上師大分子生物學(xué)2009 試卷A

1、;上海師范大學(xué)標(biāo)準(zhǔn)試卷2009 2010學(xué)年 第一學(xué)期 考試日期 2009年 月 日 科目 分子生物學(xué)（A卷） 專業(yè) 本、專科 年級 班 姓名 學(xué)號 題號一二三四五總分 得分我承諾，遵守上海師范大學(xué)考場規(guī)則，誠信考試。 簽名：_一名詞解釋(本項(xiàng)合計(jì)20分，每個(gè)名詞2分)1 外顯子: 是真核生物基因的一部分，在剪接后仍會保存下來，并可在蛋白質(zhì)合成過程中被表達(dá)為蛋白質(zhì)。2 Ti質(zhì)粒：在根瘤農(nóng)桿菌細(xì)胞中存在的一種染色體外自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈DNA分子，通常將目的基因插入到T-DNA區(qū)后用于轉(zhuǎn)化。重組的T-DNA轉(zhuǎn)化到根瘤農(nóng)桿菌細(xì)胞中，該農(nóng)桿菌攜帶無T-DNA、改造過的Ti質(zhì)粒（卸甲T-DNA穿梭質(zhì)粒）

2、。3 報(bào)告基因 ：是一個(gè)其表達(dá)產(chǎn)物（蛋白或酶）非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達(dá)調(diào)節(jié)序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調(diào)控序列控制下進(jìn)行表達(dá)，從而利用它的表達(dá)產(chǎn)物來標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控，篩選得到轉(zhuǎn)化體。4 半保留復(fù)制：DNA在復(fù)制過程中，每條鏈分別作為模板合成新鏈，產(chǎn)生互補(bǔ)的兩條鏈。這樣新形成的兩個(gè)DNA分子與原來的DNA分子的堿基順序完全一樣，因此，每個(gè)子代分子的一條鏈來自親代DNA，另一條鏈則是新合成的的復(fù)制方式。5 染色體步移：通過不斷從文庫中分離相鄰的基因組克隆來克隆目的基因（位置克?。┑姆椒ㄟ^程,稱為染色體步移可以有效獲取與已知序列相鄰的未知序列。6 細(xì)

3、菌人工染色體：BAC載體是基于大腸桿菌天然的染色體外F因子，BAC 能容納長達(dá)300350kb的插入序列。比YAC短，但BAC的優(yōu)點(diǎn)是: 穩(wěn)定、容易轉(zhuǎn)化。7 Southern雜交：Southern于1975年首先設(shè)計(jì)發(fā)明的，用一種或多種限制酶消化基因組DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳按大小分離所得的片段，隨后使DNA在原位發(fā)生變性，并從凝膠轉(zhuǎn)移至固相支持體（尼龍膜）上。DNA轉(zhuǎn)移至尼龍膜的過程中，DNA片段的相對位置保持不變，用標(biāo)記好的DNA探針與固著于膜上的DNA雜交，經(jīng)放射自顯影確定與探針互補(bǔ)的電泳條帶的位置, 然后進(jìn)行分析。8 端粒：存在于真核細(xì)胞線狀染色體末端的一小段DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體，它

4、與端粒結(jié)合蛋白一起構(gòu)成了特殊的“帽子”結(jié)構(gòu)，作用是保持染色體的完整性和控制細(xì)胞分裂周期。端粒DNA是由簡單的DNA高度重復(fù)序列組成，端粒酶可用于給端粒DNA加尾，DNA分子每次分裂復(fù)制，端粒就縮短一點(diǎn)。9 切除修復(fù)：切除突變的堿基（糖苷水解酶）和核苷酸（DNA切割酶）片段。10感受態(tài)細(xì)胞：通過理化方法誘導(dǎo)細(xì)胞，如CaCl2法、電轉(zhuǎn)化法等，使其處于最適攝取和容納外源DNA的生理狀態(tài)。二選擇題（本項(xiàng)合計(jì)20分，每題2分）( B ) 1.關(guān)于DNA復(fù)制不正確的是_A ) DNA復(fù)制機(jī)制的核心在于DNA雙螺旋中的兩條鏈都攜帶相同信息，它們的堿基是互補(bǔ)的B) 通常兩個(gè)復(fù)制叉從起始點(diǎn)向三個(gè)方向進(jìn)行復(fù)制C)

5、 每個(gè)復(fù)制叉中的前導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)復(fù)制的D) 所有起始點(diǎn)都在雙鏈最初解鏈處均富含AT序列( C ) 2.適用于所有DNA的穩(wěn)定形式的螺旋鏈形式為_A) A型 B)Z型 C) B型 D) B型和Z型( B ) 3.在哺乳動物細(xì)胞中，一種可能傳遞信號使得表達(dá)基因位點(diǎn)處的染色體保持適當(dāng)?shù)陌b水平的重要化學(xué)修飾是_A) 磷酸化 B) CpG甲基化C) 糖基化 D) 加帽( C ) 4.真核生物復(fù)制叉以每秒約_bp的速度推移。A）40 B）60 C）50 D）30( B ) 5.在DNA克隆中常用于修復(fù)雙鏈DNA骨架斷裂的酶是_A) EcoR I B) Hind IIIC) T4 連接酶 D) 堿性磷酸酶(

6、D ) 6.DNA電泳中常用的染色劑是_A) 溴酚蘭 B) 龍膽紫 C) 醋酸洋紅 D) 溴化乙錠( A )7.在可見光存在的情況下，_可將環(huán)丁烷嘧啶二聚體在分解為單體。A) DNA光解酶 B) 烷基轉(zhuǎn)移沒酶C) 內(nèi)切核酸酶 D) DNA修復(fù)酶( B )8.20世紀(jì)50年代所提出的著名分子生物學(xué)的中心法則即_A) DNARNADNA B) DNARNA蛋白質(zhì)C) RNADNA蛋白質(zhì) D) RNADNARNA( A )9.Southern blotting主要用于_的檢測A)DNA B)RNA C)蛋白質(zhì) D)多糖( B )10.Taq DNA聚合酶的最佳反應(yīng)溫度是_. A37；B.72；C.1

7、6；D.92三填空題（本項(xiàng)合計(jì)20分，每空1分）1. DNA分子通常以 雙鏈 形式存在。兩條獨(dú)立的 反向 向平行的單鏈DNA分子以 右 手螺旋方式相互纏繞。2在強(qiáng)酸條件下，核酸可以水解成 含氮堿基 ，戊糖 和 磷酸 。3. DNA合成的方向是從 5 端到 3 端的方向。4. 染色質(zhì)中的主要蛋白質(zhì)是組蛋白 。51953年Watson和Crick提出 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu) ，奠定了分子生物學(xué)的新紀(jì)元。6DNA所帶電荷為 負(fù) 電荷；在瓊脂糖凝膠電泳過程中DNA泳動的方向是從 負(fù) 極到 正 極。7載體根據(jù)功能可以分為 克隆載體 ， 表達(dá)載體 和 整合載體 。8染色質(zhì)有兩種類型分別是常染色質(zhì) 和異染色質(zhì) 。

8、9PCR 過程中，引物的A+T含量越高，引物的退火溫度越 低 。10雙鏈DNA 變性為單鏈，光吸收值增加的現(xiàn)象稱為 增色效應(yīng) 。四簡答題（本項(xiàng)合計(jì)20分，每題5分）1. 簡述藍(lán)白斑篩選的原理及過程（5分）？在質(zhì)粒lacZ的編碼區(qū)中插入了一個(gè)多克隆位點(diǎn)，它并不破壞讀框，能編碼-半乳糖苷酶的N端，宿主細(xì)胞可編碼-半乳糖苷酶C端。因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時(shí)存在時(shí)，可互補(bǔ)形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。產(chǎn)生的LacZ+細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色菌落，當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后破壞了互補(bǔ)作用，使得帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。2簡述c

9、DNA文庫的構(gòu)建步驟（5分）（1）mRNA分離純化：使用寡聚(dT)的磁珠分離mRNA；（2）檢測RNA完整性：翻譯mRNA法、凝膠電泳分析法；（3）分離并富集mRNA：僅克隆某一特定基因而不是構(gòu)建完整cDNA文庫時(shí)，進(jìn)行此步驟；（4）cDNA的合成：需要反轉(zhuǎn)錄酶, 引物(寡聚dT)及dNTP；（5）cDNA末端的處理（6）與載體的連接：堿性磷酸酶將載體去磷酸化(防止載體自連)，T4 DNA連接酶連接載體與Cdna;（7）鑒定:測定文庫包含的克隆數(shù)，抽查克隆的質(zhì)量和異質(zhì)性，如果需要可適當(dāng)擴(kuò)增。3.簡述Northern雜交的過程及應(yīng)用（5分）？過程：將RNA樣品通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，再轉(zhuǎn)移

10、到尼龍膜等固相膜上，用同位素或生物素標(biāo)記的DNA和RNA特異探針對固定于膜上的mRNA進(jìn)行雜交，洗膜去除非特異性雜交信號，對雜交信號進(jìn)行分析，出現(xiàn)信號的尼龍膜所對應(yīng)的。應(yīng)用：測量真核生物RNA的量和大小，估計(jì)其豐度的4什么是基因文庫？構(gòu)建基因文庫時(shí)，通常采用哪些載體？（5分）基因文庫是來自某生物的不同DNA序列的總集，這些DNA序列都已被克隆進(jìn)了載體以便于純化、貯存與分析。分為基因組文庫和cDNA文庫?；蚪M文庫：用基因組DNA的隨機(jī)片段制備成的。然而用基因組文庫來克隆真核生物基因組是非常低的，其中大量DNA是非編碼的。cDNA文庫:指用來自表達(dá)目的基因細(xì)胞或組織的mRNA作為來源構(gòu)建成的文庫

11、。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄將mRNA合成cDNA(DNA拷貝)后，插入載體構(gòu)建成cDNA文庫。用DNA文庫來克隆目的基因是有效的，但克隆的僅是其編碼區(qū)，而不包含編碼區(qū)以外的基因組序列。常用載體：質(zhì)粒10kb;噬菌體23kb;粘粒載體: 45kb;BAC載體：350kb;YAC載體: 1000kb。五論述題(本項(xiàng)合計(jì)20分，每題10分)1目前測序的主要方法及其原理？什么是人類基因組計(jì)劃？該計(jì)劃有何意義？（10分）（1）化學(xué)修飾法:待測序的DNA片段的一端進(jìn)行標(biāo)記后，進(jìn)行堿基的特異切割后再膠分離。（2）Sanger雙脫氧鏈終止法：DNA聚合酶能夠利用單鏈DNA為模板合成出準(zhǔn)確的互補(bǔ)鏈;利用雙脫氧核苷三磷酸為底物,

12、使之摻入到寡核苷酸鏈的3末端,從而終止DNA鏈的生長。（3）改進(jìn)后的sanger測序第二代第三代等測序，如焦磷酸測序是對產(chǎn)生的序列的熒光進(jìn)行檢測。人類基因組計(jì)劃：美國科學(xué)家于1985年率先提出的，旨在闡明人類基因組30億個(gè)堿基對的序列，發(fā)現(xiàn)所有人類基因并搞清其在染色體上的位置，破譯人類全部遺傳信息，使人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識自我。1990年正式啟動，美國、英國、法國、德國、日本和我國科學(xué)家共同參與了這一預(yù)算達(dá)30億美元的人類基因組計(jì)劃。截止到2005年，人類基因組計(jì)劃的測序工作已經(jīng)完成。意義：有助于人類認(rèn)識許多遺傳疾病以及癌癥等疾病的致病機(jī)理,為分子診斷、基因治療等新方法提供理論依據(jù)。

13、破譯生命密碼的人類基因組計(jì)劃有助于人們對基因的表達(dá)調(diào)控有更深入的了解。2闡述PCR的定義，擴(kuò)增原理，循環(huán)步驟及PCR假陽性的可能因素？（10分）定義：是一種 DNA 體外擴(kuò)增技術(shù)。 1985 年美國的 Mullis 等人發(fā)明了 PCR 技術(shù)，在體外利用模板 DNA 、特定的寡聚核苷酸引物和 DNA 聚合酶，通過 DNA 變性、復(fù)性和延伸過程合成一條互補(bǔ)的 DNA 鏈。反復(fù)重復(fù)這一過程，模板 DNA 就可得到大量擴(kuò)增。擴(kuò)增原理：在模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的酶促合反應(yīng)，將待擴(kuò)增的DNA片段與其兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈引物經(jīng)“高溫變性，低溫退火，引物延伸”三步反應(yīng)的多次循環(huán)，使DNA片段在數(shù)量上呈指數(shù)增加，從而在短時(shí)間內(nèi)獲得我們