菌種活化傳代

1、菌種活化與傳代一、菌種活化下列步驟請(qǐng)?jiān)跓o菌環(huán)境下操作：1、把凍干菌種管、滅菌1ml 滴管、雙碟、鑷子、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺(tái)。2、先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。（有些商品化的產(chǎn)品打開更方便）3、取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌滴管，在火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯少許（無菌水也可），加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即

2、吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營(yíng)養(yǎng)肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面進(jìn)行培養(yǎng)。 ( a ) 適用細(xì)菌 用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養(yǎng)基或無菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，并輕微震蕩（可用該吸管協(xié)助），直到均勻懸浮。 ( b ) 適用霉菌、酵母菌 用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi)，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。4、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，遲滯期 較長(zhǎng)，必須等培養(yǎng)二倍時(shí)間后才能長(zhǎng)出，且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗，

3、才視為不能活化。二、菌種傳代 1、培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無冷凝水者，不宜再使用。標(biāo)簽上寫上菌名及接種日期。至冰箱取出的菌種斜面，應(yīng)在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺(tái)。 2、點(diǎn)燃酒精燈，用左手握住菌種斜面，將管口靠進(jìn)火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手用無名指、小指及掌部夾住棉塞，撥開棉塞，將接種環(huán)伸人管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮去少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁。 3、堵上棉塞，左手將菌種管放下，取營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開棉

4、塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動(dòng)，使細(xì)菌劃在斜面的表面上。 4、取出接種棒，在火焰旁將培養(yǎng)基管棉塞堵上，然后將接種過細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。將已接種畢的細(xì)菌管培養(yǎng)2224小時(shí)，霉菌管一般置霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7日。取出后放人冰箱保存，一般23個(gè)月轉(zhuǎn)種一次。附一：菌種的培養(yǎng)與保存1、菌種活化: 用無菌水溶解凍干粉菌液（一的操作），用無菌微量吸管滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基某一邊緣附近，以劃線法接種。2、劃線法簡(jiǎn)介：（1） 手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約 5 公分）燒至火紅，并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約 10 公分，等待約 10 秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋 1/3 培養(yǎng)基為止（I 區(qū)）。（2） 灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自 I 區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域（II 區(qū)）。（3）. 重復(fù) 2. 的動(dòng)作完成 III 區(qū)與 IV 區(qū)。（4） 灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。附三培養(yǎng)溫度1 、大腸桿菌3537培養(yǎng)48小時(shí)金黃色葡萄球菌