同型半胱氨酸測定檢測操作程序

1、.概述血清同型半胱氨酸(Hcy)是人體內(nèi)含硫氨基酸的一個重要的代謝中間產(chǎn)物，可能是動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)病的一個獨(dú)立危險因子。Hcy水平升高被認(rèn)為是動脈粥樣硬化性疾病獨(dú)立的漸進(jìn)性致病因素，血漿中同型半胱氨酸含量與遺傳因素、營養(yǎng)因素、雌激素水平、年齡因素等有關(guān)，同型半胱氨酸又稱為高半胱氨酸，Hcy的正常參考值隨測定方法和種族人群的不同而有所不同，一般正常空腹血漿總Hcy水平為5-15mol/L。研究表明：Hcy每升高5umol/L腦卒中風(fēng)險升高59%，缺血性心臟病風(fēng)險升高32%；Hcy每降低5umol/L腦卒中風(fēng)險降低24%，缺血性心臟病風(fēng)險降低16%.Hcy水平與心血管事件風(fēng)險呈正相關(guān)。1

2、 目的規(guī)范血清同型半胱氨酸檢測測試，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性。2 檢測方法和原理2.1檢測方法：速率法2.2檢測原理：本產(chǎn)品基于一種新型酶法，樣本中的氧化型Hcy被轉(zhuǎn)化為游離型Hcy后，進(jìn)行一系列循環(huán)反應(yīng)，這種基于共價 底物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的酶循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)大大提高了檢測的靈敏度，主要是利用S-腺苷同型半胱氣酸(SAH)水解酶反應(yīng)原理， 在該反應(yīng)中SAH被水解酶水解成腺苷和Hcy,腺苷立即水 解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，NADH 轉(zhuǎn)化為NAD,樣本中Hcy濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。3 標(biāo)本采集與保護(hù)新鮮無溶血血清或EDTA、肝素抗凝血漿遵守以下推薦的血清標(biāo)本處理，運(yùn)行和儲存步驟3.

3、1用真空采樣管采集血液標(biāo)本時須遵守常規(guī)注意事項(xiàng)3.2離心前使標(biāo)本完全自然形成凝塊3.3全程保證樣品管的密閉狀態(tài)3.4盡快分離血清，并及時測定3.5如果標(biāo)本不能在24小時內(nèi)檢測或運(yùn)送標(biāo)本時，將標(biāo)本保存在4或更低溫度的環(huán)境中：3.6冷藏標(biāo)本室溫放置20分鐘后再測定；3.7冷凍標(biāo)本室溫解溶后放置20分鐘后再測定3.8不符合標(biāo)本處理3.8.1溶血和乳糜血標(biāo)本在報告單的備注欄注明3.8.2標(biāo)本量過少的標(biāo)本，嚴(yán)重溶血和乳糜血標(biāo)本與臨床溝通并將標(biāo)本退回，填寫不合格標(biāo)本拒接登記。4 試劑和設(shè)備4.1試劑采用深圳奧薩制藥有限公司試劑4.1.1試劑組成試劑1 S-腺苷甲硫氨酸（SAM) 0. 1 mM煙酸胺腺嘌呤

4、二核苷酸（NADH) 0. 3 mM三（2-羧乙基）膦氯化氫（TCEP) 0. 5 mM酮戊二酸（Oxoglutarate) 5. 0 mMHcy甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTase) 5.0 KU/L試劑2 谷氨酸脫氫酶（GLDH） 10.0 KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶（SAHase） 3.0 KU/L腺苷脫氨酶（ADA） 5.0 KU/L4.1.2試劑準(zhǔn)備;恢復(fù)室溫后使用4.1.3試劑保存試劑28避光保存，并于有效期為12個月4.2質(zhì)控品質(zhì)控品為與試劑配套的臨床化學(xué)質(zhì)控品4.3警告和注意事項(xiàng)4.3.1只可用于體外診斷；4.3.2試劑中含有防腐劑和穩(wěn)定劑，可能存在一定刺激作用和毒性，

5、請勿直接接觸皮膚和眼睛，請勿吞服；4.3.3試劑盒的測定結(jié)果僅作為臨床各種疾病的輔助診斷依據(jù)4.4儀器便攜式同型半胱氨酸監(jiān)測儀5 操作程序5.1檢測過程流程簽收樣品離心上機(jī)檢測審核報告簽發(fā)報告標(biāo)本保存5.2樣本簽收嚴(yán)格按標(biāo)本接收程序簽收標(biāo)本5.3標(biāo)本處理以3000r/min，離心610min，分離血清上機(jī)測定，若標(biāo)本不能及時檢測，將分離血清冷藏于28的冰箱內(nèi)5.4標(biāo)本檢測5.4.1從冰箱中取出試劑1 (R1)和試劑2 (R2),使試劑恢復(fù)至室溫；5.4.2按照便攜式同型半胱氨酸檢測儀操作方法，插卡，輸入樣本信息，確認(rèn)；5.4.3按照儀器提示，精密量取8 u 1樣本加入試劑1的比色管中；5.4.

6、4啟動反應(yīng)，等到儀器發(fā)出提示音后，按照儀器操作步驟，精密量取40 u 1試劑2加入比色管中；5.4.5儀器啟動檢測；5.4.6自動檢測完成后，讀取檢測結(jié)果或打印報告5.5檢驗(yàn)后標(biāo)本保存保存在標(biāo)本冰箱內(nèi)，保存期為7d6 校準(zhǔn)程序6.1校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備和儲存直接使用，28保存。6.2校準(zhǔn)條件在室內(nèi)質(zhì)控失控，或更換儀器主要配件，或進(jìn)行大保養(yǎng)后均需校準(zhǔn)。無特殊情況校準(zhǔn)周期為21d6.3校準(zhǔn)程序本儀器校準(zhǔn)由廠家工程師負(fù)責(zé)校準(zhǔn)。7 質(zhì)量控制程序7.1控制品的準(zhǔn)備和儲存試劑28避光保存7.2控制品水平和分析批長度每24h至少進(jìn)行1批。7.3質(zhì)控操作程序參見生化組的質(zhì)量控制操作程序。8 性能參數(shù)8.1準(zhǔn)確性 線性

7、偏差不超過10%8.2精密度 CV108.3線性范圍 348umol/L9 生物參考區(qū)間015umol/L10異常結(jié)果的處理結(jié)果與診斷不符或兩次結(jié)果差異較大時，應(yīng)及時與臨床溝通。11 臨床意義10%的冠心病患者與同型半胱氨酸升高有關(guān)，輕、中度同型半胱氨酸水平升高可使心血管疾病死亡危險性增加4-6倍，血漿總Hcy水平每升高5mol/L則冠心病危險性男性增加60%，女性增加80%，相對危險性男性為1.6，女性為1.8，相當(dāng)于總膽固醇每升高20mg/dL的危險性，因此成為冠心病的一個獨(dú)立危險因素。血漿同型半胱氨酸水平與冠狀動脈病變血管的支數(shù)有一定關(guān)系，有人研究結(jié)果表明，單支、雙支、多支血管病變的患者

8、血漿Hcy水平呈逐級上升趨勢。并且與血管病變的嚴(yán)重程度有關(guān)，研究表明，冠狀動脈狹窄99%的患者血漿Hcy水平明顯高于狹窄75%的患者。血漿同型半胱氨酸水平還與冠心病患者的遠(yuǎn)期預(yù)后、生存率、病死率有關(guān)。12 干擾因素抗壞血酸0.5g/L對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。膽紅素855mol/L對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。血紅蛋白5.0g/L對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。乳糜2.0%對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。13 安全防護(hù)措施13.1血液標(biāo)本運(yùn)輸必須保證運(yùn)輸過程的生物安全，防止溢出。血液標(biāo)本溢出后，應(yīng)立即對污染環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行消毒處理；13.2對標(biāo)明有污染性疾病的血液標(biāo)本應(yīng)特別的防護(hù)，以不污染環(huán)境和保證工作安全為前提；13.3在進(jìn)行血液分析的一切

9、操作過程中應(yīng)按照檢驗(yàn)科生物安全管理程序進(jìn)行；13.4與血液標(biāo)本接觸的一切器皿。儀器組裝/拆卸組合零件都應(yīng)視為污染源，因此操作人員不小心接觸到了這種污染源時，應(yīng)立即用清水清洗被污染區(qū)域并進(jìn)行消毒；13.5如果操作人員皮膚或衣服上污染（沾到）了血液或廢液應(yīng)立即沖洗并進(jìn)行消毒處理。如果眼睛被濺入了血液或廢液應(yīng)立即用大量清水沖洗并進(jìn)行必要的醫(yī)療措施。13.6血液標(biāo)本離心的過程中所有標(biāo)本都應(yīng)該加蓋，離心后，開啟試管時應(yīng)注意防止氣溶（霧）膠污染環(huán)境；13.7所有檢測過的血液標(biāo)本及有關(guān)廢物，都會給您帶來潛在的危險及生物污染。所有廢棄樣本及廢物的處理方法同血液標(biāo)本的處理程序。14 參考文獻(xiàn)14.1深圳奧薩制藥有限公司試劑盒說明書14.2臨床實(shí)驗(yàn)