【畢業(yè)學位論文】（Word原稿）水稻大規(guī)模增強子捕獲系群體的創(chuàng)建與初步分析生物化學與分子生物學碩士論文

密級 論文編號 中國農(nóng)業(yè)科學院 碩士學位論文 水稻大規(guī)模增強子捕獲系群體的創(chuàng)建與 初步分析 目錄 摘要 . I . 一章 文獻綜述 . 1 稻基因組研究概述 . 1 簽技術(shù)及其在植物功能基因組研究中的應(yīng)用 . 2 移和整合的機理 . 3 入標簽研究基因功能的策略 . 5 和突變體庫的建立 . 8 入突變在水稻基因功能研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀 . 9 桿菌介導的基因轉(zhuǎn)化法 . 10 強子捕獲元件插入片段側(cè)翼序列的擴增及分析 . 10 研究的意義和技術(shù)路線 . 12 第二章 水稻大規(guī)模增強子捕獲系群體的創(chuàng)建 . 13 料與方法 . 13 料 . 13 法 . 14 果與分析 . 20 稻胚性愈傷轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因株系的獲得 . 20 基因植株的分子檢測 . 22 0 代轉(zhuǎn)化苗的種植和種子收獲情況 . 23 論 . 23 第三章 水稻大規(guī)模增強子捕獲系群體的初步分析 . 25 料與方法 . 26 料 . 26 法 . 26 果 . 26 論 . 29 第四章 部分水稻增強子捕獲系 . 32 料與方法 . 33 料 . 33 法 . 33 果與分析 . 35 應(yīng)體系的建立 . 35 翼序列的擴增 . 36 入 位點初步分析 . 36 論 . 37 結(jié)論及創(chuàng)新點 . 39 參考文獻 . 41 致謝 . 51 I 摘要 水稻 (.)是最重要的糧食作物之一，具有較小的基因組（ 430與其他禾本科植物的基因組具有良好的共線性，易于體外操作與分化，是研究單子葉植物基因組的模式植物。近年來水稻基因組研究取得了很大進展，構(gòu)建了遺傳圖譜和物理圖譜，完成了秈稻和粳稻的全基因組草圖測序（ Yu et 2002； et 2002） ， 2002 年 12 月 18 日 國際水稻基因組測序 計劃工作組在東京宣布，國際水稻基因組測序計劃已圓滿完成，共測定堿基對 366, 000精確度達到 并預測遺傳基因 62, 435 個。 在此基礎(chǔ)上，許多實驗室開始大規(guī)模地、系統(tǒng)地進行水稻基因功能的研究。建立水稻突變體庫是功能基因組學研究的有效手段，而高效的水稻轉(zhuǎn)化體系是建立突變體庫的重要基礎(chǔ)。本研究正是在建立起了高效水稻農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一個大規(guī)模的水稻增強子捕獲群體，并對其進行了分子鑒定，初步建立起適合該群體的擴增 翼序列的 術(shù)體 系，已擴增了部分突變體基因組中的 翼序列，并對部分側(cè)翼序列進行了測序分析。 本研究是國家“ 863”計劃項目“水稻突變體庫的建立”的一部分，在這兩年的研究中，在與實驗室全體人員的共同努力下，取得了以下幾個方面的進展： 1. 在農(nóng)桿菌 (導的水稻轉(zhuǎn)化中，發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)后的愈傷組織在選擇培養(yǎng)基上的繼代培養(yǎng)的時機對抗性愈傷組織產(chǎn)生和正常生長有很大的影響，最佳的時機是在選擇培養(yǎng) 1015天后進行繼代培養(yǎng)，這樣 90%以上的愈傷組織可以產(chǎn)生能健康生長的抗性愈傷組織；發(fā)現(xiàn)抗性愈傷組織在選擇培養(yǎng)基 上的繼代培養(yǎng)時間對后邊的分化效率有至關(guān)重要的影響，抗性愈傷組織繼代培養(yǎng) 412 天可以有比較高的分化率，超過 16 天或少于 2 天，分化率急劇降低?？剐杂鷤M織在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng) 8 天時，分化率最高，達到 85%；在胚性愈傷的誘導、共培養(yǎng)侵染菌液的最佳濃度的確定、共培養(yǎng)的時間以及轉(zhuǎn)化不同階段的最適培養(yǎng)基類型等方面的研究分析基礎(chǔ)上，優(yōu)化建立起一套高效、操作性強、適合水稻粳稻品種日本晴 (O. 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法體系。從愈傷組織誘導到得到水稻轉(zhuǎn)化體只需 左右的時間。 2. 選用增強子捕 獲質(zhì)粒（ 粳稻日本晴為實驗材料，利用農(nóng)桿菌介導的方法，獲得了 65,707 個增強子捕獲 入標簽系。經(jīng) 明 95%以上的轉(zhuǎn)化體含有 入片段。對 植株進行了 交分析， 入片段的單拷貝的植株約占 43%，平均拷貝數(shù)為 3. 對 11,560 株 水稻轉(zhuǎn)化植株抽穗期的葉和未成熟種子進行了 織化學染色， 因在抽穗期種子部位和葉部的總表達率為 在葉部的表達率為 在胚的不同部位表達率為 在種皮的表達率為 在胚乳的表達率為 篩選出 210 個在這一生育期表達活性很強的增強子捕獲系，取樣并提取了 做進一步的研究。 4. 用 增了 328 個篩選出的突變體基因組的 翼序列，對其中 82 個序列進行了測序，作了初步分析。初步建立起突變體插入序列側(cè)翼序列信息的獲得、分析等方法體系，已獲得一些有價值的 入位點信息。 關(guān)鍵詞 ： 水稻，增強子捕獲， 性組織化學測定，側(cè)翼序列， is of It is a of of 430 of as 8, 2002 66,000 NA 3,435 of in on of is an In a a to we is “863 of of as 1. In we of on on of 0as 0% We on of of on of if is 6 or As an of 5% if on We up of of . on of of of of of at It .5 of to of 2. 65,707 by O. as It is 5% CR In 0 3% is .2 3. US on 1,560 T0 at US in in of in in 210 at NA 4. 28 82 of of of of US 國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 1 第一章 文獻綜述 水稻 (.)，是人類 50%以上人口的主食，目前，世界上水稻年種植面積 生產(chǎn)量 6 億噸。因為與別的禾本科作物相比，水稻的基因組 (約 430對較小，但基因組具有良好的共線性 ( 和 和 , 1998) ，進化上的關(guān)系密切 ；另外， 水稻具有高密度的遺傳和物理圖譜，兩個亞種 . . 全基因組草圖已公布（ Yu et 2002; et 2002） ，而且水稻的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系也比較成熟，所以水稻已成為研究單子葉植物基因組的模式植物。 隨著水稻基因組的測序計劃的完成， 大量基因組序列和 料的積累，水稻基因的研究進 入到后基因時代。 功能基因組學是后基因時代的重點研究內(nèi)容，主要研究生物有機體內(nèi)各基因的功能，進而了解所有基因如何協(xié)調(diào)發(fā)揮作用完成一系列的生長發(fā)育過程。通過已知序列的 同源性比較可以預測許多未知基因的功能，也可以通過基因在染色體上的位置進行功能預測。然而，要精確了解每個基因的功能及基因間的互作功能，必須分析單個基因和多個基因的突變表型以及它們的時空表達剖面 (. et 2002)。隨著新技術(shù)新方法的不斷創(chuàng)新開發(fā)，分析鑒定基因功能的方法越來越多，并逐漸形成功能基因組學的分支學科，如比較基因組 學（ 轉(zhuǎn)錄基因組學（ 蛋白質(zhì)組學（ 代謝基因組學（ 表型基因組學（ 。但分離鑒定基因最直接有效的方法是構(gòu)建飽和的基因突變?nèi)后w，通過突變體分析鑒定基因功能，因此突變?nèi)后w的構(gòu)建是功能基因組學的基礎(chǔ) ( & , 2001; et 2002)。 水稻突變?nèi)后w的構(gòu)建方法有很多，如自發(fā)突變體的收集及利用、人工突變、化學誘 變、插入突變、基于基因沉默的突變?nèi)后w的構(gòu)建等（江樹業(yè)， 2003）。其中， 入能破壞插入基因的功能，這種功能缺失突變體的表型、生化特征的變化可以為該基因的研究提供有用的線索。變體在過去的研究中已經(jīng)證明是一種有效的手段（ et 2000; et 1997; et 1990） 。 稻基因組研究概述 最近十年以來，擬南芥 (水稻 (全長 et 2002； et 2003) ，全基因組序列 (2000； et 2002； et 2002； 2003) ，以及表達序列標簽 (測定及分析 (et 2003；et 1999； Wu et 2002) 等工作進展迅速，積累了豐富的數(shù)據(jù)資料。研究人員已經(jīng)可以利用這些序列信息來揭示大量基因 的功能。各種類型的突變體為基因功能分析提供了極大的便利，基因敲除和無效突變體尤其有價值。 作為模式材料，水稻 (.)具有很多優(yōu)點：首先，水稻已經(jīng)有 9000 多年的種植歷史，是人類 50%以上人口的主食 (1994)；其次，水稻的基因組與別的禾本科作物相比相對較小，僅 430 1991)，如高粱為 750米為 2500麥為 5,000國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 2 小麥為 15,000外，分子生物學研究的基礎(chǔ)很好，積累了大量的背景資料 (1995； et 1998； et 2000； et 2000； et 2000) ；已經(jīng)構(gòu)建了精細的物理圖譜 (et 1997； 1997； et 2001； et 2001；et 2002； et 2002) ；遺傳轉(zhuǎn)化方法也較為成熟 ( 2000)。水稻與小麥 (玉米 (大麥 (黑麥 (高粱 (禾本科作物的基因組具有良好的共線性關(guān)系，因此水稻基因組結(jié)構(gòu)和功能分析的方法、技術(shù)和結(jié)果對這些作物的相關(guān)研究有重要的借鑒作用 (1999； et 2001； 2002； 2002； et 2002； et 2003; et 2004)。近年來的研究表明，水稻和擬南芥基因組之間的同源性關(guān)系十分有限，擬南芥中得到的研究結(jié)果往往不能說明水稻和其它單子葉植物中的情況 (et 1998； et 1999; et 2002； et 2002) ，因此水稻基因組研究有著不可替代的意義。 水稻結(jié)構(gòu)基因組學的研究成果為功能基因組學研究打下了堅實的基礎(chǔ)。兩個亞種 (. . 全基因組草圖已公布（ et 2002； et 2002）。 2002 年 12 月 18 日 國際水稻基因組測序 計劃工作組在東京宣布，國際水稻基因組測序計劃第二階段的工作已圓滿完成，共測定堿基對 366,000確度達到 并預測遺傳基因62,435 個 ()； 測序分析結(jié)果表明， 98%的玉米、小麥和大麥的已知蛋白可以在水稻基因組中找到編碼其同源物的基因 (et 2002)。 分離并測定了 28， 469 個水稻全長 隆的序列；通過在公共數(shù)據(jù)庫中進行同源性查找，推測了其中 21,596 個 編碼的蛋白及其功能，發(fā)現(xiàn)有些蛋白在水稻中存在，而在擬南芥中不存在； 64%的 擬南芥是同源的 (et 2003)。 另外， 45,000 個水稻 列已測序并于 2001 年釋放到公用互聯(lián)網(wǎng)數(shù)據(jù)庫，但其中只有 25%的序列與已知功能的基因序列同源，大部分的基因序列功能有待鑒定 ( 2001)。弄清這些未知基因的功能將是序列測定完成后的下一步中心任務(wù)。功能基因組學的分析工作以高通量為特征，運用一系列新發(fā)展起來的研究技術(shù)。這些新技術(shù)以已知方法為基礎(chǔ)，經(jīng)改進后適用于大規(guī)模的基因分析 (et 2002)，如基因芯片技術(shù) ( 2002)， 涉技術(shù)( 2002)，靶基因同源重組技術(shù) (et 2002)等?；蚪M規(guī)模的插入突變戰(zhàn)略為水稻功能基因組學的研究提供了一個高通量的系統(tǒng)，近年來水稻基因標簽技術(shù)在原理和方法上都取得很大進展，使得大量快速獲得突變標簽植株成為可能 ( 2001)。 簽技術(shù)及其在植物功能基因組研究中的應(yīng)用 簽技術(shù)是以農(nóng)桿菌 (導的轉(zhuǎn)化為基礎(chǔ)的一種插入突變研究方法。插入突變是 移并整合到植物基因組中后，相應(yīng)位點 的基因的表達就可能受到抑制，由于列已知，就象在插入位點處貼了一個標簽，使得植物基因組的插入位點很容易辨認。根據(jù)插入位點的基因序列與植物表型變異的相互關(guān)系鑒定基因功能。除 簽技術(shù)外還有轉(zhuǎn)座子及逆轉(zhuǎn)座子標簽技術(shù)等 (et 2000； et 2001)。由于農(nóng)桿菌介導的水稻轉(zhuǎn)化技術(shù)非常成熟，所以 簽技術(shù)是創(chuàng)造插入突變體的有效途徑 (et 1994； et 2001)。利用質(zhì)粒挽救的方法可以擴增插入位 點的側(cè)翼序列 ( 1992； 國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 3 1998)，也可以利用 技術(shù)擴增 翼序列。若插入的是無啟動子的 報告基因，則一旦 入植物啟動子附近，就可導致報告基因的表達，從而可以在細胞或組織水平上對啟動子進行篩選（ 2001）。 由于 插入通常是穩(wěn)定的，而且主要是以單拷貝的形式插入，大大降低了基因沉默的頻率，且插入不具有基因位點特異性，可以建立飽和的 入突 變庫 ( 2002)。所以隨著農(nóng)桿菌 (導的水稻轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷完善， 入技術(shù)已成為快速構(gòu)建插入突變體庫的主要手段 (et 1999; 1997)。 移和整合的機理 自根癌農(nóng)桿菌 (根癌農(nóng)桿菌是植物冠纓病 (病原菌，其菌體內(nèi)有一個能使植物產(chǎn)生腫瘤的質(zhì)粒 (粒， 粒上含有一段 以轉(zhuǎn)移到寄主的染色體內(nèi)，此即為 叫轉(zhuǎn)移 i 質(zhì)粒 長度的 10%左右，在病原菌致病過程中，它能隨機且穩(wěn)定地整合到植物基因組中，并能穩(wěn)定表達。 有植物激素基因及產(chǎn)生特殊衍生物（ 基因，這一段基因插入寄主染色體后，即可使寄主細胞大量增生并產(chǎn)生特殊氨基酸衍生物供菌體利用。這種以基因轉(zhuǎn)移的方式迫使寄主產(chǎn)生特殊產(chǎn)物而加以利用的方式，為植物轉(zhuǎn)基因提供了一個非常有用的載體。 1983 年，科學家 們首次利用 粒作載體，將外來基因轉(zhuǎn)移至植物染色體中使其表達，由比利時根特大學的 導的研究組以及由 司 導的研究組，分別將 的致瘤基因切除，代之以外源基因，證明可以將外源基因轉(zhuǎn)入植物基因組，并從轉(zhuǎn)化細胞再生成完整的可育植株，至此第一例轉(zhuǎn)基因植物誕生。與此同時，由華盛頓大學 將細菌的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（ I）基因轉(zhuǎn)入植物細胞后，植物細胞可抗卡那霉素 (et 1998)。 自從發(fā)現(xiàn) 來，對 移是如何起始的、哪種 白幫助 鏈進入寄主細胞、 寄主細胞核中是怎么定位的以及 白和植物蛋白在 合中的作用等方面已做了大量的研究，有很多這些方面的報導。 移主要有以下幾個過程：農(nóng)桿菌附著到寄主的細胞壁； 農(nóng)桿菌中被加工剪切； 過寄主的細胞壁，細胞膜，核膜；合進寄主基因組 (賈士榮， 1994)。 關(guān)于 移和整合的機理，迄今尚不完全清楚。已知在 側(cè)是一對保守的， 25且在一系列不同植物的腫瘤 發(fā)現(xiàn)， 兩邊的端點就位于這種同向重復序列的當中或附近，所以說這種重復序列實質(zhì)上就是 邊緣區(qū)。這種重復序列同 移到植物細胞并整合到核基因組的過程有關(guān)。有證據(jù)表明，整合的 端點，是同這種重復序列緊密相連的（ 1986） 。如果缺失突變?nèi)サ?粒右邊界（ 轉(zhuǎn)移能力就會喪失。將人工合成的同野生型邊界序列一樣的一段25的寡核苷酸序 列，克隆到原先已缺失的 置上， 之也恢復了致毒力和轉(zhuǎn)移能力。不過這種恢復也有條件，即合成序列克隆的方向必須與野生型的完全一致（ 1986） 。在同植物原生質(zhì)體共培養(yǎng)的根癌農(nóng)桿菌細胞中， 在 25向重復序列處發(fā)生刪除和環(huán)化的，而且這種環(huán)狀的 其從細菌細胞向植物細胞轉(zhuǎn)移的一種中間中國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 4 形式，由此說明 邊界區(qū)在 粒的轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。 轉(zhuǎn)移與整合需要 粒上 30 編碼的基因。這個區(qū)段是由至少 6 個 基本操縱子 ( 兩個非基本操縱子 (成的。每個操縱子上的基因數(shù)目不同。 有一個基因， 含 2 個基因，而 別包含 4 個和 11 個基因。只有 組合型的操縱子，編碼一個二元系統(tǒng)（ 激活其它 因的轉(zhuǎn)錄活性（ 1986） 。 一種二聚的跨膜信號傳導蛋白，檢測由植物損傷組織釋放的信號分 子，主要是酚類復合物。激活 因子包括酸性 類復合物如乙酰丁香酮 (一些特定種類的單糖。 白在結(jié)構(gòu)上可以定義為 3 個區(qū)域：周胞質(zhì)區(qū)域和兩個跨膜區(qū)域（ 域作為信號傳導器和感應(yīng)器。周胞質(zhì)區(qū)是主要的單糖檢測器。在周胞質(zhì)區(qū)域里，接著 域的是一個兩親性螺旋，帶有強親水性區(qū)和強疏水性區(qū)。這種結(jié)構(gòu)是獨特的，別的跨膜感應(yīng)蛋白和折疊會同時與內(nèi)膜排列或錨到膜里。 激酶域，在 激活中起決定性的作用。通過一個保守 的組氨酸 基上的自身磷酸化應(yīng)答植物損傷位點的分子信號。 答低水平的酚類復合物。激活的 以把它的磷酸鹽轉(zhuǎn)移給細胞質(zhì)結(jié)合蛋白 一個保守的天冬氨酸殘基。 功能是在 因被磷酸化時作為調(diào)控其表達的轉(zhuǎn)錄因子。 C 末端是 合區(qū)，而 N 末端是磷酸化區(qū)，與 接受區(qū)域相同 (et 1990)。除了這些 粒編碼的基因之外，還已鑒定出一些位于根癌農(nóng)桿菌染色體 的基因，編碼一些轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié) 因的表達，同樣也參與了 移作用（ 1998） 。統(tǒng)的活性也受一些外部因素如溫度和 影響。在溫度高于 32時， 因由于 疊結(jié)構(gòu)的變化誘導的不活潑而不能表達。溫度對 影響能被 一種突變型 (制，激活 因的組成型表達（ 1998） 。 研究已闡明， 因在轉(zhuǎn)錄水平上表達，是受植物信號分子，例如煙草的乙酰丁香酮 ( 正調(diào)控。這些 信號分子是由植物創(chuàng)傷細胞分泌產(chǎn)生的酚類物質(zhì)，可以激活 生從細菌到植物細胞的定向轉(zhuǎn)移（ 995）。 因被誘導表達后，合成蛋白形成菌絲， 此轉(zhuǎn)移到植物細胞中。這種菌絲的成分是由 縱子編碼的（ 2000）。 白在轉(zhuǎn)移復合體的形成中起重要作用，辨認 界序列，利用內(nèi)切酶活性切割負鏈的兩端（ 1997）。推測切刻位點是 過刻切后， 然共價附著在單 末端。這種結(jié)合阻止核酸外切酶對 5端的攻擊，還作為標識使 5端作為 移復合物的前導端。單鏈 外實驗證明 存在是 解超螺旋鏈底物所必需的。受到信號分子的激活作用之后， 因編碼的一種核酸內(nèi)切酶，先在 右邊界序列序列（ 的第 3 和第 4 堿基之間切開一個單鏈缺口，隨后在 一條鏈的左邊界序列（ 切出第二個單鏈缺口，于是 以單鏈形式釋放出來，并在 列的引導下定向地從農(nóng)桿菌細胞轉(zhuǎn)移到寄主細胞。這條轉(zhuǎn)移的單 鏈特稱為 的極性轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，大概可以解釋為什么要發(fā)生 子的有效轉(zhuǎn)移，就必須有 列這個實驗性的結(jié)論。事實上，在沒有 列存在的情況下，章魚堿質(zhì)粒 列，至少能夠引導長達 20相鄰國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 5 在 列缺失時，這種轉(zhuǎn)移的 段的末端是隨機終止的（ et 2002）。 由 因編碼的 白質(zhì)是一種單鏈 合蛋白，它大概是以共價的方式與經(jīng)過加工 了的 子的 5保護其免受核酸酶的降解作用，并定向地將此 入植物細胞核內(nèi)，最終整合到染色體基因組上。由于 白具有兩個性質(zhì)不同的、在植物細胞中具有活性的核定位信號（ 因此對于 子定向?qū)爰毎鹬匾饔茫?000）。 入標簽研究基因功能的策略 入突變體策略不僅僅限于研究植物的表型變化，還可以探索基因表達模式。如增強子捕捉 (基因捕捉 (報告基因的表達依賴 于插入位點旁側(cè)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。另一種方法是建立融合表達的突變體，如激活標簽 (可以得到功能獲得性表型（ 1999）。 因敲除 (基因敲除 (零式突變 (一條確定基因產(chǎn)物功能的直接方法，若有感興趣基因的零式突變體，我們即能直接檢測缺失該基因后對有機體功能的影響。幾種基因敲除類型見圖 在功能基因組學研究中，傳統(tǒng)途徑是創(chuàng)建 入突變體群體，再利用對突變體篩選 和表型鑒定來鑒別基因，常常是靠基因被破壞后顯現(xiàn)的表型來確定基因。這種方法一直很有效，得到許多表型相應(yīng)基因功能的突變體（ 2001）。但是，這種方法不能有效鑒別功能重疊基因（即所謂的冗余基因）和那些在不同的發(fā)育階段表現(xiàn)不同功能的基因。 在現(xiàn)已研究清楚的遺傳性狀中，許多是通過功能缺失或基因敲除分析得到的，但是許多基因在功能上是重復的，它們的突變不可能導致易于識別的表型，因為同一或其它基因家族的成員可提供相同的功能，而且許多基因在多個發(fā)育階段有功能，這些基因的突變可導致早期致死，或者可能有多效性 ，它能在一個特定的代謝途徑中掩蓋某一基因的作用。此外，瞬間表達的基因、表達水平很低的基因、以及在少數(shù)細胞中表達的基因，都可能難以被鑒定出來。因此在大多數(shù)情況下基因的敲除并不能夠產(chǎn)生明顯的表型變化 (et 2000)，這給分析基因功能帶來了難度。 許多敲除突變體沒有可見的表型改變，其可能原因之一是在一個基因家族中的多個成員有功能重復。為測試這種功能重復，可將含同一基因家族不同成員突變的植株相互雜交，產(chǎn)生多個成員突變，即 變。首先創(chuàng)造雙突變系，若能存活，則與第三個成員突變的 純合系雜交，因為每個突變都有 入作為標記，故用 以確定復雜突變背景的基因型。通過這種聚合，理論上應(yīng)能敲除基因家族中的任何一個成員，使多個基因不在染色體上連鎖太緊。一旦有了多個突變系，則就可以將這些株系相互雜交，以獲得復雜的分離群體，并可用 定分離群體中具有特征表型的基因型。 因捕獲 基因捕獲技術(shù)為發(fā)現(xiàn)新基因提供了新的研究思路。基因捕捉是最近發(fā)展起來的方法。這種方法體系是依靠隨機整合到基因組的報告基因（如 ）的表達模式來鑒別基因，并不完全依賴于突變體的表 型。這種方法對于鑒別未知基因和調(diào)控序列非常有效 (1999; 中國農(nóng)業(yè)科學院研究生院碩士學位論文 文獻綜述 6 2001)