藥物色譜分析大題

1、色譜大題（挑了一些，留著用）氣相3當(dāng)下列參數(shù)改變時(shí)：(1)柱長(zhǎng)縮短，(2)固定相改變，(3)流動(dòng)相流速增加，(4)相比減少是否會(huì)引起分配系數(shù)的改變?為什么?答：固定相改變會(huì)引起分配系數(shù)的改變,因?yàn)榉峙湎禂?shù)只于組分的性質(zhì)及固定相與流動(dòng)相的性質(zhì)有關(guān).所以：（1）柱長(zhǎng)縮短不會(huì)引起分配系數(shù)改變（2）固定相改變會(huì)引起分配系數(shù)改變（3）流動(dòng)相流速增加不會(huì)引起分配系數(shù)改變（4）相比減少不會(huì)引起分配系數(shù)改變4當(dāng)下列參數(shù)改變時(shí)： (1)柱長(zhǎng)增加，(2)固定相量增加，(3)流動(dòng)相流速減小，(4)相比增大是否會(huì)引起分配比的變化?為什么?答：k=K/?，而?VM/VS，分配比除了與組分、兩相的性質(zhì)、柱溫、柱壓有關(guān)外，

2、還與相比有關(guān)，而與流動(dòng)相流速、柱長(zhǎng)無關(guān)。故：?不變化，?增加，?不改變，?減小。?5試以塔板高度H做指標(biāo),討論氣相色譜操作條件的選擇.答：提示：主要從速率理論(van Deemer equation)來解釋，同時(shí)考慮流速的影響，選擇最佳載氣流速。（1）選擇流動(dòng)相最佳流速。（2）當(dāng)流速較小時(shí)，可以選擇相對(duì)分子質(zhì)量較大的載氣（如N2,Ar)，而當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)該選擇相對(duì)分子質(zhì)量較小的載氣（如H2,He),同時(shí)還應(yīng)該考慮載氣對(duì)不同檢測(cè)器的適應(yīng)性。（3）柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，以免引起固定液的揮發(fā)流失。在使最難分離組分能盡可能好的分離的前提下，盡可能采用較低的溫度，但以保留時(shí)間適宜，峰形不拖

3、尾為度。（4）固定液用量：擔(dān)體表面積越大，固定液用量可以越高，允許的進(jìn)樣量也越多，但為了改善液相傳質(zhì)，應(yīng)使固定液膜薄一些。（5）對(duì)擔(dān)體的要求：擔(dān)體表面積要大，表面和孔徑均勻。粒度要求均勻、細(xì)?。ǖ灰诉^小以免使傳質(zhì)阻力過大）（6）進(jìn)樣速度要快，進(jìn)樣量要少，一般液體試樣0.15uL,氣體試樣0.110mL.（7）氣化溫度：氣化溫度要高于柱溫30 -70 。6試述速率方程中A, B, C三項(xiàng)的物理意義. H-u曲線有何用途?曲線的形狀主要受那些因素的影響?答：A 稱為渦流擴(kuò)散項(xiàng) , B 為分子擴(kuò)散項(xiàng)， C 為傳質(zhì)阻力項(xiàng)。下面分別討論各項(xiàng)的意義： (1) 渦流擴(kuò)散項(xiàng) A 氣體碰到填充物顆粒時(shí)，不斷地

4、改變流動(dòng)方向，使試樣組分在氣相中形成類似“渦流”的流動(dòng)，因而引起色譜的擴(kuò)張。由于 A=2dp ，表明 A 與填充物的平均顆粒直徑 dp 的大小和填充的不均勻性 有關(guān)，而與載氣性質(zhì)、線速度和組分無關(guān)，因此使用適當(dāng)細(xì)粒度和顆粒均勻的擔(dān)體，并盡量填充均勻，是減少渦流擴(kuò)散，提高柱效的有效途徑。(2) 分子擴(kuò)散項(xiàng) B/u 由于試樣組分被載氣帶入色譜柱后，是以“塞子”的形式存在于柱的很小一段空間中，在“塞子”的前后 ( 縱向 ) 存在著濃差而形成濃度梯度，因此使運(yùn)動(dòng)著的分子產(chǎn)生縱向擴(kuò)散。而 B=2rDgr 是因載體填充在柱內(nèi)而引起氣體擴(kuò)散路徑彎曲的因數(shù) ( 彎曲因子 ) ， D g 為組分在氣相中的擴(kuò)散系

5、數(shù)。分子擴(kuò)散項(xiàng)與 D g 的大小成正比，而 D g 與組分及載氣的性質(zhì)有關(guān)：相對(duì)分子質(zhì)量大的組分，其 D g 小 , 反比于載氣密度的平方根或載氣相對(duì)分子質(zhì)量的平方根，所以采用相對(duì)分子質(zhì)量較大的載氣 ( 如氮?dú)?) ，可使 B 項(xiàng)降低， D g 隨柱溫增高而增加，但反比于柱壓。彎曲因子 r 為與填充物有關(guān)的因素。 (3) 傳質(zhì)項(xiàng)系數(shù) Cu C 包括氣相傳質(zhì)阻力系數(shù) C g 和液相傳質(zhì)阻力系數(shù) C 1 兩項(xiàng)。所謂氣相傳質(zhì)過程是指試樣組分從移動(dòng)到相表面的過程，在這一過程中試樣組分將在兩相間進(jìn)行質(zhì)量交換，即進(jìn)行濃度分配。這種過程若進(jìn)行緩慢，表示氣相傳質(zhì)阻力大，就引起色譜峰擴(kuò)張。對(duì)于填充柱：液相傳質(zhì)過

6、程是指試樣組分從固定相的氣液界面移動(dòng)到液相內(nèi)部，并發(fā)生質(zhì)量交換，達(dá)到分配平衡，然后以返回氣液界面 的傳質(zhì)過程。這個(gè)過程也需要一定時(shí)間，在此時(shí)間，組分的其它分子仍隨載氣不斷地向柱口運(yùn)動(dòng)，這也造成峰形的擴(kuò)張。對(duì)于填充柱，氣相傳質(zhì)項(xiàng)數(shù)值小，可以忽略 。由上述討論可見，范弟姆特方程式對(duì)于分離條件的選擇具有指導(dǎo)意義。它可以說明，填充均勻程度、擔(dān)體粒度、載氣種類、載氣流速、柱溫、固定相液膜厚度等對(duì)柱效、峰擴(kuò)張的影響。用在不同流速下的塔板高度 H 對(duì)流速 u 作圖，得 H-u 曲線圖。在曲線的最低點(diǎn)，塔板高度H最?。℉最?。?。此時(shí)柱效最高。該點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的流速即為最佳流速 u 最佳，即 H最小 可由速率方程微分

7、求得：則：所以：當(dāng)流速較小時(shí)，分子擴(kuò)散（B項(xiàng)）就成為色譜峰擴(kuò)張的主要因素，此時(shí)應(yīng)采用相對(duì)分子質(zhì)量較大的載氣（N2，Ar ），使組分在載氣中有較小的擴(kuò)散系數(shù)。而當(dāng)流速較大時(shí)，傳質(zhì)項(xiàng)（C 項(xiàng)）為控制因素，宜采用相對(duì)分子質(zhì)量較小的載氣（H2，He），此時(shí)組分在載氣中有較大的擴(kuò)散系數(shù)，可減小氣相傳質(zhì)阻力，提高柱效。7當(dāng)下述參數(shù)改變時(shí)：(1)增大分配比，(2) 流動(dòng)相速度增加，(3)減小相比，(4) 提高柱溫，是否會(huì)使色譜峰變窄?為什么?答：(1)保留時(shí)間延長(zhǎng),峰形變寬 (2)保留時(shí)間縮短,峰形變窄 (3)保留時(shí)間延長(zhǎng),峰形變寬 (4)保留時(shí)間縮短,峰形變窄8為什么可用分離度R作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)

8、?答：分離度同時(shí)體現(xiàn)了選擇性與柱效能，即熱力學(xué)因素和動(dòng)力學(xué)因素，將實(shí)現(xiàn)分離的可能性和現(xiàn)實(shí)性結(jié)合起來。9能否根據(jù)理論塔板數(shù)來判斷分離的可能性?為什么?答：不能，有效塔板數(shù)僅表示柱效能的高低，柱分離能力發(fā)揮程度的標(biāo)志，而分離的可能性取決于組分在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)的差異。10試述色譜分離基本方程式的含義,它對(duì)色譜分離有什么指導(dǎo)意義?答:色譜分離基本方程式如下:它表明分離度隨體系的熱力學(xué)性質(zhì)(?和?的變化而變化,同時(shí)與色譜柱條件(n改變)有關(guān)(1)當(dāng)體系的熱力學(xué)性質(zhì)一定時(shí)(即組分和兩相性質(zhì)確定),分離度與n的平方根成正比,對(duì)于選擇柱長(zhǎng)有一定的指導(dǎo)意義,增加柱長(zhǎng)可改進(jìn)分離度,但過分增加柱長(zhǎng)會(huì)顯著

9、增長(zhǎng)保留時(shí)間,引起色譜峰擴(kuò)張.同時(shí)選擇性能優(yōu)良的色譜柱并對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化也可以增加n,提高分離度.(2)方程式說明,k值增大也對(duì)分離有利,但k值太大會(huì)延長(zhǎng)分離時(shí)間,增加分析成本.(3)提高柱選擇性?可以提高分離度?分離效果越好?因此可以通過選擇合適的固定相?增大不同組分的分配系數(shù)差異?從而實(shí)現(xiàn)分離?13試述熱導(dǎo)池檢測(cè)器的工作原理。有哪些因素影響熱導(dǎo)池檢測(cè)器的靈敏度？解：熱導(dǎo)池作為檢測(cè)器是基于不同的物質(zhì)具有不同的導(dǎo)熱系數(shù)。 當(dāng)電流通過鎢絲時(shí)、鎢絲被加熱到一定溫度，鎢絲的電阻值也就增加到一定位(一般金屬絲的電阻值隨溫度升高而增加)。在未進(jìn)試樣時(shí)，通過熱導(dǎo)池兩個(gè)池孔(參比池和測(cè)量池)的都是載氣。由

10、于載氣的熱傳導(dǎo)作用，使鎢絲的溫度下降，電阻減小，此時(shí)熱導(dǎo)池的兩個(gè)池孔中鎢絲溫度下降和電阻減小的數(shù)值是相同的。在進(jìn)入試樣組分以后，裁氣流經(jīng)參比池，而裁氣帶著試樣組分流經(jīng)測(cè)量池，由于被測(cè)組分與載氣組成的混合氣體的導(dǎo)熱系數(shù)和裁氣的導(dǎo)熱系數(shù)不同，因而測(cè)量池中鎢絲的散熱情況就發(fā)生變化，使兩個(gè)池孔中的兩根鎢絲的電阻值之間有了差異。此差異可以利用電橋測(cè)量出來。 橋路工作電流、熱導(dǎo)池體溫度、載氣性質(zhì)和流速、熱敏元件阻值及熱導(dǎo)池死體積等均對(duì)檢測(cè)器靈敏度有影響。14試述氫焰電離檢測(cè)器的工作原理。如何考慮其操作條件？解：對(duì)于氫焰檢測(cè)器離子化的作用機(jī)理，至今還不十分清楚。目前認(rèn)為火焰中的電離不是熱電離而是化學(xué)電離，即

11、有機(jī)物在火焰中發(fā)生自由基反應(yīng)而被電離?；瘜W(xué)電離產(chǎn)生的正離子( CHO+、H3O+)和電子(e)在外加150300v直流電場(chǎng)作用下向兩極移動(dòng)而產(chǎn)生微電流。經(jīng)放大后，記錄下色譜峰。 氫火焰電離檢測(cè)器對(duì)大多數(shù)的有機(jī)化合物有很高的靈敏度，故對(duì)痕量有機(jī)物的分析很適宜。但對(duì)在氫火焰中不電離的元機(jī)化合物例如CO、CO2、SO2、N2、NH3等則不能檢測(cè)。15色譜定性的依據(jù)是什么?主要有那些定性方法?解：根據(jù)組分在色譜柱中保留值的不同進(jìn)行定性。主要的定性方法主要有以下幾種:(1)直接根據(jù)色譜保留值進(jìn)行定性(2)利用相對(duì)保留值r21進(jìn)行定性(3)混合進(jìn)樣(4)多柱法(5)保留指數(shù)法(6)聯(lián)用技術(shù)(7)利用選擇性

12、檢測(cè)器16何謂保留指數(shù)?應(yīng)用保留指數(shù)作定性指標(biāo)有什么優(yōu)點(diǎn)?答：用兩個(gè)緊靠近待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)物（一般選用兩個(gè)相鄰的正構(gòu)烷烴）標(biāo)定被測(cè)物質(zhì)，并使用均一標(biāo)度（即不用對(duì)數(shù)），用下式定義：X為保留值（tR, VR ,或相應(yīng)的記錄紙距離），下腳標(biāo)i為被測(cè)物質(zhì)，Z, Z+1為正構(gòu)烷烴的碳原子數(shù)，XZ Xi XZ+1，IZ = Z 100優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高,可根據(jù)固定相和柱溫直接與文獻(xiàn)值對(duì)照而不必使用標(biāo)準(zhǔn)試樣.17有哪些常用的色譜定量方法?試比較它們的優(yōu)缺點(diǎn)和使用范圍?（1）外標(biāo)法 外標(biāo)法是色譜定量分析中較簡(jiǎn)易的方法該法是將欲測(cè)組份的純物質(zhì)配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。使?jié)舛扰c待測(cè)組份相近。然后取固定量的上述溶液進(jìn)行色

13、譜分析得到標(biāo)準(zhǔn)樣品的對(duì)應(yīng)色譜團(tuán)，以峰高或峰面積對(duì)濃度作圖這些數(shù)據(jù)應(yīng)是個(gè)通過原點(diǎn)的直線分析樣品時(shí)，在上述完全相同的色譜條件下，取制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)同樣量的試樣分析、測(cè)得該試樣的響應(yīng)訊號(hào)后由標(biāo)誰(shuí)曲線即可查出其百分含量 此法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，因而適用于工廠控制分析和自動(dòng)分析；但結(jié)果的準(zhǔn)確度取決于進(jìn)樣量的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性（2）內(nèi)標(biāo)法 當(dāng)只需測(cè)定試樣中某幾個(gè)組份或試樣中所有組份不可能全部出峰時(shí)，可采用內(nèi)標(biāo)法具體做法是：準(zhǔn)確稱取樣品，加入一定量某種純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，然后進(jìn)行色譜分析根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物在色譜圖上相應(yīng)的峰面積(或峰高)和相對(duì)校正因子求出某組分的含量?jī)?nèi)標(biāo)法是通過測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物與欲測(cè)組份的峰面積的

14、相對(duì)值來進(jìn)行計(jì)算的，因而可以在定程度上消除操作條件等的變化所引起的誤差 內(nèi)標(biāo)法的要求是：內(nèi)標(biāo)物必須是待測(cè)試樣中不存在的；內(nèi)標(biāo)峰應(yīng)與試樣峰分開，并盡量接近欲分析的組份內(nèi)標(biāo)法的缺點(diǎn)是在試樣中增加了一個(gè)內(nèi)標(biāo)物，常常會(huì)對(duì)分離造成一定的困難。（3）歸一化法 歸一化法是把試樣中所有組份的含量之和按100計(jì)算，以它們相應(yīng)的色譜峰面積或峰高為定量參數(shù)通過下列公式計(jì)算各組份含量：由上述計(jì)算公式可見，使用這種方法的條件是：經(jīng)過色譜分離后、樣品中所有的組份都要能產(chǎn)生可測(cè)量的色譜峰 該法的主要優(yōu)點(diǎn)是：簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確；操作條件(如進(jìn)樣量，流速等)變化時(shí)，對(duì)分析結(jié)果影響較小這種方法常用于常量分析，尤其適合于進(jìn)樣量很少而其體積

15、不易準(zhǔn)確測(cè)量的液體樣品液相簡(jiǎn)述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點(diǎn)。相同點(diǎn)：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測(cè)不同點(diǎn)：分析對(duì)象及范圍流動(dòng)相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，占有機(jī)物的20%流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點(diǎn)、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機(jī)物的80%流動(dòng)相為液體或各種液體的混合。它除了起運(yùn)載作用外，還可通過溶劑來控制和改進(jìn)分離。室溫、高壓下進(jìn)行2何謂化學(xué)鍵合相？常用的化學(xué)鍵合相有哪幾種類型？分別用于哪些液相色譜法中？采用化學(xué)反

16、應(yīng)的方法將固定液鍵合在載體表面上，所形成的填料稱為化學(xué)鍵合相。優(yōu)點(diǎn)是使用過程不流失，化學(xué)性能穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性好，適于作梯度淋洗。目前常用的Si-O-Si-C型鍵合相，按極性分為非極性，中等極性與極性三類。非極性鍵合相：常見如ODS鍵合相，既有分配又有吸附作用，用途非常廣泛，用于分析非極性或弱極性化合物；中等圾性鍵合相：常見的有醚基鍵合相，這種鍵合相可作正相或反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定：極性鍵合相：常用氨基、氰基鍵合相，用作正相色譜的固定相，氨基鍵合相還是分離糖類最常用的固定相。3什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？各適用于分離哪些化合物？正相色譜法：流動(dòng)相極性小于固定相極性的色譜法。用于分

17、離溶于有機(jī)溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團(tuán)物質(zhì)的分離。反相色譜法：流動(dòng)相極性大于固定相極性的色譜法。用于分離非極性至中等極性的分子型化合物。4簡(jiǎn)述反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制。典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動(dòng)相組成的色譜體系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）鍵合相；流動(dòng)相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和極性大于固定相的流動(dòng)相組成。反相鍵合相表面具有非極性烷基官能團(tuán)，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，視覆蓋率而定。對(duì)于反相色譜的分離機(jī)制目前，保留機(jī)制還沒有一致的看法，大致有兩種觀點(diǎn)，一種認(rèn)為屬于

18、分配色譜，另一種認(rèn)為屬于吸附色譜。分配色譜的作用機(jī)制是假設(shè)混合溶劑（水十有機(jī)溶劑）中極性弱的有機(jī)溶劑吸附于非極性烷基配合基表面，組分分子在流動(dòng)相中與被非極性烷基配合基所吸附的液相中進(jìn)行分配。吸附色譜的作用機(jī)制可用疏溶劑理論來解釋。這種理論把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的分子毛，這種分子毛有強(qiáng)的疏水特性。當(dāng)用水與有機(jī)溶劑所組成的極性溶劑為流動(dòng)相來分離有機(jī)化合物時(shí)，一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑作用，將會(huì)從水中被擠出來，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用，其結(jié)果使組分分子在固定相得到保留。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動(dòng)相的作用

19、，使它離開固定相，減小保留值，此即解締過程，顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。一般說來，固定相上的烷基配合基或被分離分子中非極性部分的表面積越大，或者流動(dòng)相表面張力及介電常數(shù)越大，則締合作用越強(qiáng)，分配比k也越大，保留值越大。不難理解，在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。5離子色譜法、反相離子對(duì)色譜法與離子抑制色譜法的原理及應(yīng)用范圍有何區(qū)別？離子色譜法(Ion Chromatography) ：用離子交換樹脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。離子色譜法是溶液中陰離子分析的最

20、佳方法，也可用于陽(yáng)離子分析。反相離子對(duì)色譜法(IPC或PIC) ：反相色譜中，在極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑，使被測(cè)組分與其中的反離子形成中性離子對(duì)，增加k和tR，以改善分離。適用于較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿。反相離子抑制色譜：在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值，抑制組分解離，增加其k和tR，以達(dá)到改善分離的目的。適用于極弱酸堿物質(zhì)（pH=37弱酸；pH=78弱堿；兩性化合物）6親和色譜的分離機(jī)制是什么？有何特點(diǎn)？傳統(tǒng)的觀念認(rèn)為親和色譜是基于配基-配體親和反應(yīng)的原理，利用色譜的差速遷移理論，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的分離，僅僅是一種組分分離的選擇性過濾法。然而，這一理論是建立在配基-配體親和作用是均相反

21、應(yīng)和宏觀平衡態(tài)熱力學(xué)的基礎(chǔ)上的。但是，實(shí)際上目標(biāo)分子在兩相間分配系數(shù)過大，且在固定相上的吸附等溫線多不呈線性。所以，關(guān)于生物大分子在親和色譜中的保留機(jī)制及色譜過程數(shù)學(xué)模型的研究一直是一個(gè)相對(duì)薄弱的環(huán)節(jié)，有待進(jìn)一步的完善.親和色譜具有較高的專屬性，經(jīng)其分離，純化，濃集后的生物樣品具有較高的純度，大大降低了后續(xù)測(cè)定(如HPLC)時(shí)的背景噪音，進(jìn)而使得后續(xù)測(cè)定具有極高的靈敏度。7速率理論方程式在HPLC中與在GC中有何異同？如何指導(dǎo)HPLC實(shí)驗(yàn)條件的選擇？解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑

22、向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。在高效液相色譜中，對(duì)液液分配色譜，Van Deemter方程的完整表達(dá)形式為由此，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度流動(dòng)相，流速不宜過快；柱溫適當(dāng)。8試討論影響HPLC分離度的各種因素，如何提高分離度？(1) 色譜填充性能液相色譜柱分離性能的優(yōu)劣，是由固定相粒度、柱長(zhǎng)、由柱內(nèi)徑和填充狀況決定的柱壓降這三個(gè)參數(shù)度決定的。這三個(gè)參數(shù)度也決定了樣品組分的保留時(shí)間，保留時(shí)間不僅與色譜過程的熱力學(xué)因素k有關(guān)，還直接與決定柱效與分離度的柱性能參數(shù)及流動(dòng)相的黏度有關(guān)，這些參數(shù)都是影響色譜分

23、離過程動(dòng)力學(xué)的重要因素。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般都是購(gòu)買商品柱，很少自行制備。(2) 流動(dòng)相及流動(dòng)相的極性液相色譜中，改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接因素。液相色譜不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。因此大多是恒溫分析。流動(dòng)相選擇在液相色譜中顯得特別重要，流動(dòng)相可顯著改變組分分離狀況。(3) 流速流速大于0.5 cm/s時(shí)， Hu曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。9試討論反相HPLC的分離條件的選擇。反相HPLC法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強(qiáng)的溶劑為流動(dòng)

24、相的種液相色譜分離模式。反相HPLC色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長(zhǎng)增長(zhǎng)或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，當(dāng)其他條件相同時(shí)，溶質(zhì)在低表面積色譜柱上的保留值短。樣品的保留值也可以通過改變流動(dòng)相組成或溶劑強(qiáng)度來調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于有機(jī)溶劑的性質(zhì)和其在流動(dòng)相中的濃度。10在正、反相HPLC中流動(dòng)相的強(qiáng)度是否相同？在正相色譜中，由于固定相是極性的，所以溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力也越強(qiáng)，即極性強(qiáng)的溶劑是強(qiáng)溶劑。在反相色譜中，由于固定相是非極性的，所以溶劑的強(qiáng)度隨溶劑的極性降低而增加，即極性弱的溶劑是強(qiáng)溶劑。11什么叫梯度洗脫？它與GC的程

25、序升溫有何異同？在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成或濃度配比，稱為梯度洗提。是改進(jìn)液相色譜分離的重要手段。梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類似，但是前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的極性、pH或離子強(qiáng)度，而后者改變的溫度。程序升溫也是改進(jìn)氣相色譜分離的重要手段。12蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的原理及特點(diǎn)是什么？蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型檢測(cè)器，可以檢測(cè)沒有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)，如人參皂苷、黃芪甲苷等。一、ELSD原理恒定流速的色譜儀（高效液相、逆流色譜、高效毛細(xì)管電泳等）洗脫液進(jìn)入檢測(cè)器后，首先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進(jìn)

26、入蒸發(fā)室(漂移管，drift tube)，流動(dòng)相及低沸點(diǎn)的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入散射池，光束穿過散射池時(shí)被散射，散射光被光電管接收形成電信號(hào)，電信號(hào)通過放大電路、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路、計(jì)算機(jī)成為色譜工作站的數(shù)字信號(hào)色譜圖。二、特點(diǎn)1洗脫液需要霧化，所以霧化氣流的純度和壓力會(huì)影響檢測(cè)器的信噪比。2流動(dòng)相要蒸發(fā)掉，所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值?？梢酝ㄟ^蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來使比被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測(cè)物質(zhì)蒸發(fā)的前提下，溫度越高，流動(dòng)相蒸發(fā)越完全，色譜圖基線越好、信噪比越高。如果被測(cè)物質(zhì)沸點(diǎn)接近或低于流動(dòng)相的蒸發(fā)溫度，則無法檢測(cè)；不過，100%的水做流動(dòng)相，蒸發(fā)室溫度

27、也才設(shè)為150攝氏度，沸點(diǎn)比水低的有機(jī)物質(zhì)完全可以用氣相色譜儀進(jìn)行分離檢測(cè)了。由于流動(dòng)相和溶劑蒸發(fā)了，使用ELSD檢測(cè)器收集的色譜圖一般沒有溶劑峰；而且梯度洗脫沒有折光視差效應(yīng)，一般不會(huì)出現(xiàn)基線漂移。3.檢測(cè)光散射變化，所有進(jìn)入到散射池的物質(zhì)都可被檢測(cè)，而且響應(yīng)值只與物質(zhì)的量有關(guān)。4.濃度跟峰面積不成線性，分別取自然對(duì)數(shù)后成線性。13常用的HPLC定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正峰面積？哪些方法可以不用校正因子？常用的HPLC定量分析方法有：外標(biāo)法：外標(biāo)工作曲線法、外標(biāo)一點(diǎn)法、外標(biāo)二點(diǎn)法等內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法、內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法、內(nèi)標(biāo)對(duì)比法等使用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法時(shí)，可以

28、不必測(cè)定校正因子，其它方法須要用校正因子校正峰面積14指出苯、萘、蒽在反相色譜中的洗脫順序并說明原因。三者極性順序從大到小是苯、萘、蒽，因此在反相色譜中的洗脫順序?yàn)楸健⑤?、蒽，苯最先出峰?5宜用何種HPLC方法分離下列物質(zhì)？（1）乙醇和丁醇；（2）Ba2+和Sr2+；（3）正戊酸和正丁酸；（4）高摩爾質(zhì)量的葡糖苷。（1）正相鍵合相色譜法（2）離子交換色譜法（3）離子對(duì)色譜法（4）空間排阻色譜法補(bǔ)充1、色譜塔板理論的假設(shè)？答、(1) 在每一個(gè)平衡過程間隔內(nèi),平衡可以迅速達(dá)到；(2) 將載氣看作成脈動(dòng)（間歇）過程；(3) 試樣沿色譜柱方向的擴(kuò)散可忽略；(4) 每次分配的分配系數(shù)相同。(5)所有的

29、物質(zhì)在開始時(shí)全部進(jìn)入零號(hào)塔板2、色譜定性的方法都有哪些？答、(1) 用保留時(shí)間定性(2) 用相對(duì)值保留定性(3) 用保留指數(shù)定性(4)用化學(xué)反應(yīng)配合色譜定性 (5)用不同類型的檢測(cè)器定性色譜和各種光譜或波譜聯(lián)用3、內(nèi)標(biāo)法定量分析時(shí)，內(nèi)標(biāo)物選擇應(yīng)滿足那些條件？答：試樣中不含有該物質(zhì)與被測(cè)組分性質(zhì)比較接近不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)出峰位置應(yīng)位于被測(cè)組分接近，且無組分峰影響4、色譜分析中，固定相的選擇原則是什么？固定相的選擇：氣液色譜，應(yīng)根據(jù)“相似相溶”的原則5、色譜定量分析中為什么要用校正因子？在什么情況下可以不用?答：各種化合物在不同的檢測(cè)器上都有不同的應(yīng)答值，所以盡管往色譜儀中注入相同質(zhì)量的物質(zhì)，但

30、得到峰面積卻不一樣，因此峰面積定量時(shí)就必須把由色譜儀上得到的峰面積乘上一個(gè)系數(shù)，得到此成分的質(zhì)量，在實(shí)際分析中，常用某物質(zhì)做標(biāo)準(zhǔn)，得到一個(gè)相對(duì)的校正系數(shù)，就叫相對(duì)校正因子試樣中不是所有組分6、總結(jié)色譜法的優(yōu)點(diǎn)。答：色譜法特點(diǎn)（1）分離效率高（2） 靈敏度高（3） 分析速度快（4） 應(yīng)用范圍廣樣品用量少分離和測(cè)定一次完成易于自動(dòng)化，可在工業(yè)流程中使用1. 氣相色譜的基本設(shè)備包括那幾部分,各有什么作用?載氣系統(tǒng)去除載氣中的水、有機(jī)物等雜質(zhì)進(jìn)樣裝置：色譜柱：色譜儀的核心部件檢測(cè)系統(tǒng)2試以塔極高度H做指標(biāo)討論氣相色譜操作條件的選擇。3. 試述速率方程式中A、B、C三項(xiàng)的物理意義。答：A、渦流擴(kuò)散項(xiàng)B、

31、縱向擴(kuò)散項(xiàng)C、傳質(zhì)阻力項(xiàng)4. 為什么可用分辨率R作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)。5. 能否根據(jù)理論塔板數(shù)來判斷分離的可能性？為什么？6. 對(duì)載體和固定液的要求分別是什么?答：載體要求:具有化學(xué)惰性好的熱穩(wěn)定性有一定的機(jī)械強(qiáng)度有適當(dāng)?shù)谋缺砻?，表面無深溝，以便是固定液成為均勻的薄膜，要有較大的空隙率，以便減小柱壓降。對(duì)固定液的要求：應(yīng)對(duì)被分離試樣中的各組分具有不同的溶解能力，較好的熱穩(wěn)定性，并且不與被分離組分發(fā)生不可逆的化學(xué)反應(yīng)。7. 試比較紅色擔(dān)體和白色擔(dān)體的性能,它們各使用在哪些方面?答；紅色擔(dān)體適宜分析非極性化合物；白色單體適宜分析極性化合物；8. 固定液可分為哪幾類？為什么這樣劃分？如何選擇固

32、定液。答：固定液按分子作用力分為不易極化非極性固定液易極化非極性固定液難成氫鍵的極性固定液受質(zhì)子的極性固定液按極性分類用典型化合物在固定液上的保留性能來表征固定液的選擇原則：“相似相容”原則，固定液和被分離物分子之間的特殊作用力，利用混合物固定液利用協(xié)同效應(yīng)選擇固定液9. 色譜定性的依據(jù)是什么，主要有哪些定性方法。答;依據(jù)：保留時(shí)間定性方法：用保留時(shí)間定性用相對(duì)保留值定性用保留指數(shù)定性用化學(xué)反應(yīng)配合色譜定性用不同類型的檢測(cè)器定性色譜和各種光譜或波譜聯(lián)用 10假設(shè)一個(gè)未知油劑樣品，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一種氣象色譜分析方法，并概述分析過程。液相色譜：11、正相HPLC與反相HPLC的主要不同之處什么？各適合分離

33、什么物質(zhì)？答：正相HPLC是指以親水性的填料做固定相，以疏水性溶劑或混合物做流動(dòng)相的液相色譜，主要用于分離 醇類，類脂代化合物、磷脂類化合物，脂肪酸以及其他化合物。反相HPLC是指以強(qiáng)疏水性的填料作固定相，以可以和水混合的有機(jī)溶劑做流動(dòng)相的液相色譜，主要用于分離生物大分子、鹵化物和肽及蛋白質(zhì)，含盧芳烴，小分子的核酸、核苷酸、多環(huán)芳烴等；12、何為梯度洗脫？什么情況下采用梯度洗脫？答：梯度洗脫就是有兩種（或兩種以上）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程度連續(xù)的改變，以改變流動(dòng)相的配比和極性。適合:具有較寬K范圍的樣品，及所有的組分的色譜峰的K值不能在0.5-20之間大分子樣品，相對(duì)分子質(zhì)量大于1

34、000的，尤其是生物樣品樣品中含有高保留時(shí)間的干擾成分，在一次分析中如不把他洗脫出去，就會(huì)污染色譜柱，并影響下一次分析。即使在使用等度時(shí)也可以使用梯度洗脫選擇流動(dòng)相的比例。3、液相色譜中最常用的檢測(cè)器是什么檢測(cè)器，它適合那些物質(zhì)的檢測(cè)？答：最常用的是紫外可見分光光度檢測(cè)器，適合在可見或紫外光區(qū)有吸收物質(zhì)的檢測(cè)；4、某組分在ODS柱上,以80甲醇作流動(dòng)相時(shí)的保留時(shí)間為10min,如果用60甲醇作流動(dòng)相，組分的保留時(shí)間是增加，還是減??？如果將80甲醇換成80異丙醇后，又會(huì)怎樣變化呢？并請(qǐng)作出解釋。5、高效液相色譜法的特點(diǎn) 答:特點(diǎn)在于高分離性能、高靈敏度、高分析速度、可以自動(dòng)化運(yùn)行2.色譜法分類(

35、1)氣相色譜：流動(dòng)相為氣體（稱為載氣）。 按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細(xì)管柱色譜； 按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜(2)液相色譜：流動(dòng)相為液體（也稱為淋洗液）。 按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。 離子色譜：液相色譜的一種，以特制的離子交換樹脂為固定相，不同pH值的水溶液為流動(dòng)相。(3)其他色譜方法薄層色譜和紙色譜：比較簡(jiǎn)單的色譜方法凝膠色譜法：測(cè)聚合物分子量分布。超臨界色譜: CO2流動(dòng)相。3.色譜法的特點(diǎn)（1）分離效率高復(fù)雜混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體。手性異構(gòu)體。（2） 靈敏度高 可以檢測(cè)出g.g-1(10-6)級(jí)甚至ng.g-1(10-9)級(jí)的物質(zhì)量。（3） 分析速

36、度快一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。（4） 應(yīng)用范圍廣 氣相色譜：沸點(diǎn)低于400的各種有機(jī)或無機(jī)試樣的分析。液相色譜：高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定、生物試樣的分離分析。不足之處：被分離組分的定性較為困難。二、色譜分離過程色譜分離過程是在色譜柱內(nèi)完成的。填充柱色譜:氣固(液固)色譜和氣液(液液)色譜，兩者的分離機(jī)理不同。氣固(液固)色譜的固定相: 多孔性的固體吸附劑顆粒。 固體吸附劑對(duì)試樣中各組分的吸附能力的不同。氣液(液液)色譜的固定相: 由 擔(dān)體和固定液所組成。固定液對(duì)試樣中各組分的溶解能力的不同。氣固色譜的分離機(jī)理:吸附與脫附的不斷重復(fù)過程；氣液色譜的分離機(jī)理：氣液(液液)兩相間的反復(fù)

37、多次分氣相色譜儀主要部件1. 載氣系統(tǒng)：包括氣源、凈化干燥管和載氣流速控制；常用的載氣有：氫氣、氮?dú)?、氦氣；凈化干燥管：去除載氣中的水、有機(jī)物等雜質(zhì)（依次通過分子篩、活性炭等）；載氣流速控制：壓力表、流量計(jì)、針形穩(wěn)壓閥，控制載氣流速恒定。2. 進(jìn)樣裝置：進(jìn)樣裝置：進(jìn)樣器+氣化室；氣體進(jìn)樣器（六通閥）：推拉式和旋轉(zhuǎn)式兩種。 試樣首先充滿定量管，切入后，載氣攜帶定量管中的試樣氣體進(jìn)入分離柱；氣化室：將液體試樣瞬間氣化的裝置。無催化作用。3. 色譜柱（分離柱）：色譜柱：色譜儀的核心部件。柱材質(zhì)：不銹鋼管或玻璃管，內(nèi)徑3-6毫米。長(zhǎng)度可根據(jù)需要確定。柱填料：粒度為60-80或80-100目的色譜固定相

38、。液-固色譜：固體吸附劑液-液色譜：擔(dān)體+固定液。柱制備對(duì)柱效有較大影響，填料裝填太緊，柱前壓力大，流速慢或?qū)?柱堵死，反之空隙體積大，柱效低。4. 檢測(cè)系統(tǒng)：色譜儀的眼睛， 通常由檢測(cè)元件、放大器、顯示記錄三部分組成；被色譜柱分離后的組分依次進(jìn)入檢測(cè)器，按其濃度或質(zhì)量隨時(shí)間的變化，轉(zhuǎn)化成相應(yīng)電信號(hào)，經(jīng)放大后記錄和顯示，給出色譜圖；檢測(cè)器：通用型對(duì)所有物質(zhì)均有響應(yīng)；專屬型對(duì)特定物質(zhì)有高靈敏響應(yīng)；常用的檢測(cè)器：熱導(dǎo)檢測(cè)器、氫火焰離子化檢測(cè)器；5. 溫度控制系統(tǒng)：溫度是色譜分離條件的重要選擇參數(shù)；氣化室、分離室、檢測(cè)器三部分在色譜儀操作時(shí)均需控制溫度；氣化室：保證液體試樣瞬間氣化；檢測(cè)器：保證被分

39、離后的組分通過時(shí)不在此冷凝；分離室：準(zhǔn)確控制分離需要的溫度。當(dāng)試樣復(fù)雜時(shí)，分離室溫度需要按一定程序控制溫度變化，各組分在最佳溫度下分離；氣固色譜固定相：1. 種類(1)活性炭 (2)活性氧化鋁 (3)硅膠(4)分子篩(5)高分子多孔微球（GDX系列）氣固色譜固定相的特點(diǎn)（1）性能與制備和活化條件有很大關(guān)系；（2）同一種固定相，不同廠家或不同活化條件，分離效果差異較大；（3）種類有限，能分離的對(duì)象不多；（4）使用方便。氣液色譜固定相 固定液+擔(dān)體（支持體） ：小顆粒表面涂漬上一薄層固定液。固定液特點(diǎn)：固定液在常溫下不一定為液體，但在使用溫度下一定呈液體狀態(tài)。1. 作為擔(dān)體使用的物質(zhì)應(yīng)滿足的條件：

40、比表面積大，孔徑分布均勻；化學(xué)惰性，表面無吸附性或吸附性很弱，與被分離組份不起反應(yīng)；具有較高的熱穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，不易破碎；顆粒大小均勻、適度。一般常用6080目、80100目。1.檢測(cè)器類型濃度型檢測(cè)器：測(cè)量的是載氣中通過檢測(cè)器組分濃度瞬間的變化，檢測(cè) 信號(hào)值與組分的濃度成正比。熱導(dǎo)檢測(cè)器；質(zhì)量型檢測(cè)器：測(cè)量的是載氣中某組分進(jìn)入檢測(cè)器的速度變化，即檢測(cè)信號(hào)值與單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器組分的質(zhì)量成正比。FID；通用型檢測(cè)器：對(duì)所有物質(zhì)有響應(yīng)，熱導(dǎo)檢測(cè)器；專屬型檢測(cè)器：對(duì)特定物質(zhì)有高靈敏響應(yīng)，電子俘獲檢測(cè)器；氫火焰離子化檢測(cè)器，特點(diǎn)簡(jiǎn)稱氫焰檢測(cè)器 (1) 典型的質(zhì)量型檢測(cè)器;(2) 對(duì)有機(jī)化合物具有

41、很高的靈敏度;(3) 無機(jī)氣體、水、四氯化碳等含氫少或不含氫的物質(zhì)靈敏度低或不響應(yīng);(4) 氫焰檢測(cè)器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、靈敏度高、響應(yīng)迅速等特點(diǎn);(5) 比熱導(dǎo)檢測(cè)器的靈敏度高出近3個(gè)數(shù)量級(jí)，檢測(cè)下限可達(dá)10-12g?g-1。影響氫焰檢測(cè)器靈敏度的因素各種氣體流速和配比的選擇 N2流速的選擇主要考慮分離效能， N2 ? H2 = 1 ? 11 ? 1.5氫氣 ? 空氣=1 ? 10。極化電壓 正常極化電壓選擇在100300V范圍內(nèi)。載氣種類的選擇載氣種類的選擇應(yīng)考慮三個(gè)方面：載氣對(duì)柱效的影響、檢測(cè)器要求及載氣性質(zhì)。1、液相色譜有幾種類型 ? 它們的保留機(jī)理是什么 ? 在這些類型的應(yīng)用中

42、, 最適宜分離的物質(zhì)是什么 ?解 : 液相色譜有以下幾種類型 : 液 - 液分配色譜 ; 液 - 固吸附色譜 ; 化學(xué)鍵合色譜 ; 離子交換色譜 ; 離子對(duì)色譜 ; 空間排阻色譜等 . 液 - 固吸附色譜 是通過組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實(shí)現(xiàn)分離的 . 最適宜分離的物質(zhì)為中等相對(duì)分子質(zhì)量的油溶性試樣，凡是能夠用薄層色譜分離的物質(zhì)均可用此法分離。 其中 ; 液 - 液分配色譜 的保留機(jī)理是通過組分在固定相和流動(dòng)相間的多次分配進(jìn)行分離的?？梢苑蛛x各種無機(jī)、有機(jī)化合物 。5、什么叫離子色譜? 解：在低交換容量的分離柱上，分離樣品離子，而在高交換容量的抑制柱上，通過化學(xué)反應(yīng)，把具有高電導(dǎo)的流動(dòng)相

43、轉(zhuǎn)變?yōu)榈碗妼?dǎo)的流動(dòng)相，這樣就可以在電導(dǎo)檢測(cè)器上對(duì)被分離樣品離子進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)。這種采用分離柱、抑制柱和電導(dǎo)檢測(cè)器相結(jié)合的離子交換色譜稱為離子色譜。一名詞解釋1capacity fact：容量因子，也稱分配容量或容量比，用k表示。其定義為：一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中分配量（質(zhì)量或摩爾數(shù)）之比.2分配系數(shù)：K,一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相中濃度的比值;3extra-column effect：柱外效應(yīng)，即除柱內(nèi)多種因素產(chǎn)生的色譜峰擴(kuò)張外，其它產(chǎn)生峰擴(kuò)張的因素之和：進(jìn)樣系統(tǒng)，系統(tǒng)連接管，檢測(cè)器及其它柱外因素引起的峰擴(kuò)張。4gradient elut

44、ion：梯度洗脫，在HPLC分析中，控制流動(dòng)相組成或洗脫強(qiáng)度隨時(shí)間的改變而改變，以使極性差異較大的多個(gè)組分均能分離,同時(shí)譜峰間隔較均勻，分析時(shí)間盡量短。5HPSEC：高效體積排阻色譜法,即以多孔性填料為固定相，依據(jù)樣品組分分子體積大小的差別進(jìn)行分離的液相色譜方法。常用于肽和蛋白質(zhì)的分子量分布測(cè)定及多步分離純化程序中。其填料一般有硅膠基質(zhì)和合成高聚物基質(zhì)以及高交聯(lián)多糖型凝膠三種。6ODS：十八烷基鍵合硅膠，又稱C18. 典型的反相色譜柱，表面鍵和的基團(tuán)為非極性羥基，適于分離弱極性，中等極性，較強(qiáng)極性及可電離的酸堿性有機(jī)物。7基線：在正常操作條件下，僅有流動(dòng)相通過檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所產(chǎn)生的連續(xù)的響應(yīng)信號(hào)

45、，一般是一條直線;8峰面積：色譜曲線與基線間所包圍的面積;9半峰寬：亦稱半寬度,半峰寬度,指色譜峰高一半處的寬度10標(biāo)準(zhǔn)偏差：正態(tài)分布曲線x=1時(shí)（拐點(diǎn)）的峰寬之半。正常峰寬的拐點(diǎn)在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，大，峰形胖、柱效低。11死時(shí)間t0:流動(dòng)相流過色譜柱所需時(shí)間(不保留組分流過色譜柱所需時(shí)間)12調(diào)整保留時(shí)間:tR=tR-t0，指扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間。13保留時(shí)間tR進(jìn)樣開始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。14相對(duì)保留值:(用或表示,也稱分離因子)兩個(gè)組分調(diào)整保留值之比=tR2/tR1=VR2/

46、 VR2;15分離度: 相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值，也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。16色譜柱效：每米柱長(zhǎng)具有的理論塔板數(shù)定義為色譜柱效，它是衡量色譜柱分離效能高低的一種量度。1.在進(jìn)行HPLC分析時(shí)，為防止分析柱污染，應(yīng)采取哪些措施？1）加一個(gè)保護(hù)柱（預(yù)柱），其固定相性質(zhì)應(yīng)與分離柱一樣或相近。2）樣品要盡量?jī)艋?，如沉淀蛋白，去除色素和無機(jī)鹽等。3). 樣品分析結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)用適當(dāng)溶劑清洗色譜柱.2.乙醇的沸點(diǎn)為78.3，丁酮的沸點(diǎn)為79.6，在氣相色譜柱上是否一定是乙醇先出峰，丁酮后出峰，為什么？不一定.因?yàn)楸Ａ糁党c樣品組分的沸點(diǎn)有關(guān)外，還與樣品及固定相的極性有關(guān)。乙醇（b

47、p 78）和丁酮（bp 80）二個(gè)組分在非極性柱上，因?yàn)榻M分出峰的順序由蒸汽壓決定，沸點(diǎn)高的保留時(shí)間長(zhǎng)，所以乙醇先出峰，丁酮后出峰；在極性柱上，沸點(diǎn)和分子之間作用力同時(shí)作用，在強(qiáng)極性柱上分子間的作用力其主要作用，按極性大小出峰，乙醇的極性比丁酮大，所以丁酮先出峰，乙醇后出峰。4.電噴霧離子化的原理是什么?離子化過程分哪三步？原理：在噴針針頭與施加電壓的電極之間形成強(qiáng)電場(chǎng)，該電場(chǎng)使液滴帶電，帶電的溶液在電場(chǎng)的作用下向帶相反電荷的電極運(yùn)動(dòng)，并形成帶電的液滴。由于小液滴的分散比表面積增大，在電場(chǎng)中迅速蒸發(fā)，結(jié)果是帶點(diǎn)液滴表面單位面積的場(chǎng)強(qiáng)極高，從而產(chǎn)生液滴的“爆裂”。重復(fù)此過程，最終產(chǎn)生分子離子。E

48、SI離子化可分為一下三個(gè)步驟：1）形成帶電液滴：在ESI高壓電極處施以正的高電壓，小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的正電荷，從而產(chǎn)生電化學(xué)反應(yīng)，通過溶劑組分氧化而去掉負(fù)離子或通過毛細(xì)管自身的氧化而增加正離子，當(dāng)在ESI高電壓極處施以負(fù)的高壓，小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的負(fù)電荷；2）溶劑蒸發(fā)和小液滴破裂：隨著溶劑蒸發(fā)，液滴半徑縮小，液滴表面電荷斥力增大，達(dá)到一定半徑時(shí)，克服表面張力而裂解，重復(fù)此過程形成非常小的液滴；3）形成氣相離子：對(duì)于半徑=10nm液滴，電荷的斥力作用導(dǎo)致離子從液滴表面蒸發(fā)而不是液滴的分裂9、HPLC與GC比較，其特點(diǎn)？分析對(duì)象及范圍：GC分析只限于氣體和低沸點(diǎn)的穩(wěn)定化

49、合物，而這些物質(zhì)只占有機(jī)物總數(shù)的20%；HPLC可以分析較高沸點(diǎn)、較高分子量的、穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，這類物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的80%。流動(dòng)相的作用：GC采用的流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，與組分之間基本沒有作用；HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供選擇的條件自由度較大。它除了起運(yùn)載作用外，還可與組分作用，并與固定相對(duì)組分的作用產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，即流動(dòng)相對(duì)分離的貢獻(xiàn)很大，可通過流動(dòng)相組成來控制和改進(jìn)分離。操作溫度：GC需高溫；HPLC常常在室溫下進(jìn)行。10、UVD紫外,FLD熒光,RID示差折光,ELSD蒸發(fā)光散射-這些檢測(cè)器哪些是通用型的檢測(cè)器？哪些是選擇性檢測(cè)器？哪些可與梯度洗脫兼容？哪些不兼容？UVD紫外: 由于不是所有化合物都有UV吸收，因此不是通用檢測(cè)器;與梯度洗脫兼容FLD熒光: 許多有機(jī)化合物，特別是芳香族化合物、被一定強(qiáng)度和波長(zhǎng)的紫外光照射激發(fā)后，發(fā)射出較激發(fā)光波長(zhǎng)要長(zhǎng)的熒光。ELSD蒸發(fā)光散射：適合于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的且揮發(fā)性較小的樣品組分的檢測(cè)。 RID示差折光：是一種通