【畢業(yè)學(xué)位論文】導(dǎo)入外源GRF基因質(zhì)粒對(duì)犢牛生長(zhǎng)發(fā)育的影響碩士論文

密級(jí): 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 導(dǎo)入外源 因質(zhì)粒 對(duì)犢牛生長(zhǎng)發(fā)育的影響 士 研 究 生：張利宇 指 導(dǎo) 教 師：孫寶忠 副研究員 申請(qǐng)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士 專 業(yè)： 動(dòng)物遺傳育種與繁殖 研 究 方 向： 畜禽種質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量 培 養(yǎng) 單 位： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所 提交日期 2006 年 6 月 li 006 獨(dú) 創(chuàng) 性 聲 明 本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果， 也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。 與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。 研究生簽名： 時(shí)間： 年 月 日 關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。 (保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議) 研究生簽名： 時(shí)間： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 時(shí)間： 年 月 日 縮略語(yǔ)英漢對(duì)照表 縮略語(yǔ) 英文 中文 長(zhǎng)激素釋放因子 長(zhǎng)激素 長(zhǎng)抑素 胰島素樣因子合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 液中尿素氮 油三酯 萄糖 均日增重 F/G 重比 SS 長(zhǎng)抑素基因工程活載體苗 d kg 克 分轉(zhuǎn)數(shù) 鐘 g I 摘 要 本論文主要研究了導(dǎo)入外源液生化指標(biāo)和激素水平的影響，以及導(dǎo)入外源 因質(zhì)粒對(duì)生長(zhǎng)抑素基因工程活載體苗（）促進(jìn)犢牛生長(zhǎng)性能和激素水平的影響。 試驗(yàn)結(jié)果表明：導(dǎo)入不同劑量 因質(zhì)粒，整個(gè)飼養(yǎng)試驗(yàn)期中各處理組的生產(chǎn)性能都好于對(duì)照組。3理組的日增重分別比對(duì)照組高 （ P導(dǎo)入不同劑量 因質(zhì)粒，各處理組的尿素氮、甘油三酯與對(duì)照組相比有下降的趨勢(shì)（,. RF to ，但是在注射后 30 天再進(jìn)行測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)各處理組同對(duì)照比相比都不同程度的差異，有些處理組的差異達(dá)到了顯著水平。 （1 ）尿素氮的水平各處理組同對(duì)照組相比呈下降趨勢(shì)，我們從表中 30 天時(shí)尿素氮同對(duì)照相比可以看到這一點(diǎn)， 6下降最多，同對(duì)照組相比達(dá)到了顯著水平（，但是從圖 3我們可以看到他有一個(gè)下降的趨勢(shì)。 60 天的測(cè)定結(jié)果我們現(xiàn)， 3同對(duì)照組相比已沒(méi)有差異， 6的水平仍比對(duì)照組水平低，但已經(jīng)沒(méi)有顯著差異，此時(shí) 9尿素氮水平比 6要低，同對(duì)照組相比達(dá)到了顯著水平（重比降低 (以上結(jié)果表明注射 因質(zhì)?？梢约涌靹?dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料利用率。大量免疫化學(xué)證明，含 細(xì)胞位于弓狀核，其纖維延伸到正中隆起，國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第三章 單獨(dú)注射 因質(zhì)粒對(duì)犢牛生長(zhǎng)發(fā)育影響 被分泌到門脈系統(tǒng)，經(jīng)血液攜帶到腺垂體刺激生長(zhǎng)激素分泌細(xì)胞釋放 驗(yàn)還表明 促進(jìn)成，其機(jī)理可能是加強(qiáng)了 因的轉(zhuǎn)錄和 生成。垂體前葉存在 體， 介導(dǎo)刺激了 放，促使肝臟產(chǎn)生調(diào)節(jié)生長(zhǎng)的物質(zhì)。而 進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)是通過(guò) 現(xiàn)的。過(guò)與受體結(jié)合，誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生 直接作用于動(dòng)物體內(nèi)的各種組織，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)細(xì)胞增殖，從而促進(jìn)肌肉、內(nèi)臟和骨骼的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)通過(guò)肌肉注射 因，因在體細(xì)胞內(nèi)不斷表達(dá)、釋放，增加了血液中 度，刺激了 平的提高。進(jìn)而引起一系列的生理生化反應(yīng)，提高了的動(dòng)物生產(chǎn)性能。 基因治療上的研究表明，物的使用劑量直接影響作用的效果( 1997). 990)第一次將質(zhì)粒 作肌肉注射時(shí)就曾注意到了劑量一效應(yīng)關(guān)系的存在。10 倍量 0 倍的增加，從注射 10到 33g 蟲(chóng)熒光素酶到注射100到 320g 蟲(chóng)熒光素酶。這說(shuō)明注射 因質(zhì)粒的量越多，其相應(yīng)在體內(nèi)表達(dá)的量越多。 是不是注射劑量越大犢牛的生產(chǎn)性能就越好呢？我們從本試驗(yàn)也觀察到，并非注射劑量最高的 9理組取得了最好增重效果，我們從圖 3圖 3可以直觀地看到 6理組取得了全期的最好效果，不同試驗(yàn)組的效果由好到差的順序?yàn)?6青燕(2002)也發(fā)現(xiàn)了相似的規(guī)律，她使用 注射劑量，試驗(yàn)豬全期(6斤)的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率還能有明顯的改善，使用 注)的注射劑量后這種改善效果已經(jīng)不能觀察到了。同樣王立志也觀察到注射高注射劑量 6 9因質(zhì)粒的處理組沒(méi)有比 3注射劑量的效果好，甚至比對(duì)照組的效果還要差。張勇(2001) ，辜玉紅(2001)也有相同的結(jié)果。但從表 3可以看出，不同階段其效果也是不同的，尤其是 6理組和 9理組的比較可以看到，第一個(gè)月 6表現(xiàn)效果最好，9在第二個(gè)月表現(xiàn)效果最好。產(chǎn)生這種效果的原因與身體內(nèi)各激素的變化有關(guān)系。我們知道動(dòng)物的生長(zhǎng)受內(nèi)源激素的作用和調(diào)控，各種激素間通過(guò)促進(jìn)、協(xié)同、抑制等作用相互聯(lián)系，交織成網(wǎng)，以維持動(dòng)物生長(zhǎng)的相對(duì)穩(wěn)定。 為效應(yīng)因子，直接發(fā)揮著促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，而 為高位調(diào)節(jié)因子，是通過(guò)調(diào)控 而達(dá)到促生長(zhǎng)的作用。肌肉注射高劑量的 因質(zhì)粒，一方面使外源 肌肉組織中獲得大量表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)源 合成，另一方面，肌肉組織中的外源 放進(jìn)入血液可以使血液 濃度升高，通過(guò)負(fù)反饋?zhàn)饔脤?duì)內(nèi)源 合成和分泌產(chǎn)生抑制，同時(shí)可引起下丘腦 泌的增加，對(duì)動(dòng)物體內(nèi) 合成與分泌以及動(dòng)物的消化系統(tǒng)產(chǎn)生廣泛的抑制作用。當(dāng)外源生長(zhǎng)激素釋放因子表達(dá)量引起生長(zhǎng)激素的增加的濃度在機(jī)體生理允許范圍內(nèi)時(shí)，此時(shí) 因質(zhì)粒的注射劑量表現(xiàn)的為正效應(yīng)即日增重增加，飼料轉(zhuǎn)化率提高。但是當(dāng)外源生長(zhǎng)激素釋放因子的表達(dá)量繼續(xù)增加時(shí)，就會(huì)引起生長(zhǎng)激素的量繼續(xù)增加，當(dāng)生長(zhǎng)激素增加到的濃度已經(jīng)超過(guò)了機(jī)體的允許范圍時(shí)，就會(huì)引發(fā)生長(zhǎng)抑素的大量分泌，從而抑制內(nèi)源性生長(zhǎng)激素釋放因子的釋放和生長(zhǎng)激素對(duì)生長(zhǎng)激素釋放因子的敏感性，從而降低生長(zhǎng)激素的分泌量，此時(shí)過(guò)量的 因質(zhì)粒的表現(xiàn)就是負(fù)相應(yīng)，即日增重和飼料轉(zhuǎn)化率降低，甚至低于對(duì)照組的水平。但是隨著 因質(zhì)粒的消耗，機(jī)體血容量的增加，可能會(huì)解除生長(zhǎng)抑素對(duì)生長(zhǎng)激素釋放因子和生長(zhǎng)激素的抑制，使得 因質(zhì)粒又發(fā)揮其促生長(zhǎng)的作用。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 6在 2 個(gè)月的飼養(yǎng)期中的表現(xiàn)效果最好，但是如果隨著飼養(yǎng)時(shí)間的增加，9就會(huì)表現(xiàn)出后效應(yīng)。具體效果還需要進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。 30 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第三章 單獨(dú)注射 因質(zhì)粒對(duì)犢牛生長(zhǎng)發(fā)育影響 有研究表明，給豬直接注射 使豬肝臟（，1985；，1972） 、腎臟和心臟（，1985；，1993） 、肺（，1990）的重量增加，但是，我們?cè)谠囼?yàn)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象，在 2 個(gè)月的飼養(yǎng)其中，注射 因質(zhì)粒沒(méi)有對(duì)犢牛的體尺和器官占體重的比例造成顯著性的影響，這可能由于生長(zhǎng)激素和生長(zhǎng)激素釋放因子的半衰期非常短只有 10接注射 導(dǎo)致體內(nèi)生長(zhǎng)激素的濃度瞬間升高，從而造成內(nèi)臟器官的變化。而 因質(zhì)粒進(jìn)入到體內(nèi)后是一個(gè)緩慢釋放的過(guò)程，是漸進(jìn)式表達(dá)。在注射劑量不是太過(guò)量的情況下，對(duì)內(nèi)臟器官就不會(huì)有顯著的影響。 入 因質(zhì)粒時(shí)間與效應(yīng)關(guān)系 質(zhì)粒 過(guò)肌肉注射入動(dòng)物體內(nèi)以后，目的基因需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間才可能進(jìn)行表達(dá)生成白，而達(dá)到最大表達(dá)效率的時(shí)間則會(huì)更長(zhǎng)。這種時(shí)間跨度可因目的基因的種類、質(zhì)粒載體、注射方式的不同而不同。(1990) 將含熒光素酶基因的 粒注射入老鼠的骨骼肌，2天后能在骨骼肌中檢測(cè)到熒光素酶的活性， 15 天后酶的活性達(dá)到最高。朱小君等(1994) 采用縫線法將 因質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大鼠的股四頭肌，2 天后 因開(kāi)始有明顯的表達(dá)，7 天時(shí)達(dá)到最高峰。鄭潤(rùn)等(1998) 將含人生長(zhǎng)激素的重組真核表達(dá)質(zhì)粒直接注射入小鼠的后肢肌肉， 20 天后表達(dá)水平達(dá)到最高。 本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)激素水平在 15 天左右時(shí)，各處理組都產(chǎn)生了一個(gè)高峰說(shuō)明 15 天附近時(shí)質(zhì)粒的表達(dá)量，達(dá)到了最大值，隨著時(shí)間的推移 3在 45 天左右時(shí)生長(zhǎng)激素的量與對(duì)照組已沒(méi)有差異，說(shuō)明此時(shí) 3的質(zhì)粒已經(jīng)耗盡或量已經(jīng)非常少。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)， 6的質(zhì)粒還有促進(jìn)生長(zhǎng)激素分泌增加的作用但是作用已經(jīng)非常微弱。而 9在試驗(yàn)結(jié)束前還有很強(qiáng)的促生長(zhǎng)激素分泌的作用，由于試驗(yàn)時(shí)間的限制還有待進(jìn)一步考察。 因質(zhì)粒對(duì)激素水平變化的影響 注射生長(zhǎng)激素釋放因子基因質(zhì)?？梢允蛊湓趧?dòng)物體內(nèi)表達(dá) 白，這與（，1999；張永亮等， 2000；張勇 2001；王立志 2002）研究一致，研究認(rèn)為：注射 因質(zhì)粒后血液中 白的提高是由于其進(jìn)入體內(nèi)后進(jìn)行表達(dá)的結(jié)果。張永亮等（2000）給大鼠肌肉注射 因質(zhì)粒 30 天后用 測(cè)到質(zhì)粒及其表達(dá)得到的陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)對(duì)注射處肌肉進(jìn)行免疫組化分析可檢測(cè)到 白，說(shuō)明質(zhì)粒在大鼠肌肉內(nèi)存在和表達(dá)。 由于試驗(yàn)的限制，本試驗(yàn)并沒(méi)有測(cè)定與此密切相關(guān)的所有激素，而是選取了生長(zhǎng)激素和生長(zhǎng)抑素兩種激素來(lái)檢測(cè)表達(dá)的情況，我們知道，生長(zhǎng)激素釋放因子和生長(zhǎng)抑素在高位控制低位的生長(zhǎng)激素和 分泌。生長(zhǎng)激素釋放因子分泌量的增加會(huì)引起生長(zhǎng)激素和 增加，但是同時(shí)也會(huì)引發(fā)生長(zhǎng)抑素分泌的增加來(lái)平衡生長(zhǎng)激素的濃度，所以可以通過(guò)生長(zhǎng)激素和生長(zhǎng)抑素的濃度變化來(lái)觀察其他幾個(gè)重要激素的變化。 通過(guò)本試驗(yàn)可以觀察到，隨著注射量的增加，生長(zhǎng)激素的分泌量在 6劑量處有一個(gè)高峰，也就是說(shuō)在 6下的注射劑量生長(zhǎng)激素的分泌量在增加，當(dāng)注射劑量超過(guò) 6，生長(zhǎng)激素的分泌量開(kāi)始有所下降。伴隨著生長(zhǎng)抑素的變化我們發(fā)現(xiàn)， 6注射劑量已輕微引發(fā)生長(zhǎng)抑素分泌的增加，隨著量的繼續(xù)加大 9理組生長(zhǎng)抑素的量已經(jīng)顯著增加（+6組, 而第二個(gè)月情況有所變化各處理組的效果為 +6+3。第二個(gè)月時(shí) +6的效果要好于 +3。 因質(zhì)粒與 共同使用對(duì)犢牛血液激素水平的影響 表 4牛激素水平變化 射后時(shí)間 SS g +62 H +3長(zhǎng)抑素 (ng/60d pg/60d 圖 4以看出：不同的處理組生長(zhǎng)激素在注射后 15 天左右都有由升高的趨勢(shì)圖 4因質(zhì)粒與 共同作用對(duì)生長(zhǎng)激素的影響 of of RF S H d）GH（ng/因質(zhì)粒與 共同作用對(duì)生長(zhǎng)抑素的影響 of of RF S S 0607080901001100 15304560注射后天數(shù)（d）SS（pg/國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第四章 因質(zhì)粒對(duì) 促進(jìn)犢牛生長(zhǎng)效果的影響 其中，圖 4出：注射后 30 的時(shí)間內(nèi) +3 論 分泌是脈沖式的，主要受 生長(zhǎng)激素抑制素（也稱生長(zhǎng)抑素 兩種+3升高的幅度最大同單獨(dú)注射 組相比提高了 達(dá)到了極顯著水平（P+6生長(zhǎng)激素增加幅度沒(méi)有 +3大, 但同 ，到 30 天時(shí)可以看到 組生長(zhǎng)激素水平在增加，+3在緩慢下降，而 下降幅度較大生長(zhǎng)激素水平同 組的水平相當(dāng)。 45 天時(shí) 組的激素水平還在緩慢上升，此時(shí) +3的水平與 組相當(dāng)，而 +6此時(shí)生長(zhǎng)激素水平又達(dá)到了一個(gè)小高峰，到 60 天時(shí)三個(gè)處理組的激素水平相當(dāng)，但同注射前的激素水平相比較，各處理組的水平仍然高于試驗(yàn)前水平 生長(zhǎng)抑素的變化可以從由表 4素的水平一直在緩慢下降，過(guò)了 30階段，生長(zhǎng)抑素的水平穩(wěn)定在 62pg/右。而對(duì)于 +6，生長(zhǎng)抑素在注射后 15 天內(nèi)有緩慢上升趨勢(shì)， 30 天時(shí)有一個(gè)高峰，此后生長(zhǎng)抑素開(kāi)始下降，最終下降到同另外兩個(gè)處理組相近。 激素的共同調(diào)節(jié)。 泌合成的促進(jìn)作用是與 抑制 泌的作用并存的，共同維持著 周期性脈沖分泌（，1984） 。此外，離體試驗(yàn)結(jié)果表明，抑制 自發(fā)分泌，對(duì) 激垂體 泌有明顯拮抗作用。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果也證明：下丘腦提取的 合成的 可抑制體內(nèi) 自發(fā)分泌。 主動(dòng)和被動(dòng)免疫均可使 平明顯提高（， 1979）。 血清可使 基礎(chǔ)值明顯上升，而脈沖式分泌未受影響，并增加 值時(shí)的反應(yīng)（C,1985 ）。 下丘腦強(qiáng)直分泌到垂體門脈血液中，這兩種激素的周期為 3 4h，相差約 180，也就是說(shuō)，兩者交替節(jié)律式分泌，調(diào)節(jié)著 脈沖式分泌。本試驗(yàn)中的 因質(zhì)粒能夠增加犢牛 濃度，而 可以起到中和體內(nèi)部分生長(zhǎng)抑素的作用。通過(guò)二者的共同使用我們發(fā)現(xiàn)，在生長(zhǎng)抑素注射量一定的時(shí)候，注射不同劑量的 因質(zhì)粒在一定范圍內(nèi)可以進(jìn)一步改善犢牛的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中 +3同單獨(dú)注射 相比取得了較好的增重效果。+6效果相對(duì)較差，這與上一個(gè)試驗(yàn)相反。說(shuō)明 與 3因質(zhì)粒共同使用促進(jìn)了動(dòng)物生長(zhǎng)性能的改善，具有協(xié)同作用，從生長(zhǎng)激素和生長(zhǎng)抑素的變化量我們以可以看出， +3從生長(zhǎng)激素的基礎(chǔ)水平和峰值分泌量的增加提高了生長(zhǎng)激素在體內(nèi)的整體水平，而此時(shí)的水平正好在機(jī)體的生理允許范圍之內(nèi)。而 與 6因質(zhì)粒共同使用沒(méi)有超過(guò) +3的效果，反而還有所下降，主要由于兩者共同作用所產(chǎn)生的生長(zhǎng)激素的量已經(jīng)超過(guò)了機(jī)體的允許范圍，引起了機(jī)體的負(fù)反饋，雖然 可以中和部分生長(zhǎng)抑素，但其中和的能力不是無(wú)限的，這樣就會(huì)變現(xiàn)出生長(zhǎng)抑素的濃度大量增加，此時(shí)二者的作用就不是協(xié)同作用，而是變成了拮抗作用，即兩者都不發(fā)揮作用了，或者說(shuō)作用相抵消了，外部的表現(xiàn)生長(zhǎng)變慢，生長(zhǎng)性能下降。而這種拮抗也并總是存在，我們?cè)趫D 4以看到在 45 天左右時(shí) +6的生長(zhǎng)激素的分泌量有一個(gè)高峰，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因有可能是，此時(shí)隨著 因質(zhì)粒的消耗其表達(dá)生成的 隨之降低，解除了負(fù)反饋。同時(shí)由于 的作用使得生長(zhǎng)抑素的量明顯降低，這一點(diǎn)由圖 4可以看出。所以生長(zhǎng)激素的量有一定的上升。隨著質(zhì)粒的消耗生長(zhǎng)激素升高主要是由 的作用帶37 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第四章 因質(zhì)粒對(duì) 促進(jìn)犢牛生長(zhǎng)效果的影響 來(lái)的。 論 （1 ） 因質(zhì)粒同 共同作用可以起到進(jìn)一步提高犢牛生長(zhǎng)性能的作用，其中 +3（蝕斑單位為 5107g）不變時(shí)，注射 3單獨(dú)使用 的日增重增加 料重比降低 （2 ）在 注射劑量不變的情況下， 粒注射量達(dá)到 6上劑量時(shí)，兩者使用效果降低。 （3 ）在 射 6牛生長(zhǎng)激素水平已經(jīng)開(kāi)始下降；生長(zhǎng)抑素的水平隨著因質(zhì)粒注射量的增加而升高。38 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第五章 總結(jié)論 第五章 總結(jié)論 1. 在兩個(gè)月的飼養(yǎng)期中，單獨(dú)注射 3量的因質(zhì)粒都能提高犢牛的日增重和降低料重比，其中注射劑量 6于或低于 6與斑單位為 5107g）共同使用時(shí)， 3因質(zhì)粒的注射劑量由于與發(fā)生拮抗而導(dǎo)致?tīng)倥Ｉa(chǎn)性能下降；本試驗(yàn)中兩種劑量的因質(zhì)粒與2. 因質(zhì)粒注射到犢牛半肌腱部位，15 天左右 因質(zhì)粒表達(dá)達(dá)到高峰。 3. 單獨(dú)注射 因質(zhì)粒以及 因質(zhì)粒與 共同注射都可以提高犢牛生長(zhǎng)激素的水平，其中單獨(dú)注射 6因質(zhì)粒提高幅度最大是對(duì)照組的 （P，因質(zhì)粒與 共同使用， 3S 苗組提高幅度最大，是單獨(dú)注射 的 。 4. 生長(zhǎng)抑素的分泌量隨著 因注射劑量的增加而升高。 5. 注射 因質(zhì)?？梢越档脱褐心蛩氐透视腿サ乃?，提高血中葡萄糖的濃度，最終體現(xiàn)為蛋白質(zhì)合成作用的加強(qiáng)，脂肪分解加快，犢牛的瘦肉率提高。 6. 注射 6因質(zhì)粒時(shí)，犢牛體斜長(zhǎng)、胸圍和鬐甲高增加的幅度最大。 7. 注射 因質(zhì)粒對(duì)犢牛的器官的比例沒(méi)有顯著影響。 39 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 參考文獻(xiàn) 參考文獻(xiàn) 1. 白忠斌，張永亮，田寶磊等. 原生質(zhì)體介導(dǎo)的外源性 因?qū)π∈笤鲋氐难芯? 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003 ，24（ 5）： 76. 陳主初. 一種有效的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)J. 湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990 ，（ 2）： 189. 鄧柏林，張永亮，籍玉川，張維. 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