氨基酸的分離鑒定—紙層析法PPT演示文稿

1、1,氨基酸的分離鑒定紙層析法,2,一、實驗目的,掌握氨基酸紙層析的方法和原理，學會分析待測樣品的氨基酸成分。,3,二、實驗原理,紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析。濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機溶劑為流動相。當有機相流經(jīng)固定相時，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。 溶質(zhì)在濾紙上的移動速度用Rf值表示： Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實驗利用紙層析法分離氨基酸。,4,三、實驗器材,（1）大燒杯（5000mL）：1只/組 （2）培養(yǎng)皿

2、：1只/組。 （5）層析濾紙（長20cm、寬12cm的 濾紙）：1張/組。 （6）直尺、鉛筆 （7）電吹風：1只/組。 （8）托盤、雙面膠：1套/組。 （9）手套：1雙/組。 （10）塑料薄膜：公用。 （11）量筒：50mL，1只/組。,5,四、實驗試劑,（1）擴展劑： 將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中，與3體積水混合，倒入分液漏斗充分振蕩，靜置后分層，棄去下層水層。再按0.1%濃度的比例加入質(zhì)量相當?shù)能崛?（2）氨基酸溶液： 1、0.25%蛋氨酸標準溶液：精確稱取0.125g 蛋氨酸， 溶于50mL 蒸餾中，搖勻、充分溶解。 2、0.25%組氨酸標準溶液：精確稱取0.125g

3、蛋氨酸，溶于50mL蒸餾水中，搖勻、充分溶解。 3、 0.25%待測溶液：精確稱取0.125g 待測樣品， 溶于50mL 蒸餾中，搖勻、充分溶解。,6,實驗試劑,7,五、實驗操作,檢查培養(yǎng)皿是否干燥、潔凈；若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120烘干。 （1）平衡：剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯內(nèi)，用塑料薄膜密封起來，平衡20min。,8,（2）規(guī)劃：帶上手套，取寬約12cm、高約20cm的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做3個記號（） ，記號之間間隔3cm，這

4、就是原點的位置。另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A、B兩線的交點為原點標明刻度（以厘米為單位），參見左圖。,9,（3）點樣：用毛細管將各氨基酸樣品分別點在中間3個記號（）上，風干后再點一次。每點在紙上擴散的直徑，最大不超過3 mm。每人須點3個樣，其中2個是已知樣，1個是待測樣品。,10,（4）層析：用雙面膠將濾紙粘成筒狀，點樣面向外，紙的兩側(cè)邊緣不能接觸且要保持平行，參見圖3-3。向培養(yǎng)皿中加入擴展劑，使其液面高度達到1cm左右，將點好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中（點樣的一端在下，擴展劑的液面在A線下約1cm），罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封。當展開劑上升到810cm，取出濾紙，剪斷雙面膠連線，立即用電吹風熱風吹干。,11,（5）顯色：用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后立即用熱風吹干，即可顯出各層析斑點，參見左圖。,12,（6）計算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實驗結(jié)果貼在實驗報告上，見表3-2。 （7）以層析時間為橫坐標，擴展劑上升高度為縱坐標畫圖，求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間。 （8）將微量注射器內(nèi)外用蒸餾水清洗干凈，倒掉用過的展層液和平衡液，將培養(yǎng)皿洗凈，整理好桌面上的儀