臨床微生物標(biāo)本的采集ppt課件

.,臨床微生物標(biāo)本的采集、運送和處理,.,臨床微生物檢測的目的,協(xié)助臨床醫(yī)生明確疾病的診斷并治療感染性疾病規(guī)范臨床抗生素的應(yīng)用幫助院感加強多重耐藥菌和特殊病原菌的監(jiān)測,.,從微生物標(biāo)本接收后，實驗室的工作就是：,生物安全柜,恒溫培養(yǎng)箱,.,.,標(biāo)本采集、運送及處理過程中的生物安全,一、采集標(biāo)本過程中需戴手套、穿工作服、戴防護口罩，必要時戴防護眼鏡、穿隔離服。二、采集到的原始標(biāo)本應(yīng)采用防漏可密封的無菌管或杯型容器收集。外加防漏可密封的塑料袋，袋上應(yīng)注明標(biāo)本信息以及印有生物安全標(biāo)志。,.,標(biāo)本采集、運送及處理過程中的生物安全,三、用帶針頭的注射器采集的標(biāo)本應(yīng)移至無菌管內(nèi)或用防護性裝置套住針頭，再置于密封、防漏的塑料袋內(nèi)送檢。四、不要將泄漏的標(biāo)本送到實驗室或隨意處理。若需重送，舊的標(biāo)本需高壓滅菌后棄去。,.,標(biāo)本采集的基本原則,標(biāo)本的正確選擇、采集和運送是實驗室工作準(zhǔn)確和有效的前提，是保證實驗室質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，。(早、無、藥、適、時機),.,標(biāo)本采集的基本原則,一、盡早采集一旦懷疑細菌感染，應(yīng)及時采集標(biāo)本進行細菌學(xué)檢驗，盡早獲得病原學(xué)診斷和抗生素敏感資料，對細菌感染的治療具有極其重要意義。采集時間最好是病程早期、急性期，確保病原菌的檢出。,.,標(biāo)本采集的基本原則,二、遵守?zé)o菌操作在采取血液、穿刺液或腦脊液等正常狀態(tài)下的無菌部位標(biāo)本，應(yīng)嚴格注意無菌操作，不得被其他部位細菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位應(yīng)采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。盛放標(biāo)本的容器應(yīng)無菌。,.,臨床常見的各種送檢標(biāo)本,無菌標(biāo)本血液骨髓腦脊液胸腹水關(guān)節(jié)液膽汁,非無菌標(biāo)本痰尿大便生殖道標(biāo)本耳泌物,.,微生物標(biāo)本送檢,天然棉花及木棒,bact,.,微生物標(biāo)本送檢,bact,.,微生物標(biāo)本送檢,.,標(biāo)本采集的基本原則,三、在抗生素應(yīng)用前采集感染會發(fā)生生命危險，臨床醫(yī)生會在細菌學(xué)檢驗出結(jié)果之前使用抗生素治療，而抗生素的使用將影響病原菌的檢出。,.,標(biāo)本采集的基本原則,四、選擇不同采集時機和標(biāo)本種類根據(jù)臨床癥狀和流行病學(xué)資料，可大致對感染性疾病的病原體作大致的估計，根據(jù)病程和感染部位的不同，選擇合適時機采集不同標(biāo)本。如傷寒患者，發(fā)病第一周應(yīng)采集血液、第二周應(yīng)采集糞便和尿液，否則影響細菌的檢出率。,.,標(biāo)本采集的基本原則,五、適量標(biāo)本標(biāo)本量太少，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果；標(biāo)本盡量不用以天然棉花及木棍制成的拭子采集標(biāo)本（不飽和脂肪酸、干燥）；,.,標(biāo)本的運送,1.把握好時間標(biāo)本采集后立即送檢，送檢時間不得超過2h，否則會影響病原菌的檢出。少量液體（1ml）或組織（38）或低溫（10*109/L）皮膚黏膜出血休克多器官衰竭血壓降低C反應(yīng)蛋白升高及呼吸加快血液病患者出現(xiàn)粒細胞減少、血小板減少,.,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽性檢出率偏低血培養(yǎng)污染問題血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當(dāng)沒有及時送檢,送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數(shù)的影響,.,血培養(yǎng)送檢率,國內(nèi)多數(shù)三甲綜合醫(yī)院1020瓶/天復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院2050瓶/天香港瑪麗醫(yī)院200瓶/天臺灣大學(xué)醫(yī)院300瓶/天,.,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽性檢出率偏低血培養(yǎng)污染問題血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當(dāng)沒有及時送檢,送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數(shù)的影響,.,血液標(biāo)本采集時機,使用抗菌藥物之前或停藥24小時后寒戰(zhàn)和發(fā)熱高峰3060min內(nèi)（研究表明細菌通常在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前1小時左右進入血流）,.,血液標(biāo)本采集時機,懷疑感染性心內(nèi)膜炎或其他靜脈內(nèi)感染（如導(dǎo)管相關(guān)性感染）時，可分開時段分部位采集：,.,導(dǎo)管相關(guān)血流感染,導(dǎo)管相關(guān)血流感染（CatheterRelatedBloodStreamInfection,簡稱CRBSI）指帶有血管內(nèi)導(dǎo)管或者拔除血管內(nèi)導(dǎo)管48小時內(nèi)的患者出現(xiàn)菌血癥或真菌血癥，并伴有發(fā)熱（38）、寒顫或低血壓等感染表現(xiàn)，除血管導(dǎo)管外沒有其他明確的感染源。,.,導(dǎo)管,送檢指征在ICU病房內(nèi)攜帶中心靜脈導(dǎo)管超過48小時，出現(xiàn)原因不明的發(fā)燒或低血壓的患者，兒童患者出現(xiàn)低體溫者。,.,送檢方法,1、保留情況：采取至少2套血培養(yǎng)，其中至少一套來自外周靜脈，另外的一套則從導(dǎo)管中心無菌采獲，兩個來源的采血時間必須接近（5分鐘），各自做好標(biāo)記。2、不保留情況：從獨立的外周靜脈無菌采集2套血培養(yǎng)。無菌狀態(tài)下取出導(dǎo)管并剪下5cm導(dǎo)管尖端或近心端送往實驗室進行Maki半定量平板滾動培養(yǎng)。,.,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽性檢出率偏低血培養(yǎng)污染問題血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當(dāng)沒有及時送檢,送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數(shù)的影響,.,血培養(yǎng)瓶,需氧瓶,厭氧瓶,一套血培養(yǎng)=1瓶需氧+1瓶厭氧,.,血液標(biāo)本采集方法,采集量：成人每瓶采血量為810ml，兒童每瓶采血量為13ml采用“雙側(cè)雙瓶”原則。即2套血培養(yǎng)（1套為1瓶需氧和1瓶厭氧）。成人每套不少于10ml，嬰幼兒僅用需氧瓶，采用兩只需氧瓶為2套血培養(yǎng)，不少于4ml。,兒童患者因血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無需等同于成人,.,采血的總量是影響檢出病原菌的重要因素之一。,采血量一套血培養(yǎng)（抽20ml血液）二套血培養(yǎng)三套血培養(yǎng),陽性檢出率65%80%96%,.,血液標(biāo)本采集時機+采血量,急性感染患者，應(yīng)在5min內(nèi)從不同部位分別采23套血培養(yǎng)發(fā)熱原因不明患者，在24h內(nèi)應(yīng)從不同部位采23套，間隔不少于60min?？梢尚膬?nèi)膜炎患者，起始采集3套血培養(yǎng)（每次間隔不少于30min），如果24h內(nèi)培養(yǎng)陰性，則應(yīng)繼續(xù)采集2套血培養(yǎng)亞急性感染性心內(nèi)膜炎，需在30min至1h內(nèi)連續(xù)抽取數(shù)套血培養(yǎng)（以證明細菌感染的連續(xù)性）然后才開始抗菌藥的經(jīng)驗治療。,.,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽性檢出率偏低血培養(yǎng)污染問題血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當(dāng)沒有及時送檢,送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數(shù)的影響,.,血液標(biāo)本采集方法,靜脈采血，應(yīng)嚴格消毒血培養(yǎng)瓶蓋和皮膚，用無菌采血裝置采血，不換針頭，直接將血液標(biāo)本注入血培養(yǎng)瓶中，注入血液后應(yīng)顛倒混勻以防凝固。采用真空采血裝置可降低污染。采血部位：成人采用肘靜脈，兒童和嬰幼兒多為頸部和腹股溝。成人不建議采集動脈血，不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血，因其常伴有高污染率。,嚴格消毒原因為：采血部位皮膚皺褶多，易造成皮膚寄生菌污染,.,血培養(yǎng)瓶接種順序有學(xué)問,用注射器采血時：首先接種厭氧瓶避免空氣進入，所以接種順序為先接種厭氧瓶，后需氧瓶。用蝶形針采血時：血液首先裝入需氧瓶，以免裝置里的空氣傳送到厭氧瓶中。所以它的順序為先接種需氧瓶，后接種厭氧瓶。特殊情況：如果抽取血液量很少時，血液應(yīng)首先接種到需氧瓶中，因為多數(shù)菌血癥是由需氧菌和兼性厭氧菌感染導(dǎo)致的，剩余的血再接種厭氧瓶。,.,血培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題,血培養(yǎng)陽性檢出率偏低血培養(yǎng)污染問題血培養(yǎng)瓶的保存與運送不當(dāng)沒有及時送檢,送檢率偏低采血時機不合適藥物對細菌培養(yǎng)的影響采血量不足影響細菌生長套數(shù)的影響,.,血液標(biāo)本的運送,采集后的血培養(yǎng)應(yīng)在1h內(nèi)送達，不能及時送達時，需置室溫下保存，不可冷藏或冷凍。(因為若感染菌為肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌遇冷易死亡),.,泌尿生殖道標(biāo)本一、尿液標(biāo)本適應(yīng)癥：尿路感染腎結(jié)核泌尿系結(jié)石膀胱排空功能受損前列腺增生的患者,.,送檢指針：,出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛等膀胱刺激癥，肉眼膿尿或血尿，尿常規(guī)檢查有白細胞或亞硝酸鹽陽性，不明原因的發(fā)熱或留置尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱、尿道口有膿性分泌物等癥狀，泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前等情況,.,采集時間：抗菌藥物使用前或停藥5天后采集尿液標(biāo)本，通常采集晨尿，確保尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上。,.,采集方法,1、清潔中段尿采集法：囑患者晨起用溫和肥皂水清潔會陰后，棄去前段尿，留取中段尿10ml15ml于滅菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢。2、膀胱穿刺采集法：嚴格無菌操作消毒恥骨聯(lián)合上皮膚，用無菌注射器穿刺入膀胱抽取510ml尿液于滅菌容器送檢。該方法帶給病人有一定的痛苦3、導(dǎo)尿法：直接導(dǎo)尿采集法、留置導(dǎo)尿采集法,.,采集方法,直接導(dǎo)尿按常規(guī)方法消毒會陰后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，先棄去前段15ml，再留取1015ml膀胱尿液于無菌容器送檢。留置導(dǎo)尿用碘酒消毒尿道口處的導(dǎo)尿管壁，用聯(lián)空針筒的細針斜穿管壁抽吸尿液1015ml，置于無菌容器中送檢,.,采集方法,四、集尿法懷疑結(jié)核分枝桿菌感染時，可用一清潔容器留24h尿，取其沉渣1015ml送檢。,.,尿液標(biāo)本的運送,標(biāo)本采集后及時送檢和接種，室溫下存放時間不得超過2h（夏季保存時間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），48保存時間不得超過24h，當(dāng)應(yīng)注意冷藏保存不用于疑為淋病奈瑟菌感染病人,.,常見臨床標(biāo)本的采集及處理,泌尿生殖道標(biāo)本二、生殖道和尿道標(biāo)本送檢指針：,女性患者外陰陰道炎細菌性陰道炎陰道潰瘍尿道炎宮頸炎子宮頸炎子宮內(nèi)膜炎輸卵管炎卵巢膿腫,男性患者尿道炎附睪炎前列腺炎生殖器,.,標(biāo)本采集（根據(jù)不同感染種類和病變特征采集不同的標(biāo)本）,尿道分泌物患者排尿1h后采集，男性用生理鹽水局部清洗，采取從尿道口溢出的膿性分泌物，或尿道內(nèi)24cm旋轉(zhuǎn)拭子停留20s后取出分泌物；女性清洗尿道口后，從尿道內(nèi)壓迫尿道，使分泌物溢出后采集標(biāo)本，無肉眼可見的膿液，可用滅菌拭子輕輕深入前尿道內(nèi)24cm旋轉(zhuǎn)拭子停留20s取樣送檢生殖器標(biāo)本用無菌鹽水和手術(shù)刀清除潰瘍面，暴露出潰瘍基底，滲出物積聚較明顯時，用拭子或吸管采集,.,送檢指針：腹瀉病人出現(xiàn)以下任一情況時建議采集糞便標(biāo)本進行培養(yǎng)：腹瀉、大便每日3次，糞便的性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便及血便，可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發(fā)熱、腹痛及全身不適等；病情嚴重者，因大量丟失水分引起脫水、電解質(zhì)紊亂甚至休克；糞便涂片鏡檢白細胞5個/hp；抗菌藥物治療后腹瀉；來自疫區(qū)的患者,常見臨床標(biāo)本的采集及處理糞便標(biāo)本,.,采集方法,自然排便采集法自然排便后，挑取有膿血或粘液部分的糞便，液狀糞便取絮狀物盛于無菌容器內(nèi)或置于保存液中送檢，若不能及時送檢，應(yīng)按1:10比例與ph7.0磷酸鹽甘油緩沖液混合保存，以防病原菌死亡而影響檢出率,.,直腸拭子采集法適于排便困難患者或嬰幼兒。,.,采集量,一般用拭子采集大于2g的標(biāo)本送檢，若標(biāo)本為水樣，采集大于2ml的標(biāo)本置于無菌容器中送檢,.,采集時間及頻率,采集時間盡可能在發(fā)病早期（急性期）和應(yīng)用抗菌藥物治療之前，采集新鮮糞便送檢，以提高檢出率。懷疑沙門菌感染時，應(yīng)在發(fā)病2周以后采集標(biāo)本送檢采集頻率重復(fù)采集標(biāo)本的頻率每日最多1次,.,痰標(biāo)本,適應(yīng)癥：咳嗽咳出膿性痰或鐵銹樣痰咯血鮮血和痰中帶血等呼吸困難呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛、X線檢查提示肺部有炎性浸潤或胸腔積液發(fā)熱伴有白細胞以及中性粒細胞升高或CRP明顯升高,.,標(biāo)本的采集,一般以晨痰為好；支氣管擴張癥患者清晨起床后進行體位引流，可采集痰標(biāo)本。自然咳痰采集法：在留取痰之前，用溫清水反復(fù)漱口，以減少常居菌的污染，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入無菌容器中。氣管穿刺法：在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本。,.,不合格標(biāo)本的處理,對下列不合格的標(biāo)本應(yīng)拒收申請單姓名、科別、床號與標(biāo)本的標(biāo)簽不符痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣痰涂片白細胞25/LP標(biāo)本容器溢漏，無蓋子痰標(biāo)本留取放置時間太長，超過2h未用指定的無菌容器留痰做細菌培養(yǎng),.,標(biāo)本的運送,標(biāo)本采集后需盡快（小于2h）送至實驗室，不及時運送可導(dǎo)致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等病原菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶想象而死亡。延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4冰箱保存（疑為肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌感染標(biāo)本不能冷藏），以免雜菌生長，但保存標(biāo)本應(yīng)在24h小時內(nèi)處理。對可疑烈性呼吸道傳染病（SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者檢驗標(biāo)本，在采集、運送或保存過程中必須注意生物安全防護。,.,膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本采集,送檢指針：局部感染：紅、腫、熱、痛和功能障礙全身癥狀：輕重不一、常有發(fā)熱、頭痛、全身不適、乏力食欲減退等。（白細胞計數(shù)增加、crp升高）疑為軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染,.,采集方法：,開放性膿腫：包括眼、耳、扁桃體、術(shù)后切口感染等膿性分泌物首先用無菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，用無菌棉拭子先蘸少許無菌生理鹽水，然后采取靠近組織部分膿液及病灶深部的分泌物立即送檢。閉鎖性膿腫：指完整膿壁與體腔，及與外界不相通的膿腫采集前需對患者病灶局部皮膚或粘膜表面用2.5%-3%碘酊消毒、75%乙醇脫碘，用無菌注射器將膿腫內(nèi)容物吸出。,.,明明送檢的是膿液，可培養(yǎng)結(jié)果卻是“無菌生長”？,.,標(biāo)本采集前已經(jīng)使用了抗生素厭氧菌膿液組成物是壞死的白細胞和溶解的細菌組織碎片，沒有活細菌生長。建議送檢壞死和新鮮交界處的組織，取基底部或邊緣部采樣送檢。盡量針吸或組織培養(yǎng)比棉簽拭子更可靠。,.,注意事項：,應(yīng)盡可能在使用抗菌藥物前采集標(biāo)本，若患者已用藥，需注明抗菌藥物名稱。并在下次用藥前采集對于開放傷口，應(yīng)先采樣后清創(chuàng)。采集標(biāo)本前應(yīng)除去表面污染菌干燥、結(jié)痂傷口的標(biāo)本一般不做培養(yǎng)，除有滲出物閉合膿腫應(yīng)取滲出物和膿腫壁標(biāo)本，盡量不用拭子采集標(biāo)本，以防標(biāo)本干燥對于開放病灶和膿腫，應(yīng)盡量去除表面污染菌，用拭子在病灶活動區(qū)域或基底部采集標(biāo)本。,.,腦脊液,采集時間：立即在使用抗菌藥物以前采集量：用腰穿方法無菌操作采集腦脊液35ml，分裝到3個無菌試管中