腸道病原菌的分離與鑒定二

1、腸道病原菌的分離與鑒定二,腸道病原菌的分離鑒定（2） 肥達氏反應(yīng)結(jié)果觀察 細菌的生長狀態(tài)及菌落觀察 細菌的藥敏試驗 實驗動物感染試驗,肥達氏反應(yīng)結(jié)果觀察,試驗管自第1管看起，如有凝集(陽性反應(yīng))時則于管底呈圓片狀、邊緣不整齊的凝集物，輕輕搖動，可見凝塊或顆粒浮起，上清透明或有不同程度的混濁。其凝集的強弱可用“+”號表示如下： “+” 細菌全部凝集，液體澄清，有大片狀，邊緣不整齊的凝集塊。 “+” 細菌絕大部分凝集，液體有輕度混濁，凝集塊較小些。 “+” 細菌部分沉淀于管底，液體半澄清，凝集塊呈顆粒狀。 “+” 細菌僅少量凝集，液體混濁。 “-” 不凝集，液體混濁與對照管相似。 記錄結(jié)果并判定凝

2、集效價。通常以能產(chǎn)生明顯凝集(+)的血清最大稀釋倍數(shù)做為該血清的凝集效價,結(jié)果分析,首先應(yīng)了解當(dāng)?shù)卣Ｈ诵r，一般凝集價超過正常凝集價才有診斷意義。 真正的傷寒病人O凝集素出現(xiàn)常較H凝集素為早，存在于血清內(nèi)時間較短；H凝集素產(chǎn)生較慢但效價較高，存在時間較長，可達數(shù)年。 過去曾接種過傷寒菌苗或患過傷寒病，近期又感染流感或布魯氏菌病時，可產(chǎn)生高效價的H凝集素及較低的O凝集素，此種反應(yīng)稱為非特異回憶反應(yīng)，其他如結(jié)核病、敗血癥、斑疹傷寒、肝炎等也可出現(xiàn)類似反應(yīng)。 確診為傷寒的患者中，約有10肥達氏反應(yīng)始終為陰性，故陰性結(jié)果不能完全排除傷寒的診斷。 采血時間不同，肥達氏反應(yīng)的陽性率也不同，發(fā)病第一周50

3、，第二周80，第四周90以上。恢復(fù)期凝集價最高，以后逐漸下降。一般以雙份血清(急性期和恢復(fù)期)對比，凝集價有明顯上升者作為新近感染的指征,菌落觀察,大小 大菌落(直徑在5mm以上) 中等大菌落(直徑在3mm左右) 小菌落(直徑在1mm左右) 形狀：點狀、圓形、卵圓形、葉狀等。 邊緣：整齊、鋸齒狀、毛發(fā)狀等。 表面：光滑、皺紋、濕潤、干燥等。 隆起度：凸起、扁平、中心凹陷等。 結(jié)構(gòu)：均質(zhì)性、顆粒狀等。 色調(diào)：無色、白色、黃色、褐色等。 透明度：透明、半透明、不透明等,細菌的藥物敏感性試驗,原理：將干燥的浸有一定濃度抗菌藥物的濾紙片放在已接種一定量某種細菌的瓊脂平板上。經(jīng)培養(yǎng)后，可在紙片周圍出現(xiàn)無

4、細菌生長區(qū)，稱抑菌環(huán)。測量抑菌環(huán)的大小，即可判定該細菌對某種藥物的敏感程度。目的是使學(xué)生學(xué)會此實驗方法并了解其在臨床治療上的意義。 材料 普通瓊脂平板培養(yǎng)基 金黃色葡萄球菌分離培養(yǎng)物 大腸桿菌分離培養(yǎng)物 藥物紙片 酒精 鑷子,方法 1按無菌操作法用接種環(huán)從分離培養(yǎng)平板上已選好的菌落沾取細菌，反復(fù)交叉密涂于平板培養(yǎng)基上，以便生長出均勻的菌苔(注意不要劃破培養(yǎng)基)。 2用沾酒精點燃滅菌的小鑷子取藥物紙片按下圖貼于平板培養(yǎng)基上，并輕輕按壓貼緊。 3做好標(biāo)記，放37溫箱培養(yǎng)過夜(不超過17h,結(jié)果觀察,觀察紙片周圍有無抑菌環(huán)，并測其直徑大小。最終判斷細菌對每種抗菌藥物的敏感程度，記錄和報告結(jié)果。 判定

5、標(biāo)準(zhǔn)：實驗條件不同判定標(biāo)準(zhǔn)可有所不同。一般抑菌環(huán)直徑在15mm以上者為高度敏感，1015mm為中度敏感，10mm以下為低度敏感，無抑菌環(huán)者為耐藥,肺炎球菌對小白鼠的傳染試驗,實驗動物的接種 1首先將兩種菌懸液做涂片，革蘭色染色和鏡檢，以便與后述死亡動物尸體的細菌學(xué)檢查結(jié)果對比。 2用消毒好的注射器，按無菌操作法抽取菌懸液后，再用無菌鑷子夾一滅菌棉花紙包，將針頭刺入棉花紙包內(nèi)，排出注射器內(nèi)的氣體，然后將注射器平置于試管架上。 3固定小白鼠：用右手輕拖鼠尾，使其爬行于金屬網(wǎng)蓋上，再突然用左手拇食兩指抓緊小白鼠頸項部及兩耳，將鼠體搜入手掌中，再用左手無名指和手掌夾住小白鼠尾根，以無名指和小指夾住其左腿,4以無菌鑷子取碘酒棉球，消毒小白鼠左下腹部，用鑷子取下注射器針頭上的棉花紙包，放入消毒罐中。左手傾斜，使小白鼠頭部向下，然后將注射器針頭自小白鼠左