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1、維生素B1的測(cè)定,營(yíng)養(yǎng)0901 徐燕萍 張晶熒 趙莎莎 趙小娟,. 結(jié)構(gòu)與性質(zhì),嘧啶 亞甲基 噻唑 連成的季銨鹽化合物,維生素B1,又稱硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人體必需的13種維生素之一,是一種水溶性維生素,屬于維生素B族,為無(wú)色結(jié)晶體,溶于水,在酸性溶液中很穩(wěn)定,在堿性溶液中不穩(wěn)定,易被氧化和受熱破壞。,測(cè)定意義,由于人體不能自行合成維生素B1,必須從食物中攝取。因此,人體需依賴食物提供足夠的維生素B1,測(cè)定各種食品維生素B1含量多少將對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)十分重要。如果由于食物攝入量不足,或因食物的加工、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、烹飪不當(dāng),使維生素B1受到破壞或損失,都會(huì)造成維生素B1的缺

2、乏。因此,食品中的維生素B1測(cè)定對(duì)指導(dǎo)食品加工、保存、膳食營(yíng)養(yǎng)配比等都有一定的意義。,維生素B1是人體能量代謝,特別是糖代謝所必需的,故人體對(duì)它的需要量通常與攝取的熱量有關(guān)。當(dāng)人體的能量主要來(lái)源于糖類時(shí),維生素B1的需要量最大。 成人的建議每日攝取量是1015mg。妊娠、哺乳期每天攝取1516mg;在生病、生活緊張、接受手術(shù)時(shí),要增加必要用量。,來(lái)源簡(jiǎn)介 維生素B1廣泛存在于天然食物中,含量較豐富的有:動(dòng)物內(nèi)臟(肝、心及腎)、肉類、豆類、花生及精細(xì)加工的谷物類。谷物類是我國(guó)人民的主食,也是維生素B1的主要來(lái)源。但過(guò)分去除麩皮與糠,維生素B1損失很多,烹調(diào)加堿可使維生素B1損失增高。,維生素B1

3、的測(cè)定方法: 分光光度法; HPLC法; 熒光分光光度法等。,分光光度法,分光光度法是將維生素B1生成游離型后,與重氮化試劑對(duì)氨基苯乙酮反應(yīng),生成紫紅色色素,移至二甲苯中測(cè)定其濃度。 本法靈敏度差,只適用于食品中維生素B1含量高的試樣。,高效液相色譜法,把維生素B1衍生化后導(dǎo)入高效液相色譜儀,經(jīng)柱分離,通熒光檢測(cè)器測(cè)定。 本法適用于體系復(fù)雜的樣品,干擾嚴(yán)重時(shí)采用此法。,熒光法,這里我們主要介紹熒光法 參考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(維生素B1)的測(cè)定,方法原理,試樣在酸性溶液中加熱,提取維生素B1,經(jīng)蛋白分解酶處理,使維生素B1成為游離型。再經(jīng)層析柱純化,去除熒光淬滅物質(zhì)

4、,同時(shí)濃縮,用堿性鐵氰化鉀溶液將其氧化成硫色素,在紫外線下,硫色素發(fā)出熒光,再給定的條件下以及沒(méi)有其他物質(zhì)干擾時(shí),此熒光之強(qiáng)度與硫色素量成正比即與溶液中維生素B1量成正比。,操作步驟,1.樣品處理 樣品采集后用勻漿機(jī)打成勻漿于低溫冰箱中冷凍保存,用時(shí)將其解凍后使用。,2.樣品提取,3.凈化,a.脫脂棉鋪于鹽基交換管的交換柱底部,再加約1g活性人造浮石使之達(dá)到交換柱的1/3高度。 b.用移液管加入提取液2060ml。 c.加入約10ml熱蒸餾水沖洗交換柱,棄去洗液,重復(fù)三次。 d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度試管內(nèi)。涼至室溫,用250g/L酸性Kcl定容至25ml,即

5、為凈化液。,做空白試驗(yàn) 重復(fù)上述操作,將20ml維生素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液加入鹽基交換管以代替試樣提取液,即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。,4.氧化,將5ml試樣凈化液分別加入A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶; 同時(shí)將5ml標(biāo)準(zhǔn)凈化液分別加入A1、B1兩個(gè)反應(yīng)瓶中。,Maizel-Gerson 反應(yīng)瓶,氧化流程,反應(yīng)瓶要同時(shí)振搖,準(zhǔn)確計(jì)時(shí)90s.,5、測(cè)定,熒光測(cè)定條件: 激發(fā)波長(zhǎng)365nm;發(fā)射波長(zhǎng)435nm;激發(fā)波狹縫5nm;發(fā)射波狹縫5nm。 依次測(cè)定下列熒光強(qiáng)度: a. 樣品空白熒光強(qiáng)度(樣品反應(yīng)瓶A); b. 標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度(標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶A1); c. 樣品熒光強(qiáng)度(樣品反應(yīng)瓶B); d. 標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度(標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶B1

6、);,6.計(jì)算,式中:X樣品中硫胺素含量,mg/100g; U樣品熒光強(qiáng)度; Ub樣品空白熒光強(qiáng)度; S標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度; Sb標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度; c硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度,g/ml; V用于凈化的硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液體積,ml; V1樣品水解后定容之體積,ml; V2樣品用于凈化的提取液體積,ml; m樣品質(zhì)量,g;,試劑作用,1、蛋白分解酶:用于試樣的蛋白分解。 2、鹽酸:水解樣品。 3、氯化鉀:該熱溶液可從鹽基交換管中的浮石里解析出維生素B1。 4、鐵氰化鉀堿性溶液:氧化游離的維生素B1,生成硫色素。 5、正丁醇:溶解紫外熒光物質(zhì)硫色素試劑。,注意事項(xiàng),1 、加熱酸性Kcl時(shí)不能使其沸騰,熱Kcl濾速較快,而不沸則是使其不至因過(guò)飽和而在洗滌中結(jié)晶析出阻塞交換柱。 2、 紫外線會(huì)分解破壞維生素B1

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