細(xì)菌G染色體,細(xì)菌群體特征,放線菌形態(tài)觀察

細(xì)菌G染色體、細(xì)菌群體特征、放線菌形態(tài)觀察一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 觀察細(xì)菌菌落的特征，掌握革蘭氏染色體的原理及操作步驟，并在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體的形態(tài)。2、 辨認(rèn)放線菌的營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、孢子絲、包子形態(tài)，學(xué)習(xí)放線菌的觀察方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌的群體特征又叫培養(yǎng)特征，有菌落形態(tài)特征、液體培養(yǎng)特征、瓊脂斜面生長(zhǎng)特征以及穿刺培養(yǎng)特征。細(xì)菌菌落大多數(shù)表面光滑濕潤(rùn)，有光澤，一般菌落較小，質(zhì)地顏色均勻、多樣，同培養(yǎng)基結(jié)合不緊密。菌落特征包括大小、形狀、邊緣形態(tài)、表面狀況、顏色和透明程度，與組成菌落的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)狀況、排列方式、好氣性和運(yùn)動(dòng)性等相關(guān)。細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色體法使菌體著色，顯示出細(xì)菌的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)及特殊結(jié)構(gòu)，在顯微鏡下用油鏡進(jìn)行觀察。革蘭氏染色：主要原因是由于革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）的細(xì)胞壁的構(gòu)造不同。細(xì)菌經(jīng)初染和煤染，在細(xì)胞內(nèi)形成深紫色的結(jié)晶紫-碘復(fù)合物，當(dāng)用酒精脫色時(shí)，G+細(xì)胞壁的肽聚糖層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑收縮以致關(guān)閉，阻止不溶性復(fù)合物結(jié)晶紫-碘的逸出，這樣使菌體呈色。G-脂類物質(zhì)溶解，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物隨之被抽提，固菌體呈復(fù)染后的紅色。放線菌的絲狀體可分為營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲，放線菌用美蘭染色后，可觀察其形態(tài)。三、 實(shí)驗(yàn)步驟（一） 革蘭氏染色體1、 涂片： 取潔凈載玻片，在火焰上微熱，除去油脂，冷卻，在中央滴一小滴無(wú)菌水，用接種環(huán)接種（取菌量不要過(guò)大）。2、 干燥：涂布后，待其自然干燥。3、 固定：將已干燥好的涂片標(biāo)本向上，在微火上通過(guò)7次進(jìn)行固定。4、 染色：A、初染：在涂片處結(jié)晶紫12滴，染色90sB、煤染：滴加碘液，染90s，水洗；C、脫色：滴加95%乙醇，脫色15s，立即水洗，以終止脫色。D、復(fù)染：滴加沙黃，染色150s，水洗后晾干，也可用吸水紙輕輕吸干。5、 鏡檢：干燥后，置油鏡下觀察。（二） 菌落特征觀察 分別從正面、側(cè)面觀察大腸桿菌，枯草芽孢桿菌的菌落特征（包括大小、色澤、透明度、邊緣和表面隆起形狀）。（三） 放線菌形態(tài)觀察1、 制片： 用鑷子從培養(yǎng)皿中取出已經(jīng)培養(yǎng)47天地蓋玻片，放置在已滴加美蘭的載玻片上，用吸水紙吸取蓋玻片周圍多余的美蘭液，放在顯微鏡下觀察。2、 鏡檢： 先用低倍鏡，后用高倍鏡觀察，仔細(xì)觀察放線菌的營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲等。四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、 描述大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的菌落特征菌名菌落特征斜面生長(zhǎng)特征大?。╩m）形狀邊緣表面顏色透明度正面?zhèn)让娲竽c桿菌1.5圓形擴(kuò)展（扁平）圓鋸齒形光滑淺黃色半透明擴(kuò)展?fàn)羁莶菅挎邨U菌2圓形低凸面波狀細(xì)顆粒白色不透明念珠狀2、 繪圖：畫出在顯微鏡下觀察到的微生物的個(gè)體形態(tài)圖3、 記錄兩種菌的革蘭氏染色結(jié)果，分辨出G+和G-，如果染色不理想，請(qǐng)分析原因。菌種名稱革蘭氏染色后的菌體顏色結(jié)果大腸桿菌紅色G-枯草桿菌紫色G+4、 觀察菌落特征，并按下表要求記錄。菌種培養(yǎng)特征氣絲顏色孢子絲顏色基絲顏色色素組織狀態(tài)其他特征灰色鏈球菌灰色灰色灰白色灰色簇狀同心環(huán)狀（正面）五、 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、 涂片的過(guò)程中，滴水量要小，便于干燥；取菌量不應(yīng)過(guò)大，避免菌體重疊。2、 固定的作用：殺死細(xì)菌；使菌體蛋白質(zhì)凝固，菌體牢固黏附在載玻片上，染色時(shí)不被染液或水沖掉；增加菌體對(duì)染料的結(jié)合力，使涂片易著色。3、 沖洗時(shí)，流水量不應(yīng)過(guò)大，水流不得直接沖在涂菌處，以免將菌體沖掉。4、 脫色時(shí)間要嚴(yán)格控制，不能太長(zhǎng)或太短。六、 思考題1、 為什么必須用培養(yǎng)24h以內(nèi)的菌進(jìn)行革蘭氏染色？ 答：因?yàn)榕囵B(yǎng)24h以內(nèi)的菌落處于生長(zhǎng)活躍期，各項(xiàng)生理指標(biāo)都正常，如果時(shí)間較長(zhǎng)，菌落的細(xì)胞老化，細(xì)胞壁成分發(fā)生變化，部分陽(yáng)性菌會(huì)出現(xiàn)假陰性，染色結(jié)果導(dǎo)致錯(cuò)誤。2、 要得到正確的革蘭氏染色結(jié)果，必須注意哪些操作？哪一步是關(guān)鍵步驟，為什么？答：注意事項(xiàng)選用幼齡的細(xì)菌，若菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽(yáng)性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)；染色過(guò)程勿使染色液干涸，用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色體被稀釋而影響染色結(jié)果。關(guān)鍵步驟：酒精脫色，如果脫色過(guò)渡，G+可被脫色染成陰性菌，如果脫色時(shí)間過(guò)短，G-也會(huì)被染成革蘭氏陽(yáng)性菌；脫色時(shí)間的長(zhǎng)短還受涂片薄厚及乙醇用量多少等因素的影響。3、 當(dāng)你對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣保證操作正確，結(jié)果可靠？ 答：找事先已知的且和未知菌形態(tài)明顯不同的G+和G-分別作混合涂片，當(dāng)和G+混合做革蘭氏染色時(shí)，操作正確顯紫色；當(dāng)和G-混合做革蘭氏染色時(shí)，操作正確顯紅色，看未知菌分別顯什么色，若一致則可認(rèn)為操作此菌為G+或G-，然后，再單獨(dú)做未知菌的革蘭氏染色，進(jìn)行驗(yàn)證。4、 比較細(xì)菌和放線菌的主要區(qū)別，兩者最主要的鑒別特征是什么？答：細(xì)菌放線菌形態(tài)結(jié)構(gòu)細(xì)胞細(xì)短，形態(tài)簡(jiǎn)單（主：球狀、桿狀、螺旋狀），胞壁堅(jiān)韌細(xì)胞呈絲狀分枝，菌絲直徑很細(xì)，有孢子絲，多核的單細(xì)胞狀態(tài)繁殖主要為裂殖（二分裂、三分裂、復(fù)分裂），少數(shù)為芽殖 借孢子繁殖（分生孢子、胞囊孢子） 借菌絲繁殖（基內(nèi)菌絲斷裂、任何菌絲片段）群體特征（固）一般呈現(xiàn)濕潤(rùn)、較光滑、較透明、較粘稠，易于挑取，質(zhì)地均勻菌落正反面或邊緣與中央部位的顏色一致（液）多數(shù)表現(xiàn)為混濁，部分表現(xiàn)為沉淀，或形成菌膜（固）干燥，不透明，表面呈致密的絲絨狀