Agilent1100型高效液相色譜儀操作規(guī)程PPT參考課件

1、1,Agilent 1100型高效液相色譜儀操作規(guī)程,溶劑架,在線脫氣,泵,Purge閥,自動進(jìn)樣器,柱溫箱,檢測器,溶劑瓶,2,儀器各組件,泵 ：四元泵、二元泵 在線脫氣器 進(jìn)樣器：自動進(jìn)樣器及手動進(jìn)樣器 柱溫箱 檢測器： DAD檢測器、UV檢測器,3,Agilent1100在線脫氣機(jī),4,Agilent1100在線脫氣機(jī)工作原理,5,何時需要使用Agilent在線脫氣機(jī),如果在低UV波長段，用最高靈敏度進(jìn)行檢測 如果要求使用最佳進(jìn)樣精度 如果要求保留時間重現(xiàn)性很高 （在0.5ml/min流速以下） 如果樣品和檢測對流動相中溶解氧敏感,6,Agilent 1100泵,7,Agilent 11

2、00四元泵工作原理,8,Agilent 1100泵頭結(jié)構(gòu),9,Agilent 1100自動進(jìn)樣器結(jié)構(gòu),10,Agilent 1100自動進(jìn)樣器工作原理,11,Agilent 1100柱溫箱結(jié)構(gòu),12,柱溫箱流路連接,13,開機(jī),打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT 或Windows 2000 畫面,并運(yùn)行Bootp Server程序（點(diǎn)擊左下方【Bootp Server】圖標(biāo)） 打開色譜儀各組件電源，待Bootp Server里顯示已聯(lián)上各組件的信息及各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online ，圖標(biāo)打開工作站?；瘜W(xué)工作站自動與1100通訊。進(jìn)入的工作站畫面如下所示,14,1

3、5,排氣,將流動相放入溶劑瓶中，打開Purge 閥，依次單擊【Pump】【Set up Pump】，設(shè)Flow為2ml/min，單擊OK ，再依次單擊【Pump】【control】，選中on，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge至管路無氣泡為止，切換管路反復(fù)操作至所需管路均無氣泡。 在【control】選項(xiàng)中選off，關(guān)閉泵，關(guān)閉Purge 閥。單擊泵下面瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。如圖所示。 打開10異丙醇溶液控制閥，用針筒抽吸至管路中有液體流出。調(diào)節(jié)控制閥松緊，控制流量至流出量約為每分鐘515滴,16,17,編輯分析方法,新方法建立：點(diǎn)擊【Method】，點(diǎn)擊【Edit entire m

4、ethod】或【New method】選項(xiàng)，進(jìn)行方法編緝,18,19,在Method Comments 中加入方法的信息如方法的用途等,20,泵參數(shù)設(shè)定,在Flow 處輸入流量, 在Solvent A、B、C、D 處輸入比例，也可Insert一行”Timetable” ,編輯梯度，在Pressure Limits Max 處輸入柱子的最大耐高壓。單擊Ok進(jìn)入下一畫面,21,自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定,選擇合適的進(jìn)樣方式 進(jìn)樣體積 洗瓶位置 進(jìn)樣方式：“Standard Injection”只能輸入進(jìn)樣體積“Injection with Needle Wash”可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置此方式針從樣品瓶

5、抽完樣品后會在洗瓶中洗針 Use injector program -可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯 點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面,22,23,柱溫箱參數(shù)設(shè)定,在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more”鍵,選中“Same as left”使柱溫箱的溫度左右一致 點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面,24,25,檢測器參數(shù)設(shè)定UV,在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm, 在“Peakwidth (Response time)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時間, 如0.1min(2s) 在Timetable 中可以Insert 一行輸入

6、隨時間切換的波長 點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面,26,27,檢測器參數(shù)設(shè)定DAD,樣品波長-一般選擇最大吸收處的波長 樣品帶寬BW一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度 參比波長一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域 參比帶寬BW至少要與樣品信號的帶寬相等許多情況下用100nm作為缺省值 Peak width Response time 其值盡可能接近要測的窄峰峰寬 選中所用的燈點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面,28,29,方法保存,單擊Method 菜單選中Save method as 輸入一方法名，如test 單擊Ok,30,編輯分析方法,選擇已有方法：點(diǎn)擊【Method】，點(diǎn)擊【Load method】選項(xiàng)

7、，選取已存的各種操作方法,31,樣品分析與采集數(shù)據(jù),將樣品放于樣品盤中相應(yīng)位置，所有的樣品均需澄清。 待儀器顯示Ready，基線平穩(wěn)，從【Run control】菜單中選擇【Run Method】，開始進(jìn)樣分析。 數(shù)據(jù)處理：單擊【View】菜單，單擊【Data analysis】選項(xiàng)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。單擊【View】菜單，單擊【Method and Run control】選項(xiàng)，回到樣品分析界面,32,數(shù)據(jù)分析方法編輯,從File 菜單選擇Load signal 選中您的數(shù)據(jù)文件名 單擊Ok,33,積分,從Integration 中選擇“Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再從菜單

8、中選擇Integration Events 選項(xiàng)選擇合適的Slope sensitivity Peak width Area reject Height reject 從Integration 菜單中選擇Integrate 選項(xiàng)則數(shù)據(jù)被積分 如積分結(jié)果不理想則修改相應(yīng)的積分參數(shù)直到滿意為止 單擊左邊圖標(biāo)將積分參數(shù)存入方法,34,單擊左邊圖標(biāo)將積分參數(shù)存入方法,35,關(guān)機(jī),沖洗系統(tǒng)：反相柱用5的甲醇水沖洗系統(tǒng)30分鐘，再用純甲醇沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后關(guān)泵，正相柱先用合適溶劑沖洗，后用柱保存液沖洗。 退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。 關(guān)閉10異丙醇溶液控制閥。 關(guān)閉儀器各組件 關(guān)掉Agilent 1100

9、電源開關(guān),36,注意事項(xiàng),儀器運(yùn)行時，泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗，不能干涸。 注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會自動停泵。 對于手動進(jìn)樣器當(dāng)使用緩沖溶液時要用水沖洗進(jìn)樣口同時搬動進(jìn)樣閥數(shù)次每次數(shù)毫升,37,注意事項(xiàng),溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。 檢測器的燈有使用壽命限制，一般在正式進(jìn)樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，分析結(jié)束，立即關(guān)燈。 使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進(jìn)液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進(jìn)

10、液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相,38,泵的維護(hù),流動相使用前必須脫氣過濾 使用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項(xiàng) 關(guān)機(jī)前反相色譜柱用5%的甲醇水沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后關(guān)泵。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗。 及時更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯，當(dāng)打開Purge Valve時壓力高于10bar 表明過濾芯已堵,39,使用梯度比例時的注意事項(xiàng),當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶而不會出現(xiàn)沉淀。 由于在比例閥的混合點(diǎn)重力作用使鹽顆粒沉淀下來通常閥A接水相/鹽溶液D接有機(jī)溶劑此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中并被溶解若顛倒過來鹽可能落在有機(jī)溶劑中出現(xiàn)問題 當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時推薦將緩沖鹽通道接在A通道上有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通