輸血相容性檢測室內(nèi)質控操作規(guī)程

輸血相容性檢測室內(nèi)質控操作規(guī)程【目 的】規(guī)范輸血科各級檢驗人員室內(nèi)質控操作程序，確保檢驗結果準確、可靠?！具m用范圍】適用于輸血相容性檢測項目?！韭?責】輸血科全體員工均遵守執(zhí)行。（一） ABO、RhD血型室內(nèi)質控操作規(guī)程【檢驗原理】 選擇已知型別的紅細胞和血清，根據(jù)其與在用試劑標準血清：抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型紅細胞及ABO血型抗原檢測卡（微柱凝膠）陽性及陰性檢測結果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行ABO、RhD血型檢測過程中應用的試劑、設備及實驗流程，并評估實驗結果的有效性。【主要試劑組成】1. 質控品：樣本1 A1型RhD（+）紅細胞 樣本2 B型RhD（+）紅細胞 樣本3 A血清 樣本4 B血清 樣本5 O型RhD（+）紅細胞 樣本6 RhD（-）紅細胞2. 血型鑒定試劑： 標準血清：抗A，抗B，抗D ABO血型反定型紅細胞：Ac，Bc，Oc ABO血型抗原檢測卡（微柱凝膠）【主要儀器】 卡式專用離心機【檢驗方法】 首先將質控品、標準血清及ABO血型反定型紅細胞從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗方法（平板法、試管法、微柱凝膠法）具體如下：1. 平板法：在玻片上（或紙片上）按表1加樣各1滴（50ul），混勻（直徑約20mm大?。?，前后緩慢搖晃玻片，2分鐘左右肉眼判讀結果，并記錄。2. 試管法：取13支（95mm12mm或75mm12mm）試管做好標記，按表1加樣各1滴（50ul），混勻，離心（離心速度和時間可以選擇轉速1000rpm時間1分鐘或轉速3400rpm時間15秒），判定結果，并記錄。表1 平板法、試管法ABO及RhD血型室內(nèi)質控加樣表抗A + 樣本1抗B + 樣本1抗D + 樣本14%Ac + 樣本34%Bc + 樣本34%Oc + 樣本3抗A + 樣本2抗B + 樣本2抗D + 樣本24%Ac + 樣本44%Bc + 樣本44%Oc + 樣本4抗A + 樣本5抗B + 樣本5抗D + 樣本5抗D + 樣本63. 柱凝膠法：取4張待檢ABO血型抗原檢測卡（微柱凝膠）做好標記。將樣本1分別加入第1張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本2分別加入第2張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本5分別加入第3張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本6加入第4張卡的第3孔內(nèi)。使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結果一致，方可定為參考值；更換不同批號質控品時，需新舊質控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質控品在控，新批號質控品質控品結果一致，可確定參考值；更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質控品，兩次結果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽性結果與預期結果比較出現(xiàn)超過1+凝集強度的差異，或陰性質控出現(xiàn)陽性結果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行。【記錄表格】輸血相容性檢測室內(nèi)質控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質控失控及失控處理記錄表SXK-JL67【注意事項】1. 室內(nèi)質控品、標準血清、標準紅細胞保存在28，嚴禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質控品不宜與新質控品混合，以防污染，不同批號質控品不得混用。3. 紅細胞質控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴重溶血，不得使用；若出現(xiàn)輕微溶血可用生理鹽水對其進行洗滌，重新懸浮后使用。4. 質控血清：出現(xiàn)渾濁或沉淀時，應進行適當離心，去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用?！緟⒖假Y料】1. 長春愽迅生物技術有限公司ABO、RhD血型檢測質控品（微柱凝膠法）說明書2. 長春愽迅生物技術有限公司ABO、RhD血型檢測卡（微柱凝膠法）說明書3. 上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司抗A抗B血型定型試劑（單克隆抗體）說明書4. 密理博（上海）貿(mào)易有限公司康D（IgM+IgG）血型定型試劑（單克隆抗體）說明書（二）不規(guī)則抗體篩檢室內(nèi)質控操作規(guī)程【檢驗原理】 選擇已知血清，標本其與在用試劑抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠）中的陽性及陰性結果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行不規(guī)則抗體篩檢過程中應用的試劑、設備及實驗流程，并評估實驗結果的有效性。【主要試劑組成】1. 質控品：樣本1 O型血清 樣本2 IgG型抗D（+）AB血清 2. 不規(guī)則抗體篩檢試劑： 抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡（微柱凝膠） 、抗體篩檢紅細胞【主要儀器】 卡式專用離心機【檢驗方法】 微柱凝膠法，具體操作步驟如下：1. 將質控品、抗體篩檢紅細胞從冰箱取出后平衡至室溫。2. 取1張抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡做好標記。3. 將、抗體篩檢細胞用低離子強度鹽溶液稀釋至0.8%，對應加入上述檢測卡16管中，50ul/管。4. 分別在前3管加入樣本1，后3管加入樣本2，50ul/管。5. 將檢測卡置37 孵育器中15分鐘。 6. 即刻使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結果一致，方可定為參考值；更換不同批號質控品時，需新舊質控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質控品在控，新批號質控品質控品結果一致，可確定參考值；更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質控品，兩次結果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽性結果與預期結果比較出現(xiàn)超過1+凝集強度的差異，或陰性質控出現(xiàn)陽性結果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測室內(nèi)質控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質控失控及失控處理記錄表SXK-JL67注意事項1. 室內(nèi)質控品、抗篩細胞、保存在28，嚴禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質控品不宜與新質控品混合，以防污染，不同批號質控品不得混用。3. 質控血清：出現(xiàn)渾濁或沉淀時，應進行適當離心，去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用。參考資料1. 長春愽迅生物技術有限公司不規(guī)則抗體篩檢質控品說明書2. 長春愽迅生物技術有限公司抗人球蛋白檢測卡不規(guī)則抗體篩檢操作說明書3. 長春愽徳生物技術有限責任公司不規(guī)則抗體檢測試劑（人紅細胞）使用說明書（三）交叉配血室內(nèi)質控操作規(guī)程【檢驗原理】 凝聚胺介質法：紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，其懸浮在電解質中形成Zeta電位，Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。而凝聚胺介質法則是首先利用低離子溶液降低介質的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞和血清（血漿）中的抗體結合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，為高價陽離子多聚物、肝素中和劑），以中和紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta電位降低，縮短紅細胞之間的距離，使紅細胞產(chǎn)生非特異性的凝聚，最后加入懸浮液（Resuspending），中和凝聚胺（Polybrene）陽離子作用，使正常的紅細胞非特異性凝聚散開，試驗結果為陰性，但如果紅細胞被相應的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結，試驗結果為陽性。 微柱凝膠法：選擇已知的血清和相應的細胞，標本其與在用試劑抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠）中的陽性及陰性結果，通過每天或每批與待檢標本相同的試劑和方法進行檢測，以監(jiān)控實驗室進行交叉配血過程中應用的試劑、設備及實驗流程，并評估實驗結果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質控品：樣本1 AB型RhD（+）紅細胞 樣本2 O型RhD（+）紅細胞 樣本3 RhD（-）紅細胞 樣本4 O血清 樣本5 IgG抗DAB血清 2. 交叉配血檢測試劑： 凝聚胺介質試劑：低離子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、懸浮液（Resuspending） 抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）【主要儀器】 卡式專用離心機【檢驗方法】首先將質控品、凝聚胺介質從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗方法（試管法、微柱凝膠法）進行。1. 凝聚胺介質法 為試管法，操作步驟如下：1.1 取4支（95mm12mm或75mm12mm）試管做好標記.1.2 按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3）分別加入各管，各1滴（50ul）。1.3 各管加入低離子溶液（LIM）0.65ml，混合均勻后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液2滴（100ul），并混合均勻。1.4 用離心機3400rpm時間10秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。1.5 輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝聚，如無凝聚，則必須重做。1.6 最后加入懸浮液（Resuspending）2滴（100ul），輕輕搖動試管混合并同時觀察結果。如凝聚散開，表示由Polybrene引起的非特異性凝集，抗體篩檢結果為陰性。如果凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結果的特異性反應，抗體篩檢結果為陽性，應進一步作抗體鑒定。2、微柱凝膠法 操作步驟如下：2.1 取1張待檢抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）做好標記。2.2 交叉配血實驗按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3）加樣，各50ul。2.3 將檢測卡置37 孵育器中15分鐘。2.4即刻使用卡式專用離心機離心，取出，肉眼判定結果，并記錄?！窘Y果解釋】 交叉配血室內(nèi)質控根據(jù)其檢測作用可分為IgG組和IgM組如表2。表2 交叉配血室內(nèi)質控IgG、IgM分組表組合質控品組合檢測結果檢測作用組合1樣本4 + 樣本1+檢測IgM類抗原抗體反應組合2樣本4 + 樣本2-檢測IgM類抗原抗體反應組合3樣本5 + 樣本1+檢測IgG類抗原抗體反應組合4樣本5 + 樣本3-檢測IgG類抗原抗體反應【建立參考值】首次使用質控品或不連續(xù)使用時，需要連續(xù)做三天試驗，結果一致，方可定為參考值；更換不同批號質控品時，需新舊質控品同時做，連續(xù)兩天，舊批號質控品在控，新批號質控品質控品結果一致，可確定參考值；更換試劑時，需新舊批號試劑同時做兩次質控品，兩次結果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學均要單獨定值。質控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽性結果與預期結果比較出現(xiàn)超過1+凝集強度的差異，或陰性質控出現(xiàn)陽性結果時，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測室內(nèi)質控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質控失控及失控處理記錄表SXK-JL67【注意事項】1. 室內(nèi)質控品保存在28，嚴禁在室溫長期存放。2. 用后