膠體金試紙條檢測(cè)技術(shù)

膠體金試紙條診斷技術(shù),一、簡(jiǎn)介,膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激素（HCG）的測(cè)定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等檢測(cè)。,膠體金（Colloidalgold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。,zeta電位可以使膠體金顆粒之間相互排斥，以維持膠體金的穩(wěn)定狀態(tài)。,基礎(chǔ)金核雙離子內(nèi)層負(fù)離子（AuC12）zeta電位外層離子層H+分散在膠體間的溶液中,膠體金顆粒對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，而不被壞其生物活性，可以與蛋白質(zhì)等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共價(jià)結(jié)合，形成膠體金標(biāo)記物。,質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱角。質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。,膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn),膠體金標(biāo)記的原理：膠體金在堿性條件下帶負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)藉靜電吸引而形成牢固結(jié)合。膠體金標(biāo)記技術(shù)（Immunogoldlabelingtechnique）是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。,二、膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理,以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測(cè)抗原/抗體。有三種反應(yīng)模式：夾心法，間接法，競(jìng)爭(zhēng)抑制法。最常用的是雙抗夾心法檢測(cè)抗原,膠體金試紙條示意圖,測(cè)定時(shí)將試紙條下端浸入液體標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動(dòng)，流經(jīng)C處時(shí)使干片上的免疫金復(fù)合物復(fù)溶，并帶動(dòng)其向膜條滲移。,測(cè)定,若標(biāo)本中有待測(cè)特異抗原，即可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測(cè)試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色反應(yīng)線條（T）。,測(cè)定,測(cè)定,過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠IgG結(jié)合（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質(zhì)控線條（R）。,測(cè)定,陰性標(biāo)本則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。,膠體金快速診斷技術(shù)的特點(diǎn),簡(jiǎn)捷快速：操作簡(jiǎn)單，一般只要5-10min就會(huì)出結(jié)果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR需要時(shí)間更長(zhǎng)。結(jié)果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。特異性好：因?yàn)樵摷夹g(shù)大多用單克隆抗體標(biāo)記，這決定了它具有很好的特異性。,病毒性疾?。簜魅拘苑ㄊ夏也　⑶萘鞲?、新城疫、犬細(xì)小病毒、豬瘟等。寄生蟲疾?。貉x病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。細(xì)菌性疾?。夯魜y弧菌、類鼻疽。,膠體金快速診斷技術(shù)的應(yīng)用,H5亞型AIV尿囊液陽性結(jié)果,陰性對(duì)照,陰性對(duì)照