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放射免疫分析Radioimmunoassay,一、原理:,Ag+AbAgAb+Ag+*Ag*AgAb+*Ag*Ag和Ab量恒定,競爭結(jié)合,+,+,+,+,6,8,X100=75%,X100=50%,X100=25%,X100=12.5%,8,4,8,2,8,1,結(jié)論,*AgAb復(fù)合物的量取決于Ag的量Ag量越大,*AgAb量越少Ag量越小,*AgAb量越大測量*AgAb量或測量多余*Ag量可推算出Ag量,二、測量步驟,恒量的*Ag、Ab加入反應(yīng)管中加入待測樣品、或標(biāo)準(zhǔn)品(已知濃度)37或4溫育加入分離劑分離結(jié)合及游離部分測定以總放射性為分母,測定*AgAb為分子,計算結(jié)合%,以結(jié)合率為縱坐標(biāo),濃度為坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線待測樣品的結(jié)合率從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度,0248163264128,8070605040302010,結(jié)合%,濃度,三、放免分析基本條件,標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)記抗原特異抗體分離劑分離結(jié)合與游離部分,分離劑要求,快速而完全分離操作簡便、來源容易、價格便宜不受血清、外界條件及其它試劑的干擾適用于任何容積的反應(yīng)液非特異結(jié)合率小,常用液相分離技術(shù),雙抗體法特點(diǎn):分離完全,非特異結(jié)合小,環(huán)境影響小,效價高,但成本高沉淀法聚乙二醇(w=6000)特點(diǎn):快速,價廉,來源方便,受環(huán)境影響大,常用液相分離技術(shù)(續(xù)),吸附法吸附游離部分,適用于分離小分子游離抗原。活性炭、纖維素粉末特點(diǎn)快速、簡便、準(zhǔn)確性差鹽析法飽和硫酸胺、硫酸鈉固相分離技術(shù),按材料不同,可分為試管法、顆粒法、小盤法、紙片法,四、放免分析的優(yōu)點(diǎn),靈敏度高特異性強(qiáng)精確度高用血量少體外測量,單位換算,1g=1000mg1mg=1000g1g=1000ng1ng=1000pg,非放射性體外分析技術(shù),非同位素標(biāo)記的條件,靈敏度結(jié)合特性均一性穩(wěn)定性環(huán)境因素的不敏感性臨床應(yīng)用安全性應(yīng)用性,非放射性體外分析技術(shù),酶免疫分析發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析酶放大化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)放光免疫分析熒光免疫分析時間分辨熒光免疫分析或解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫分析BCPDA強(qiáng)熒光螯合物的時

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