艾滋病梅毒乙肝實驗室檢測

艾滋病、梅毒、乙肝

實驗室檢測第一頁，共120頁。主要內(nèi)容酶聯(lián)免疫吸附試驗〔ELISA〕簡介免疫層析法簡介樣品的采集、保存和運輸艾滋病實驗室檢測梅毒實驗室檢測乙肝實驗室檢測第二頁，共120頁。ELISA簡介ELISA原理基礎(chǔ)活性相關(guān)抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記固相載體外表的抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體免疫學(xué)活性酶的活性固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量

第三頁，共120頁。ELISA方法類型檢測抗原檢測抗體雙抗體夾心法間接法捕獲法雙抗原夾心法競爭法第四頁，共120頁。ELISA的試劑完好的ELISA試劑盒包含以下各組分：

〔1〕已包被抗原或抗體的固相載體；

〔2〕酶標(biāo)記的抗原或抗體；

〔3〕酶的底物；

〔4〕陰性對照品和陽性對照品〔定性測定中〕，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清〔定量測定中〕；

〔5〕標(biāo)本〔和結(jié)合物〕的稀釋液；

〔6〕洗滌液；

〔7〕酶反響終止液。ELISA的試劑〔上〕第五頁，共120頁。ELISA的試劑固相載體：常用聚苯乙烯固相載體形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用，專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，國際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。第六頁，共120頁。ELISA的試劑結(jié)合物〔酶標(biāo)記的抗體或抗原〕常用的酶：辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)堿性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)第七頁，共120頁。ELISA的試劑底物HRP：常見的有鄰苯二胺(OPD)反響后呈橙紅色，用酸終止酶反響后為橙黃色，在492nm處有最高吸收峰四甲基聯(lián)苯胺(TMB)反響后顯藍(lán)色，終止后呈黃色，最適吸收波長為450nm。第八頁，共120頁。ELISA的試劑洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。終止液

HRP常用強(qiáng)酸，最常見2mol/L硫酸第九頁，共120頁。包被特異性抗原雙抗原夾心法ELISA檢測抗體1.加樣2.孵育3.洗滌4.加入二抗5.孵育6.顯色酶標(biāo)記的特異性抗原第十頁，共120頁。操作要點標(biāo)本的采取和保存加樣孵育洗滌顯色與終止第十一頁，共120頁。標(biāo)本的采取和保存

防止溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新穎時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反響。第十二頁，共120頁。標(biāo)本的采取和保存凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并防止產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。標(biāo)本防止反復(fù)凍融，反復(fù)凍融過程中的機(jī)械剪切力會破壞蛋白質(zhì)構(gòu)造，使抗體效價下降，因此血清標(biāo)本如需作屢次檢測，宜少量分裝凍存。第十三頁，共120頁。加樣

準(zhǔn)確加到微孔板底部，防止加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡，參加后及時放入孵箱。第十四頁，共120頁。孵育

孵育的時間要掌握好，嚴(yán)格按照說明書操作。注意封板，防止蒸發(fā)。反響板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡注意孵育中邊緣效應(yīng)第十五頁，共120頁。洗滌洗滌在ELISA過程中雖不是一個反響步驟，但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來到達(dá)別離游離和酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以去除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反響過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等材質(zhì)對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，所以在洗滌時應(yīng)把這種非特異性的干擾物質(zhì)洗滌下來。第十六頁，共120頁。洗滌各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋，洗液假如結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制?？變?nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。第十七頁，共120頁。顯色與終止顯色劑不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不可用加終止液時應(yīng)防止產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生較多氣泡，那么會導(dǎo)致假陽性。不允許肉眼判讀結(jié)果第十八頁，共120頁。第十九頁，共120頁。第二十頁，共120頁。第二十一頁，共120頁。嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑O(shè)計，優(yōu)質(zhì)的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證ELISA必要條件。嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。ELISA法質(zhì)量管理第二十二頁，共120頁?？焖贆z測〔免疫層析法〕簡介快速測試的臨床應(yīng)用日常診斷測試緊急檢測用處(外科手術(shù)，輸血)針頭刺傷母嬰篩查就職和移民體檢性犯罪人員檢查偏遠(yuǎn)地區(qū)戶外檢測第二十三頁，共120頁。免疫層析法的原理第二十四頁，共120頁。免疫層析法的原理表層保護(hù)膜頂部膜片樣品別離墊連接物墊捕捉條膜強(qiáng)硬低部膜片成熟的膜片疊加技術(shù)和免疫層析法完美組合第二十五頁，共120頁。免疫層析法在硝酸纖維素膜上預(yù)置膠體金標(biāo)記的抗原，同時分別在其下方的檢測區(qū)包被抗原，對照區(qū)包被抗人IgG。樣品加至樣品孔后，樣品中的抗體先與膠體金標(biāo)記的抗原結(jié)合形成復(fù)合物。由于層析作用，復(fù)合物沿硝酸纖維素膜挪動，到達(dá)檢測區(qū)時那么與包被于其上的抗原形成雙抗原夾心免疫復(fù)合物，顯色出現(xiàn)肉眼可見的紅色條帶；第二十六頁，共120頁。在質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)另一條紅色條帶作為質(zhì)控。無需冷藏、步驟簡捷、無需任何儀器設(shè)備及容易解釋結(jié)果等特點，合適于基層實驗室篩查使用。第二十七頁，共120頁。免疫層析試劑盒操作步驟第二十八頁，共120頁。血清/血漿樣品加50ul樣品于樣品墊中15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果第二十九頁，共120頁。全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果第三十頁，共120頁。注意嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)展結(jié)果讀取。時間過短或過長都會影響判讀結(jié)果由于血紅蛋白的存在，時間過長〔如>20分鐘〕那么有色的血紅蛋白也層析到檢測線位置，影響判讀結(jié)果。第三十一頁，共120頁?？焖贆z測的優(yōu)勢特點取樣品種：血清,血漿和全血無須儀器,容易使用：1至2步即可快速：一般15分鐘體積小,室溫穩(wěn)定,包裝防潮,便攜式內(nèi)置質(zhì)控,每一人份一條,可批式或單個樣品臨床質(zhì)控,不單監(jiān)測產(chǎn)品質(zhì)量,其樣本反響的質(zhì)量也受監(jiān)控第三十二頁，共120頁。質(zhì)量控制試劑內(nèi)對照：為確保結(jié)果有效，在樣品反響條中放入質(zhì)控條并標(biāo)有“Control〞，當(dāng)分析完畢后質(zhì)控條沒有變紅，測試結(jié)果無效，必須重測。外部質(zhì)控品：包含陰性和陽性樣品，不能使用ELISA實驗質(zhì)控品。需使用外部質(zhì)控品做質(zhì)量控制：更換試劑批號；更換檢測人員；更換包裝；每個檢測日；更換試劑廠家。需參加省級或地市級CDC組織的實驗室才能驗證。第三十三頁，共120頁。樣品的采集、保存和運輸1、樣品采集〔1〕樣品采樣前準(zhǔn)備①準(zhǔn)備采血用具〔平安針具，如蝶形針〕、皮膚消毒用品〔70%乙醇等〕、采血管及試管架、耐穿刺防滲漏的利器盒、油性記號筆等，并檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損。②制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕。③使用專用的樣品記錄本或登記表記錄樣品信息，建議錄入電腦保存。第三十四頁，共120頁。樣品的采集、保存和運輸1、樣品采集〔2〕樣品采集①核對受檢者信息與樣品管的標(biāo)記是否一致，應(yīng)注明樣品采集時間。選擇符合生物平安要求的采血室，受檢者坐〔臥〕于適宜的位置。②消毒部分皮膚，用真空采血管抽取足量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至真空管中〔轉(zhuǎn)移時制止直接將針頭插入真空管，應(yīng)去除針頭，翻開真空管直接注入〕，如真空管中加有添加劑，那么需輕輕顛倒混勻6～8次，備用。③采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于利器盒內(nèi)，防止發(fā)生職業(yè)暴露。第三十五頁，共120頁。樣品的采集、保存和運輸2、樣品處理〔1〕血漿：將采集的抗凝全血1500～3000r/min離心15min，上層即為血漿，吸出置于與采血管標(biāo)記一致的螺口帶硅膠墊的離心管中，備用?！?〕血清:室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后，操作同上。第三十六頁，共120頁。樣品的采集、保存和運輸3、樣品保存〔1〕用于抗體檢測的血清或血漿樣品，1周內(nèi)進(jìn)展檢測的存放于2～8℃，一周以上存放于-20℃以下，超過三個月的應(yīng)保存于-80℃?！?〕艾滋病檢測篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送篩查中心實驗室或確證實驗室，篩查陰性樣品，可根據(jù)詳細(xì)需要決定保存時間，建議至少保存1～2個月。特殊用處或?qū)ｍ椆こ痰臉悠犯鶕?jù)詳細(xì)要求確定保存時間。第三十七頁，共120頁。*濾紙干血斑〔DBS〕根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，保存、運輸及檢測。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。用移液器從樣品管中汲取100μL抗凝全血〔或血漿〕樣品，對準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個印圈上滴加樣品。第三十八頁，共120頁。于室溫下自然枯燥至少4小時〔潮濕氣候下至少枯燥24小時〕，不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。血斑充分枯燥后，將其放入密封袋中，防止血斑之間的互相污染，同時放入枯燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆?。第三十九頁，?20頁。樣品的采集、保存和運輸4樣品的運送應(yīng)符合生物平安要求；要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。應(yīng)采用三層容器對樣品進(jìn)展包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第四十頁，共120頁。第二層容器：包容并保護(hù)第一層容器，可以裝假設(shè)干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：包容并保護(hù)第二層容器的運輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)絡(luò)方式，同時要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓〞等字樣，還應(yīng)易于消毒。用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送。用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下〔18～25℃〕或4℃〔特殊要求時〕運送。用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在-20℃以下運輸。DBS樣品應(yīng)在室溫下〔18～25℃〕運送。每一件包裝的體積以不超過50mL為宜。運送樣品必須有記錄。特殊情況下經(jīng)有關(guān)部門批準(zhǔn)可以用特快專遞郵寄樣品，但必須按三層包裝，將樣品管包扎好，嚴(yán)禁使用玻璃容器。第四十一頁，共120頁。樣品的采集、保存和運輸5樣品的接收樣品包裹必須在具有處理感染性材料才能的實驗室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣、戴口罩、防護(hù)眼鏡的工作人員在生物平安柜中翻開，用后的包裹應(yīng)及時進(jìn)展消毒。核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告實驗室負(fù)責(zé)人和上一級實驗室技術(shù)人員。檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。假如污染過重或者認(rèn)為樣品不能被承受，應(yīng)將樣品平安廢棄。并將樣品情況立即通知送樣人。接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。第四十二頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測第四十三頁，共120頁。HIV簡介逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬單股正鏈的RNA病毒，電鏡下可見一致密的圓錐狀核心，20面體，具有包膜〔被膜〕HIV-1和HIV-2，目前我省也檢測出HIV-2。HIV是什么東西？第四十四頁，共120頁。HIV包膜蛋白〔env〕：gP160、gP120、gP41

核心蛋白〔gag〕：P17、P24、P55酶蛋白〔pol〕：P66、P51〔逆轉(zhuǎn)錄酶〕、P31〔整合酶〕第四十五頁，共120頁。HIV病毒及基因組構(gòu)造第四十六頁，共120頁。HIV的感染●HIV感染具有CD4+的T淋巴細(xì)胞?！裱芯堪l(fā)現(xiàn)，主要感染具有CCR5、CXCR4

受體的細(xì)胞?！裰饕蠺淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。第四十七頁，共120頁。HIV病毒感染的細(xì)胞第四十八頁，共120頁。HIV感染的過程1、病毒顆粒與宿主細(xì)胞外表的受體結(jié)合。2、病毒的核心穿過細(xì)胞膜進(jìn)入宿主細(xì)胞。3、在病毒核內(nèi)，病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA。4、在病毒核蛋白的協(xié)助下，病毒DNA轉(zhuǎn)運到宿主細(xì)胞核內(nèi)。5、病毒DNA隨機(jī)整合到宿主細(xì)胞DNA〔染色體〕上，形成前病毒。第四十九頁，共120頁。HIV感染的過程6、以前病毒為模板，在細(xì)胞RNA聚合酶Ⅱ的參與下，合成病毒RNA?；蜣D(zhuǎn)錄成病毒mRNA。同時宿主細(xì)胞DNA也轉(zhuǎn)錄成mRNA。7、以病毒mRNA為模板，在tRNA的參與下，合成病毒蛋白。8、裝配核衣殼。9、以出芽方式分泌出細(xì)胞，形成完好的病毒顆粒。第五十頁，共120頁。HIV的感染步驟：第五十一頁，共120頁。HIV感染時抗體反響及抗原血癥注意：對P24、P55的反響也見于未感染的個體第五十二頁，共120頁。促進(jìn)AIDS發(fā)生的因素HIV感染后在一段時間內(nèi)保持極低程度的復(fù)制，使AIDS無病癥期〔臨床埋伏期〕持續(xù)時間很長〔平均7～10年〕：1.由于細(xì)胞免疫和體液免疫可以降低和調(diào)節(jié)病毒復(fù)制。2.是HIV進(jìn)入CD4+T淋巴細(xì)胞后，逃過免疫監(jiān)視部分成為埋伏型。第五十三頁，共120頁。促進(jìn)AIDS發(fā)生的因素研究說明，一些細(xì)胞因子和其他病毒感染，能激活HIV的復(fù)制和表達(dá)：糖皮質(zhì)激素和白介素〔IL-4，IL-6和IL-10等細(xì)胞因子〕能協(xié)同增強(qiáng)HIV的復(fù)制。腫瘤壞死因子〔TNF〕α、β和IL-1亦能導(dǎo)致HIV的表達(dá)，其中特別是TNF-α。第五十四頁，共120頁。抵抗力HIV對熱敏感，56℃30min滅活。室溫保存7天，仍保持活性。不加穩(wěn)定劑的前提下，-70℃冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰凍3個月仍保持活性。對消毒劑敏感，0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來蘇爾處理5′能滅活病毒。對紫外線、γ射線有較強(qiáng)抵抗力。

第五十五頁，共120頁。HIV的多態(tài)性HIV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒HIV需要用它的逆轉(zhuǎn)錄酶來復(fù)制其基因組HIV逆轉(zhuǎn)錄酶缺少5’-3’修復(fù)活性，病毒在復(fù)制過程中會產(chǎn)生很多的錯誤HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的錯誤率是3x10-5/堿基/復(fù)制周期HIV基因組含近1x104個堿基就概率推論,HIV每復(fù)制一次其基因組將含個錯誤結(jié)果22%被感染的細(xì)胞將至少含有1個錯誤堿基第五十六頁，共120頁。病毒多態(tài)性的負(fù)面影響疫苗:難以解決免疫逃避的問題.藥物:難以解決耐藥病毒的問題.第五十七頁，共120頁。HIV的傳播方式如何有效阻斷HIV的傳播？第五十八頁，共120頁。1983年第一次被發(fā)現(xiàn)，1986年通過國際病毒分類委員會被命名。1985年在我國首次發(fā)現(xiàn)，為一男性阿裔美國旅游者。我省于1995年發(fā)現(xiàn)第一例HIV感染者。第五十九頁，共120頁。HIV是如何傳播的？三個條件：1.有病毒從感染者體內(nèi)排出2.排出的病毒要經(jīng)過一定方式傳遞給別人3.有足量的病毒進(jìn)入體內(nèi)三種途徑：1.血液傳播2.性接觸傳播3.母嬰傳播第六十頁，共120頁。靜脈注射毒品的人共用未經(jīng)消毒的針具輸入含有HIV的血液制品或器官移植醫(yī)務(wù)人員工作中發(fā)生的職業(yè)暴露，如被針頭刺傷、粘膜接觸體液等血液傳播第六十一頁，共120頁。性接觸傳播精液、陰道分泌物、月經(jīng)血中的HIV可通過生殖器粘膜傳播，未經(jīng)設(shè)防的性活動很易引起HIV傳播影響HIV性傳播的因素：性伴數(shù)、性伴的感染階段，性病和生殖器部分的損害程度，性交方式及保護(hù)措施等第六十二頁，共120頁。母嬰傳播的概率在25%-40%之間感染HIV的婦女可通過胎盤、分娩及哺乳將艾滋病傳播給嬰兒

母嬰傳播第六十三頁，共120頁。不同時期母嬰傳播的概率母嬰傳播哺乳妊娠分娩過程020％40％60％80％100％第六十四頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測縣級以上疾病預(yù)防控制中心和二級以上醫(yī)療衛(wèi)活力構(gòu)要建立艾滋病篩查實驗室，不具備建立篩查實驗室的要設(shè)立檢測點，開展快速檢測。

——中國遏制與防治艾滋病行動方案〔2006-年〕國務(wù)院第六十五頁，共120頁。HIV實驗室應(yīng)編寫的SOP文件樣本的接收、登記和處理檢測方法和步驟儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)實驗室中的質(zhì)量控制結(jié)果解釋和報告保密程序檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存追蹤和處理實驗室的清理和消毒實驗室平安防護(hù)第六十六頁，共120頁。標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP)1〕清楚、簡潔的標(biāo)題和統(tǒng)一的SOP編號2〕SOP編寫和修改日期3〕編寫和修訂SOP的人員姓名4〕方法、目的和原理5〕相應(yīng)的職業(yè)標(biāo)準(zhǔn)6〕檢測設(shè)備和試劑7〕參考其他包含相關(guān)步驟的SOP8〕安康和平安操作指南(參考?標(biāo)準(zhǔn)?附件一，實驗室平安施行SOP)9〕每一操作步驟和質(zhì)控步驟用編號描繪10〕結(jié)果的討論和報告以及出現(xiàn)問題時所采取的措施11〕附錄，包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說明書等。第六十七頁，共120頁。SOP和所有其它文檔的普遍特征實驗室所有人員都可容易查取所有職員熟悉崗位和內(nèi)容所有程序符合當(dāng)前實際情況SOP和其他書面程序由作者和/或主任簽署和標(biāo)明明日期–版本控制所有原始記錄和報告簽署和標(biāo)明日期用墨涂改，簽署和標(biāo)明日期,而非“擦白〞掌握平安存放的文檔的分布清單確定各種類型文件存放的時間.第六十八頁，共120頁。實驗室相關(guān)記錄表格HIV抗體初篩ELISA實驗原始記錄.docHIV抗體檢測收樣記錄.doc門診樣本登記表.doc已確認(rèn)血清樣本保存記錄表.doc冰箱溫度記錄.doc儀器使用記錄.doc儀器維護(hù)及保養(yǎng)記錄.doc特種垃圾記錄\感染材料消毀表.doc特種垃圾記錄\特種垃圾遞送單.doc特種垃圾記錄\消毒登記表.docHIV抗體篩查陽性送檢單.docHIV抗體篩查報告.doc山西省確認(rèn)實驗室來訪人員登記表.docHIV抗體初篩陽性樣本專用登記表.dot第六十九頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測艾滋病檢測工作須遵守?實驗室生物平安通用要求?、?全國艾滋病檢測工作管理方法?及?全國艾滋病檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?。第七十頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測工作要求1、開展艾滋病檢測工作的實驗室須經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門評審驗收，獲得資格；艾滋病檢測實驗室技術(shù)人員須承受省級或省級以上的艾滋病檢測技術(shù)和生物平安培訓(xùn)，經(jīng)考核合格者由相關(guān)機(jī)構(gòu)發(fā)給培訓(xùn)證書，持證上崗。非衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)人員不得從事艾滋病檢測工作。2、艾滋病篩查實驗室的職能：〔1〕開展艾滋病病毒抗體的篩查試驗，根據(jù)需要可開展其他艾滋病檢測工作。〔2〕負(fù)責(zé)將艾滋病病毒抗體篩查呈陽性反響的樣品送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室或艾滋病檢測確證實驗室。〔3〕定期匯總艾滋病檢測資料，并上報當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室或艾滋病檢測確證實驗室。每月填寫?HIV抗體檢測數(shù)及陽性人數(shù)統(tǒng)計報表?〔?全國艾滋病檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?附件6〕，并于每月10日前完成網(wǎng)絡(luò)直報，為開展網(wǎng)絡(luò)直報的單位，由縣級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)搜集信息后統(tǒng)一上報。〔4〕對自愿咨詢檢測工作提供技術(shù)支持。3、檢測技術(shù)及程序應(yīng)符合?全國艾滋病檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?的要求。第七十一頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測HIV抗體檢測分為篩查試驗〔包括初篩和復(fù)檢〕和確證試驗篩查試驗常用方法：快速檢測〔RT〕酶聯(lián)免疫吸附實驗〔ELISA，第三代或第四代試劑〕

第七十二頁，共120頁。艾滋病實驗室檢測篩查結(jié)果：陰性——出具“HIV抗體陰性〞報告陽性——填寫“HIV抗體篩查陽性送檢單〞，按照有關(guān)要求上送樣品至市級篩查中心實驗室或確證實驗室，必要時可出具“HIV抗體待復(fù)查〞報告第七十三頁，共120頁。艾滋病檢測一般工作流程——快速檢測〔RT〕一般工作流程——快速檢測〔RT〕第七十四頁，共120頁。艾滋病檢測一般工作流程——酶聯(lián)免疫吸附實驗〔ELISA〕第七十五頁，共120頁。孕產(chǎn)婦艾滋病抗體檢測及效勞流程〔舊〕第七十六頁，共120頁。孕期艾滋病檢測及效勞流程第七十七頁，共120頁。產(chǎn)時艾滋病抗體檢測及效勞流程〔舊〕

〔適用于孕期未承受HIV檢測的產(chǎn)婦〕第七十八頁，共120頁。

產(chǎn)時艾滋病檢測及效勞流程

〔適用于孕期未承受艾滋病檢測的產(chǎn)婦〕

第七十九頁，共120頁。艾滋病檢測樣品樣品運送流程第八十頁，共120頁。山西省艾滋病確證/篩查中心實驗室11個各市級CDC開展艾滋病確證檢測工作的實驗室6個省CDC、太原市、大同市、晉城市、運城市、臨汾市開展CD4檢測的實驗室9個省CDC、太原市、運城市、臨汾市、長治市、大同市、朔州市、晉中市、晉城市開展病毒載量檢測的實驗室1個〔省CDC〕。第八十一頁，共120頁。梅毒實驗室檢測第八十二頁，共120頁。梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、全身的性傳播疾病，可分為后天獲得性和胎傳梅毒。獲得性又分為早期和晚期梅毒。早期梅毒病期在2年以內(nèi)，包括一期、二期和早期埋伏梅毒。晚期梅毒病期在2年以上，包括晚期良性梅毒、心血管梅毒、神經(jīng)梅毒和晚期埋伏梅毒。胎傳梅毒又分為早期〔出生后2年內(nèi)發(fā)病〕和晚期梅毒〔出生后2年后發(fā)病〕第八十三頁，共120頁。梅毒的臨床病程埋伏期：2～4周平均為3周一期梅毒：硬下疳出現(xiàn)持續(xù)3～8周可自行消失二期梅毒：損害持續(xù)3～12周可自行消失以后又可反復(fù)發(fā)作持續(xù)2年三期梅毒：病程大于2年可有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)或心血管系統(tǒng)的損害第八十四頁，共120頁。梅毒發(fā)病的自然病程早期梅毒〔2年內(nèi)〕

9~90天6周~6個月一期梅毒二期梅毒早期埋伏梅毒硬下疳皮疹無病癥扁平濕疣梅毒性脫發(fā)系統(tǒng)性表現(xiàn)發(fā)熱全身不適淺表淋巴結(jié)腫大關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)疼痛虹膜炎腦膜炎

晚期梅毒〔2年后〕3~20年晚期埋伏梅毒三期梅毒無病癥神經(jīng)梅毒心血管梅毒臟器梅毒皮膚粘膜梅毒第八十五頁，共120頁。梅毒實驗室檢測暗視野顯微鏡檢查：損害部位或淋巴結(jié)穿刺液見梅毒螺旋體非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗〔RPR、USR、VDRL、TRUST〕：陽性如感染缺乏2－3周可陰性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(TPPA、TPHA、FTA-ABS、TP-ELISA、TP-WB)：陽性第八十六頁，共120頁。梅毒實驗室檢測腦脊液檢查:正常時WBC計數(shù)<3×106/L,蛋白量<0.1-0.4g/L,異常時WBC計數(shù)≧10×106/L,蛋白量＞1-2g/L,且無其它原因引起該變化。VDRL或FTA-ABS試驗陽性組織病理檢查：有三期梅毒的組織病理變化第八十七頁，共120頁。梅毒實驗室檢測病原學(xué)直接檢查–暗示野顯微鏡檢查和免疫熒光檢測：適用于早期梅毒的硬下疳和扁平濕疣期原理利用暗視野顯微鏡和熒光方法直接觀察梅毒螺旋體的形態(tài)優(yōu)點容易出結(jié)果時間短敏感性到達(dá)80%缺點需要受過專門培訓(xùn)并有豐富經(jīng)歷的實驗人員對標(biāo)本采集要求高需要在沒有開場治療之前檢測第八十八頁，共120頁。梅毒實驗室檢測暗視野顯微鏡免疫熒光第八十九頁，共120頁。梅毒實驗室檢測非梅毒螺旋體抗原血清試驗是用心磷脂作為抗原，檢測血清中抗心磷脂抗體，本實驗敏感性高而特異性較低。性病研究實驗室試驗〔VDRL〕快速血漿反響素試驗(RPR)不加熱血清反響素玻片試驗(USR)甲苯胺紅不加熱血清試驗〔TRUST〕第九十頁，共120頁。梅毒實驗室檢測TRUST實驗檢測規(guī)程〔非特異性抗體〕：一、原理：采用類脂質(zhì)抗原重懸于含有特制的甲苯胺紅溶液中制成，類脂質(zhì)抗原能與患者血清或血漿中的反響素形成凝集反響，與甲苯胺紅共同形成肉眼可見的凝集顆粒。二、操作步驟：㈠定性試驗：①分別汲取50ul梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中。②取待檢血清或血漿50ul〔不需滅活〕置于紙卡的另一圓圈中。③用專用滴管及針頭垂直分別滴加TRUST試劑1滴于上述血清中。④按每分鐘100轉(zhuǎn)搖動8分鐘，立即于光線充足處肉眼斷定結(jié)果，三分鐘內(nèi)完成㈡定量試驗：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，然后按上述定性方法進(jìn)展試驗，以呈現(xiàn)明顯凝集反響的最高稀釋度作為該血清的凝集效價。三、結(jié)果判斷：①陽性反響〔+++～++++〕：可見中等或較大的紅色凝聚物。②弱陽性反響〔+～++〕：可見較小的紅色凝聚物。③陰性反響〔-〕：可見均勻的抗原顆粒而無凝聚物。四、本卷須知：①本試驗在23～29℃條件下進(jìn)展。②TRUST試劑使用前應(yīng)充分搖勻。③本試驗系非特異性反響，需結(jié)合臨床進(jìn)展綜合分析，必要時需作梅毒螺旋體抗體特異性試驗。第九十一頁，共120頁。第九十二頁，共120頁。梅毒螺旋體抗原血清試驗： 熒光梅毒螺旋抗體吸收試驗〔FTA-ABS〕梅毒螺旋體血凝試驗〔TPHA血、TPPA顆粒〕酶聯(lián)免疫吸附試驗〔TP-ELISA〕梅毒螺旋體抗體蛋白免疫印跡實驗〔TP-WB〕梅毒實驗室檢測第九十三頁，共120頁。實驗室檢測方法的敏感性和特異性比較 敏感性(%) 特異性(%) 一期 二期 埋伏 三期VDRL 78 100 95 71 98RPR 86 100 98 73 98TPHA 76 100 97 94 99FTA-ABS84 100 100 96 97第九十四頁，共120頁。梅毒實驗室檢測的意義NTP(TRUSTRPR…)TP(TPPAELISA…)意義——排除感染梅毒或極早期梅毒（潛伏期尚無任何抗體產(chǎn)生），AIDS合并感染梅毒+—假陽性—+梅毒既往感染,或早期梅毒++現(xiàn)癥梅毒或治愈的晚期梅毒，既往感染（梅毒血清固定）第九十五頁，共120頁。影響梅毒血清學(xué)實驗假陽性的常見原因非梅毒螺旋體血清學(xué)實驗梅毒螺旋體血清學(xué)實驗感染因素細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、軟下疳病毒性肝炎傳染性單核細(xì)胞增多癥結(jié)核、麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、水痘支原體或肺炎雙球菌肺炎其它螺旋體感染，如雅司、品他傳染性單核細(xì)胞增多癥麻風(fēng)瘧疾萊姆病非感染因素妊娠、使用毒品、惡性腫瘤、自身免疫病、多發(fā)性骨髓瘤、慢性肝臟損害、衰老系統(tǒng)性紅斑狼瘡甲狀腺炎第九十六頁，共120頁。前帶現(xiàn)象第九十七頁，共120頁。梅毒治療的血清學(xué)隨訪梅毒治療的血清學(xué)隨訪〔1〕梅毒經(jīng)充分治療后，應(yīng)隨訪2～3年。第一年每3個月復(fù)查一次，以后每半年復(fù)查一次，包括臨床和血清〔非螺旋體抗原試驗〕學(xué)檢查。第九十八頁，共120頁。梅毒治療的血清學(xué)隨訪〔2〕療后6個月內(nèi)血清滴度不下降4倍，應(yīng)視為治療失敗，或再感染，需加倍劑量，重新治療，還應(yīng)考慮是否需要作腦脊液檢查，以觀察神經(jīng)系統(tǒng)有無梅毒感染。第九十九頁，共120頁。梅毒治療的血清學(xué)隨訪〔3〕一期梅毒在1年以內(nèi)，二期梅毒在2年以內(nèi)轉(zhuǎn)陰均屬正常。少數(shù)晚期梅毒可持續(xù)在低滴度上〔隨訪3年以上〕可判為血清固定。神經(jīng)梅毒要隨訪CSF，每半年一次，直至CSF完全轉(zhuǎn)為正常。第一百頁，共120頁。孕產(chǎn)婦梅毒檢測及效勞流程第一百零一頁，共120頁。乙肝實驗室檢測第一百零二頁，共120頁。HBV簡介嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒屬帶包膜的DNA病毒完好的病毒顆粒又稱Dane顆粒，直徑42nm，由包膜和核心雙層構(gòu)造組成外膜為脂蛋白構(gòu)造，主要成分為外表抗原〔HBsAg〕DNA為雙鏈不完全環(huán)形DNA分子，全長3200bp，由長短不一的正負(fù)鏈組成。第一百零三頁，共120頁。Dane顆粒球形,雙層衣殼。外衣殼=包膜(脂質(zhì)雙層+蛋白質(zhì))HBsAg等內(nèi)衣殼：HBcAg、HBeAg內(nèi)部：

DNA---環(huán)狀雙鏈DNA多聚酶HBV具有感染性的完好的HBV顆粒第一百零四頁，共120頁。乙肝病毒Dane顆粒構(gòu)造形式圖DNA多聚酶雙股DNA核心HBcAgHBeAg內(nèi)衣殼外衣殼脂質(zhì)雙層外殼蛋白PreS1PreS2HBsAg有逆轉(zhuǎn)錄酶活性有合成DNA功能第一百零五頁，共120頁。抵抗力抵抗力強(qiáng)于HAV；對低溫枯燥紫外線耐受；不被70％乙醇滅活；高壓滅菌、環(huán)氧乙烷、100℃10min可滅活；0.5%過氧乙酸、5%次氯酸鈉滅活病毒，但不能消除HBsAg的抗原性。第一百零六頁，共120頁。傳播方式傳染源：急性、慢性患者或無病癥HBsAg攜帶者傳播途徑：體液-血液傳播-性接觸傳播-母嬰傳播第一百零七頁，共120頁。TransmissionHepatitisBisalsospreadbypercutaneousormucosalexposuretoinfectedbloodandvariousbodyfluids,aswellasthroughsaliva,menstrual,vaginal,andseminalfluids……Infectioninadulthoodleadstochronichepatitisinlessthan5%ofcases.……Inaddition,infectioncanoccurduringmedical,surgicalanddentalprocedures,tattooing,orthroughtheuseofrazorsandsimilarobjectsthatarecontaminatedwithinfectedblood.第一百零八頁，共120頁。大部分人在急性期無病癥Mostpeopledonotexperienceanysymptomsduringtheacuteinfectionphase.一些人會有持續(xù)數(shù)周的的病癥，包括黃疸、深色尿〔黑尿〕、極度疲勞、惡心、嘔吐及腹痛，一小部分急性肝炎這可出現(xiàn)肝功能衰竭，可導(dǎo)致死亡。However,somepeoplehaveacuteillnesswithsymptomsthatlastseveralweeks,includingyellowingoftheskinandeyes(jaundice),darkurine,extremefatigue,nausea,vomitingandabdominalpain.Asmallsubsetofpersonswithacutehepatitiscandevelopacuteliverfailurewhichcanleadtodeath.臨床病癥第一百零九頁，共120頁。一部分人可轉(zhuǎn)成慢性感染，進(jìn)展為肝硬化或肝癌Insomepeople,thehepatitisBviruscanalsocauseachronicliverinfectionthatcanlaterdevelopintocirrhosisoftheliverorlivercancer.>90%安康成人感染乙肝病毒后一年內(nèi)會自愈Morethan90%ofhealthyadultswhoareinfectedwiththehepatitisBviruswillrecovernaturallyfromtheviruswithinthefirstyear.臨床病癥第一百一十頁，共120頁。慢性轉(zhuǎn)變主要取決于年齡，不到6歲的孩子成為感染乙肝病毒感染者的可能性最大：80–90%一歲內(nèi)感染的嬰兒進(jìn)展為慢性感染30–50%六歲以下的兒童近進(jìn)展為慢性感染Thelikelihoodthatinfectionwiththevirusbecomeschronicdependsupontheageatwhichapersonbecomesinfected.Childrenlessthan6yearsofagewhobecomeinfectedwiththehepatitisBvirusarethemostlikelytodevelopchronicinfections:80–90%ofinfantsinfectedduringthefirstyearoflifedevelopchronicinfections;30–50%ofchildreninfectedbe