)行鹽析 鹽析外液PH控制在PH 2 0 2 5之間 提取液用PH 8 0 8 4的氨水堿化4小時(shí) 除去沉淀 堿化液用PH 3 6 3 8的硫酸 在5 時(shí)酸化4小時(shí) 除去沉淀 酸化液 在30 下進(jìn)行減壓濃縮至比重為1 04 1 06 豬胰臟絞成碎末 加入2 3 2 6倍的86 88 的乙醇 5 的草酸 10 15 之間提取3小時(shí) 胰島素粗品除堿性蛋白質(zhì) 每克粗品加入2 的檸檬酸溶液50ml 6 5 的醋酸鋅溶液2ml 丙酮16ml然后再用冰水稀釋至100ml 使樣品充分溶解 冷卻至5 以下 用氨水調(diào)節(jié)PH 8 0 過(guò)濾 除去堿性蛋白質(zhì)沉淀 濾液進(jìn)行結(jié)晶操作濾液用10 的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)PH 6 0補(bǔ)加丙酮 使得溶液中的丙酮含量達(dá)到16 慢速攪拌3 5小時(shí) 使結(jié)晶析出再在5 左右放置3 4天 使結(jié)晶完全析出 收集結(jié)晶 用丙酮 乙醚反復(fù)脫水 真空干燥 得結(jié)晶胰島素純品 二 超氧化物歧化酶 SOD 的制備 超氧化物歧化酶存在于動(dòng)物 植物 微生物之中 有Gu Zn SOD Mn SOD Fe SOD等等類別 目前 美國(guó) 德國(guó) 澳大利亞等國(guó)都有產(chǎn)品生產(chǎn) 超氧化物歧化酶在抗衰老 抗輻射 消炎方面具有顯著的療效 主要用于炎癥 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎 放射治療之后的炎癥 1 工藝 超氧化物歧化酶的生產(chǎn)工藝分為12步 1 收集 2 浮洗 3 溶血 4 去血紅蛋白 5 沉淀 6 熱處理 7 沉淀 8 透析 9 層析 10 超濾 11 濃縮 12 干燥 工藝流程圖示 超濾濃縮 冷凍干燥 得超氧化物歧化酶 SOD 純品 透析液進(jìn)行層析操作 1 采用DEAE Sephadex A50層析柱 2 層析柱先用2 5mmol L PH 7 6的磷酸緩沖液進(jìn)行平衡 3 樣品上柱 用緩沖液進(jìn)行吸附 4 用2 5 5 0mmol L PH 7 6的磷酸鉀緩沖液進(jìn)行梯度洗脫 5 收集SOD的活力洗脫峰 上清液放入透析袋中 在0 的條件下透析6 8小時(shí) 沉淀物加入適量的去離子水進(jìn)行溶解 然后離心 除去水不溶性蛋白 收集上清液 在0 的條件下 澄清液中加入適量丙酮 使其產(chǎn)生大量絮狀沉淀 離心除去上清液 收集沉淀物 上清液于55 65 熱處理10 15分鐘 然后離心 除去熱變性蛋白 收集黃綠色澄清液 沉淀物加入適量的去離子水進(jìn)行溶解 然后離心 除去水不溶性蛋白 收集上清液 在0 的條件下 上清液中加入1 2 1 5倍體積的丙酮 產(chǎn)生絮狀沉淀 離心除去上清液 收集沉淀物 加入0 25倍體積的95 乙醇 0 15倍體積的氯仿 攪拌15分鐘 離心除去血紅蛋白沉淀 收集上清液 潔凈的紅細(xì)胞在5 左右 加入去離子水 攪拌30分鐘 進(jìn)行溶血 新鮮豬血離心去除血漿紅細(xì)胞用0 9 的NaCl溶液清洗3次 2 超氧化物歧化酶 SOD 電泳鑒定方法 0 5 瓊脂糖凝膠平板電泳法 或者采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法 1 緩沖液為PH 8 4的Tris Gly 2 電壓梯度22V cm 3 電流3MA cm 4 電泳時(shí)間35分鐘 5 染色液用0 5 氨基黑10B 6 7 的Hac進(jìn)行褪色處理 三 核糖核酸 RNA 的制備 采用動(dòng)物的肝臟生產(chǎn)RNA 具有其它生物來(lái)源的RNA所不具備的藥物功能 缺點(diǎn)是肝臟組織中成份復(fù)雜 因此RNA的提純難度相當(dāng)大 1 工藝 用動(dòng)物的肝臟生產(chǎn)RNA分為10步 1 勻漿制備 2 提取 3 除去雜蛋白 4 沉淀 5 除去糖原 6 精制 7 洗滌 8 溶解 9 分裝 10 凍干 在0 的條件下 攪拌加入等體積的0 2mol L的醋酸鈉溶液 再加入1 4體積的1 的十六烷基三甲基溴化銨 CTAB 0 的條件下放置30分鐘 離心得沉淀物 沉淀物除糖原操作 1 沉淀物溶解在含0 001mol L的EDTA 0 01mol L的醋酸鈉溶液中 加入等體積的2 5mol L的K2HPO4 2 不斷攪拌下再加入等體積的乙二醇甲醚 3 在0 的條件下 放置30分鐘 離心 得上清液 離心清液除蛋白質(zhì)操作 1 離心清液中加入等量氯仿 反復(fù)振蕩2 3次 直到中間界面無(wú)明顯蛋白質(zhì)層為止 2 向清液中加入1 10體積的20 的醋酸鉀 再加入2倍體積的 20 的乙醇 3 在0 的條件下 放置1小時(shí) 離心 得白色沉淀物 離心清液進(jìn)行提取 離心清液中 加入等體積的0 2mol L的三乙醇胺 1 的十二烷基磺酸鈉 SDS 0 002mol L的乙二胺四乙酸二鈉 EDTA PH 9 0 攪拌均勻 再加入等體積的90 的苯酚 苯酚中含0 2 的8 羥基喹啉 再加入等體積的氯仿 室溫振蕩30分鐘 3500r min離心20分鐘 除去沉淀物 健康的豬 牛肝臟用生理鹽水洗干凈 切成小塊 加入1 2倍量的0 1mol L的NaCl 0 05mol L的檸檬酸溶液 再加入0 001 聚乙烯硫酸脂 PVS 和0 1 的 PH 7 0的Triton溶液 用組織搗碎機(jī)搗成勻漿 3500r min 然后離心20分鐘 除去沉淀物 沉淀物進(jìn)行反復(fù)洗滌操作 1 沉淀物用0 1mol L的醋酸鈉溶液 內(nèi)含0 001mol L的EDTA 洗滌 2 再用70 的乙醇溶液洗滌 3 重復(fù)3 5次洗滌 直到?jīng)]有泡沫 沉淀物進(jìn)行過(guò)濾式除菌操作 沉淀物用 0 001mol L的EDTA 0 14mol L的醋酸鈉溶液 溶解 過(guò)濾式除菌操作 得無(wú)菌RNA溶液 灌裝 凍干 得無(wú)菌RNA純品 四 透明質(zhì)酸 HA 的制備 以雄雞冠為原料HA的生產(chǎn)工藝