正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細(xì)胞凋亡及增殖基因表達(dá)的研究

1、正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細(xì)胞凋亡及增殖基因表達(dá)的研究論文摘要 目的：探討正常妊娠及妊高征（ PIH）孕婦胎盤組織bcl2、bax及 ki67基因的表達(dá)及其相互關(guān)系。方法：采用免疫組化方法測(cè)定正常早、中、晚期妊娠30例及輕、中、重度 PIH36例的胎盤組織 bcl2、bax及ki67的表達(dá)。結(jié)果：（l）bcl2表達(dá)主要定位在絨毛的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞（Scells），而 bax在 Scells和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞（CceIIs）均呈陽(yáng)性，在絨毛間質(zhì)中baX也呈陽(yáng)性表達(dá)，但強(qiáng)度低于滋養(yǎng)層細(xì)胞。ki67定位于CceIIs；（2）bcl2在晚期妊娠組的陽(yáng)性率低于早、中期妊娠組（P005）。ki67在正常早

2、、中、晚期妊娠組，對(duì)照組與 PIH組，輕、中、重度 PIH組之間均有顯著性差異（ P 0.01）；（3）bcl2和 bax表達(dá)及與 ki67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性（P 005）。結(jié)論：bcl 2及 bax在高水平上達(dá)到平衡，在胎盤組織中并不起介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主導(dǎo)作用，而且二者的表達(dá)不影響細(xì)胞的增殖。關(guān)鍵詞 胎盤 細(xì)胞凋亡 bcl-2 bax ki67 論文 人類胎盤不僅在胎兒胎盤母體的關(guān)系上起中心軸的作用，而且功能上失調(diào)會(huì)導(dǎo)致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進(jìn)展，絨毛和滋養(yǎng)層不斷成熟和分化，已發(fā)現(xiàn)許多物質(zhì)包括原癌基因產(chǎn)物，在胎盤有生理性的表達(dá)。胎兒的發(fā)展特征是細(xì)胞群增殖和誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞凋亡成熟起來的，

3、因此，胎盤在妊娠期間也經(jīng)歷著相似的變化。我們通過測(cè)定胎盤組織中細(xì)胞凋亡調(diào)控基因bcl-2、bax及細(xì)胞增殖基因ki67，進(jìn)一步探討了妊娠高血壓綜合征（PIH）的病理性變化。1 資料與方法 1.1 臨床資料 隨機(jī)選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)院及長(zhǎng)春市婦產(chǎn)醫(yī)院婦科門診及產(chǎn)科病房的孕產(chǎn)婦66例。（1）妊高征組36例，平均26.143.42歲,平均孕37.443.9周,輕度9例,中度10例,重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.253.80歲，平均孕9.031.11周；孕中期5例，平均26.553.93歲，平均孕24.053.63周；孕晚期（對(duì)照組

4、）15例，平均27.763.38歲，平均孕39.821.32周。1.2 標(biāo)本采集及處理 孕早期是行人工流產(chǎn)術(shù)者，孕中期是來自無(wú)妊娠合并癥、并發(fā)癥，要求終止妊娠而行水囊引產(chǎn)者，孕晚期為單胎足月初產(chǎn)婦，無(wú)妊娠合并癥、并發(fā)癥、以自然分娩及擇期剖宮產(chǎn)手主結(jié)束分娩，其剖宮產(chǎn)指標(biāo)主要是頭盆不稱及社會(huì)因素。妊高征組孕婦是無(wú)慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。早孕絨毛組織不需進(jìn)一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面（避開鈣化、機(jī)化灶）隨機(jī)取3個(gè)不同區(qū)域約2cm2cm2cm胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。1.3 方法

5、用免疫組化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物工程公司。每次染色均設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。1.4 結(jié)果判定 由2名醫(yī)師獨(dú)立觀察切片中10個(gè)高倍視野。（1）陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：SP法顯示bcl-2及bax定位于胞漿和胞膜內(nèi)，反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色。根據(jù)顯色程度分為4級(jí)：（-）為無(wú)著色，（+）為淡黃色，（+）為棕黃色，（+）為棕褐色;（2）SP法顯示ki67以細(xì)胞核呈清晰棕褐色為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞占C-cells的比例分為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%為（-）；10%-20%為（+）；20%-30%為（+）；30%為（+）。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Fisher精確概率檢驗(yàn)法，兩組計(jì)數(shù)資料

6、用等級(jí)相關(guān)分析。2 結(jié)果 2. 1 正常妊娠期胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bcl-2表達(dá)主要定位在絨毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈陽(yáng)性，同時(shí)在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽(yáng)性表達(dá)，但強(qiáng)度低于滋養(yǎng)層細(xì)胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組（P0.05）；ki67在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組（P0.01）。早、中、晚期妊娠組bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)相關(guān)性（P0.05），bax與ki67也無(wú)相關(guān)性（P0.05）。2 .2 妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bcl-2、ba

7、x及ki67的基因表達(dá)bcl-2的陽(yáng)性率在對(duì)照組與PIH兩組間差異無(wú)顯著性（P0.05），bax兩組差異無(wú)顯著性（P0.05），對(duì)照組ki67的陽(yáng)性率明顯低于PIH組（P0.01）。bcl-2與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)相關(guān)性（P0.05），bax與ki67也無(wú)相關(guān)性（P0.05）。2.3 妊高征胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bcl-2的陽(yáng)性率在輕、中、重度PIH3組間差異無(wú)顯著性（P0.05），bax在3組間差異也無(wú)顯著性（P0.05），而ki67在輕度PIH組的陽(yáng)性率明顯低于中、重度組（P0.01）。PIH輕、中、重度組妊娠bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度經(jīng)等級(jí)相關(guān)分析

8、無(wú)相關(guān)性（P0.05），bax與ki67也無(wú)相關(guān)性（P0.05）。3 討論 3.1 正常妊娠與妊高征胎盤組織bcl2、bax的基因表達(dá)bcl2是細(xì)胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bcl2定位在Scell表達(dá)，并且從正常早孕到晚期妊娠持續(xù)出現(xiàn)3，6，因此保留滋養(yǎng)層細(xì)胞團(tuán)可能是維持妊娠的一種機(jī)制1。晚期妊娠bcl 2表達(dá)下降、可能是因?yàn)閎cl2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細(xì)胞不再需要存活，可能是細(xì)胞凋亡的一種早期生物學(xué)變化，也可能與分娩有關(guān)2。目前已知bcl2和bax是bcl2家族中重要成員。bcl2表達(dá)水平較高時(shí)，可形成bcl2和bax的異源二聚體，細(xì)胞凋亡受到抑制； bax表

9、達(dá)水平較高時(shí)，可形成baxbax同源二聚體，加速細(xì)胞凋亡。本研究中，對(duì)照組bcl2與bax的陽(yáng)性率為667與80，PIH組的陽(yáng)性表達(dá)均為75，表明大多數(shù)胎盤組織均呈bcl2與bax高表達(dá)。bcl2和bax表達(dá)已在一定水平上達(dá)到平衡，所以在胎盤組織中不起介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主導(dǎo)作用。PIH組的bax并無(wú)隨病情的嚴(yán)重程度而有下降的趨勢(shì)，說明bax會(huì)進(jìn)一步影響妊娠的結(jié)局，反映病情的嚴(yán)重程度。這些結(jié)果可能提示，胎盤的細(xì)胞凋亡并不是bax單獨(dú)起作用，但有待進(jìn)一步證實(shí)。32 正常妊娠與妊高征胎盤組織中ki67的表達(dá)及bcl2、bax的關(guān)系ki67同細(xì)胞增殖核抗原（PCNA）、拓樸異構(gòu)酶一樣，在細(xì)胞群和組織中可作為增殖細(xì)胞的選擇性標(biāo)記。在細(xì)胞周期S、G2、M期均有表達(dá)，而G0期缺如。本研究中在Ccells中表達(dá)，妊娠早期表達(dá)最豐富