藥物含量測(cè)定方法與驗(yàn)證

1、第四章 藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證,定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn) 樣品的前處理方法 藥品分析方法的驗(yàn)證,第一節(jié) 定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn) 定量分析方法的計(jì)算 藥典對(duì)藥物的含量限度的表示方法 原料藥：多以%表示，有二種情況 按原料藥本身形式計(jì)算其含量 例 ：阿司匹林（P.11）按干燥品計(jì)不得少于99.5% 對(duì)氨基水楊酸鈉按干燥品計(jì)不得少于99.0% 凡未規(guī)定上限的，藥典凡例中規(guī)定，其含量上限不得超過(guò)101.0,由于藥物組成不定，需以另一種穩(wěn)定形式計(jì)算含量 例 ：氫氧化鋁 Al(OH)3以含三氧化二鋁（Al2O3）計(jì)，不得少于48 .0% 制劑：制劑的含量限度表示方法有三種情況 按標(biāo)示量計(jì)算 標(biāo)示量即規(guī)

2、格量，生產(chǎn)廠家的處方量。它是以標(biāo)示量為100%，將測(cè)得含量與之相比較，求出相對(duì)于標(biāo)示量的百分含量。 例：維生素B1注射液含維生素B1應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105.0% 干酵母片含蛋白質(zhì)不得少于標(biāo)示量的40.0,直接用%含量規(guī)定范圍（主藥含量微） 例：復(fù)方碘溶液 含 I 應(yīng)為4 .5% 5 .5% 含 KI 應(yīng)為9 .5% 10 .5% 復(fù)方氯化鈉注射液 含總Cl-量 0.52%0.58% 含KCl量 0.028%0.032% 含CaCl22H2O 0.031%0.035,以重量規(guī)定含量范圍（多為復(fù)方制劑） 例：復(fù)方炔諾酮片 炔諾酮 0.540.66mg /片 炔雌醇 31.538.5g /片

3、復(fù)方磺胺甲噁唑片 SMZ 0.3600.440 g /片 TMP 72.088.0mg /片,2021/2/3,6,一、容量分析法滴定法 aA+bB cC+dD （ A被測(cè)藥物； B滴定液） （一）、滴定度的概念 T-與1ml規(guī)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)物的mg數(shù)。 （二）、滴定度的計(jì)算 T=MA mB a/b （mg/ml,三）含量計(jì)算 1、直接滴定法 原料藥以%表示的制劑 樣品% = VFT/W100% F = N實(shí) / N理 2、間接滴定法 （1）、剩余滴定法中須做空白 樣品% =（V空白 V測(cè) )樣 FT/W100% （2）、生成物滴定法 aA+bB=cC（生成物）+dD ，cC+e

4、E=fF+gG 找到A與E的關(guān)系，計(jì)算滴定度（p.146）（自學(xué),相當(dāng)于標(biāo)示量%的計(jì)算公式 片劑： VFT/W平均片重/標(biāo)示量100% 針劑： VFT/W/標(biāo)示量（g/ml） 100% 以重量/片計(jì)的計(jì)算公式 VFT/W平均片重=重量/片,司可巴比妥鈉膠囊含量測(cè)定：精密稱(chēng)取內(nèi)容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加鹽酸5 mL，立即密塞并振搖1分鐘，暗處?kù)o置15分鐘后，加碘化鉀試液10 mL，立即密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L，F(xiàn)=0.992）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用

5、空白試驗(yàn)校正。已知：樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白試驗(yàn)消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的司可巴比妥鈉。計(jì)算本品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量（規(guī)格0.1g，20粒膠囊內(nèi)容物重2.7506 g）？ (p.90生成物滴定法,2021/2/3,10,司可巴比妥鈉的滴定度計(jì)算,1摩爾司可巴比妥鈉與1摩爾溴相當(dāng)T=MAmBa/b260.20.051/113.01mg/ml,25.22 17.05) 13.010.992 2.7506,0.1385 0.1 1000 20,100,精密量取維生素C注射液4mL（相當(dāng)于維生素C 0.2

6、g），加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4mL與淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)色，并持續(xù)30秒鐘不退。已知：注射液規(guī)格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，維生素C的分子量為176.12，問(wèn)： （1）丙酮和稀醋酸分別起什么作用？ （2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于多少mg的維生素C？ （3）求本品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量,2021/2/3,13,維生素C,1摩爾維生素C與1摩爾碘相當(dāng) T0.05176.121/1=8.806mg/ml 標(biāo)示量%=TFV/W標(biāo)示量100% 8.80622

7、.451.005 = 410000.05 100% =99.34,二、光譜分析 （一）、UV法 1、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法（一點(diǎn)法） A樣/A標(biāo) = C樣/C標(biāo)， 樣品%= A樣/A標(biāo) C標(biāo)F/W100% F=稀釋倍數(shù) W=取樣量 2、百分吸收系數(shù)法（A= E1%cmCL） C% = A / E1%cm 樣品% = A / E1%cm F/W F = 稀釋倍數(shù)和濃度換算因子 W = 取樣量,3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法（y=bxa） 由標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程求出C樣，再根據(jù)F，W求出樣品%。 4、計(jì)算分光光度法 雙波長(zhǎng)法，差示法均可應(yīng)用比爾定律的公式，以A代替吸收度A,差示分光光度法 原理：利用被測(cè)物在兩種不同溶液中吸收光

8、譜發(fā)生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測(cè)定兩種溶液的吸收度差值（A值），根據(jù)A與被測(cè)物濃度C的線性關(guān)系進(jìn)行定量測(cè)定。 方法： 一定量+酸 一定體積 （測(cè)定） A測(cè) 同樣量+堿 同樣體積 （參比） A參 A測(cè)A參=A樣 干擾物在兩種溶液中吸收光譜無(wú)變化，即 A雜=0， A樣只與樣品濃度C呈線性關(guān)系,供試品,220 240 260 280nm,A,pH10溶液， 240nm pH13溶液，255nm 酸性溶液，無(wú)max,A樣=A pH13- A pH10,A標(biāo)=A pH13- A pH10,C樣=A樣/A標(biāo)C標(biāo),特點(diǎn)：具備一般分光光度法簡(jiǎn)易、快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點(diǎn);無(wú)需事先分

9、離，又能消除干擾;提供一個(gè)近似理想的參比溶液,A,稱(chēng)取己酸孕酮0.0105g,加無(wú)水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,置1cm吸收池內(nèi)進(jìn)行測(cè)定, 根據(jù)下列數(shù)據(jù),求出按干燥品計(jì)算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393,0.390 10,393 0.0105,100% = 含量,復(fù)方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量測(cè)定： 精密稱(chēng)取本品（每片含SMZ為0.4g）10片，總重量為5.5028g。精密稱(chēng)取SMZ對(duì)照品0.0501g、片粉0.0756g，按雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定SMZ含量。在257nm波

10、長(zhǎng)處測(cè)得：對(duì)照品溶液的吸收度A對(duì)為0.330，供試溶液的吸收度A樣為0.372。在304nm波長(zhǎng)處測(cè)得：對(duì)照品溶液的吸收度A對(duì)為0.009，供試溶液的吸收度A樣為0.021。計(jì)算SMZ的含量相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量,257nm,304nm,對(duì)照品,供試品,0.330,0.372,0.009,0.021,0.372- 0.021 0.0501 5.5028 0.330- 0.009 0.0756 10 0.4,100,99.69,對(duì)乙酰氨基酚片劑溶出度測(cè)定： 取標(biāo)示量為0.3g的本品6片，依法在1000mL溶劑中測(cè)定溶出度。經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液5mL濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液1mL，加0.04%氫氧化鈉

11、溶液稀釋至50mL，搖勻，在257nm波長(zhǎng)處測(cè)得每片的吸收度分別為0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系數(shù)為715計(jì)算出各片的溶出量。限度為標(biāo)示量的80%。并判斷其溶出度是否符合規(guī)定,0.345 50 1000,715 0.3,80.4,片1,片2,三、色譜分析（HPLC和GC） 內(nèi)標(biāo)法： F = A 內(nèi)/ A 標(biāo)C標(biāo)/C內(nèi) 樣品% = A樣/A內(nèi)FC內(nèi)稀釋倍數(shù)/W100% 或C樣= R樣/內(nèi)/ R標(biāo)/內(nèi) C標(biāo) （R代表峰面積比值） 外標(biāo)法（同光譜法）: 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法(一點(diǎn)法,系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 柱效（理論板數(shù)） n=5.54(tR/Wh/

12、2)2 分離度 R= 拖尾因子 T= 重復(fù)性 取對(duì)照品或樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD應(yīng)小于2.0,2(tR2-tR1,W1+W2,W0.05h,2d1,R 1.5,T=0.951.05,T=W0.05h/2d1,d1,h,W0.05h,0.05h,HPLC測(cè)定復(fù)方SMZ片中SMZ含量，以SG為內(nèi)標(biāo)，測(cè)得 標(biāo)準(zhǔn)液中：SMZ峰高14.90cm，濃度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，濃度4.0mg/mL。 樣品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，濃度4.0mg/mL。 求樣品液中SMZ的濃度為多少？（進(jìn)樣量均為5l,13.8 8.0,14.9 4.0

13、,F,樣品（mg/mL）,11.92 4.0,16.2,1.852,F =5.45,用HPLC法測(cè)得某藥保留時(shí)間為12.54min，半高峰寬3.0mm（紙速5mm/min），計(jì)算柱效？ N=5.54（12.54/3.0）2 ？ N=5.5412.54/（3.0/5）2 ,N=2420,丙酸睪酮含量測(cè)定采用高效液相法：取本品對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含1mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標(biāo)溶液（1.6mg/mL苯丙酸諾龍甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10L注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取本品適量，同法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。已知對(duì)照品溶液為1.

14、052mg/mL，樣品溶液為1.032mg/mL，測(cè)得對(duì)照液中丙酸睪酮和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的峰面積分別為54678和61258，樣品液中丙酸睪酮和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的峰面積分別為52213和61228，計(jì)算丙酸睪酮的含量？ 52213 / 61228 54678 / 61258,1.052/1.032=,97.4,第二節(jié) 樣品分析的前處理方法 一、概述 含金屬藥物有：富馬酸亞鐵、葡萄糖酸銻鈉、枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅、酒石酸銻鉀等。 含鹵素藥物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞鈉等。 根據(jù)所含金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度，分析前采用不同方法進(jìn)行預(yù)處理,不經(jīng)有機(jī)破壞處理的分析方法 直接測(cè)定法 金屬原子不與碳直接相

15、連的或C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物，在水溶液中電離，可選用適當(dāng)方法直接測(cè)定。例： 富馬酸亞鐵在熱的稀礦酸中溶解，釋放出亞鐵離子，用硫酸鈰滴定液直接滴定,葡萄糖酸銻鈉為組成不定的五價(jià)銻化合物，采用間接碘量法測(cè)定銻的含量，在酸性條件下，葡萄糖酸銻鈉與碘化鉀試液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。 枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅EDTA滴定法測(cè)定含量,經(jīng)水解后測(cè)定法 本法適合于鹵素與脂肪碳鏈相連者，經(jīng)加熱回流使其水解，有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)的鹵素離子，然后用適當(dāng)方法進(jìn)行測(cè)定。例： 三氯叔丁醇的含量測(cè)定 CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH 3NaCl 然后用銀量法測(cè)定

16、氯化鈉含量,回流,注意 沉淀轉(zhuǎn)化 （加有機(jī)溶劑） Fe3+的水解 （酸性中滴定,硬脂酸鎂與定量硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。 經(jīng)氧化還原后測(cè)定法 堿性還原后測(cè)定當(dāng)鹵素結(jié)合于芳環(huán)上時(shí)，因結(jié)合較牢固，需在堿性條件下加還原劑回流，使X-C鍵斷裂，形成無(wú)機(jī)鹵化物后測(cè)定。例泛影酸的含量測(cè)定,NaI AgNO3 AgI 曙紅鈉指示劑,酸性還原后測(cè)定 例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性條件下用鋅粉還原，硝酸銀滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯為指示劑，終點(diǎn)時(shí)沉淀由黃色變?yōu)榫G色。 USP，BP，ChP均采用氫氧化鈉堿性條件下用鋅粉還原，然后用硝酸銀滴定液滴定，但指示終點(diǎn)

17、方法不同， ChP采用吸附指示劑曙紅鈉， USP采用吸附指示劑四溴酚酞乙酯，BP采用電位法指示終點(diǎn),經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 濕法破壞 HNO3-HClO4破壞力強(qiáng)，反應(yīng)激烈，注意勿將內(nèi)容物蒸干，以免爆炸。適用于生物樣品的破壞，所得無(wú)機(jī)金屬離子為高價(jià)態(tài)。對(duì)含氮雜環(huán)藥物不適宜。 HNO3- H2SO4 適用于大多數(shù)有機(jī)藥物的破壞，所得無(wú)機(jī)金屬離子為高價(jià)態(tài)。對(duì)堿土金屬藥物不適用，可改用HNO3-HClO4 法,H2SO4-SO42-本法所得金屬離子為低價(jià)態(tài)，常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞。若用本法破壞低碳藥物時(shí)，宜添加適量淀粉等多碳化合物，以保證破壞過(guò)程中將金屬離子轉(zhuǎn)變?yōu)榈蛢r(jià)態(tài)。 其他濕法破壞 HNO3

18、- H2SO4 -HClO4 H2SO4 H2O2 H2SO4 KMnO4 濕法破壞的儀器一般為凱氏燒瓶,干法破壞 將有機(jī)物置坩堝中，加Ca(OH)2或無(wú)水 Na2CO3或輕質(zhì)氧化鎂，灼燒灰化，先小火加熱，然后高溫灰化。 注意：溫度應(yīng)控制在420 以下。本法所得灰分往往不易溶解，但不能丟棄。 本法適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物（如含氮雜環(huán)），以及不能用硫酸破壞的有機(jī)藥物，不適用含揮發(fā)性金屬的有機(jī)藥物,氧瓶燃燒法 （Oxygen flask combustion method） 儀器裝置,稱(chēng)樣 燃燒分解操作（通O2 1-2 min，燃燒） 吸收液 水-NaOH（含碘、氯藥物） 例鹽酸胺碘酮、碘苯酯、甲狀腺粉 水- NaOH -H2O2（含溴、含硫藥物） 例磺溴酞鈉 水（含氟藥物） 硝酸溶液（含硒藥物,注意： 防爆，燃燒瓶應(yīng)洗滌干凈； 氧氣要充足，燃燒應(yīng)完全； 測(cè)定含氟藥物應(yīng)用石英燃燒瓶。 燃燒分解后的測(cè)定方法 滴定法 銀量法含氯、溴藥物（例磺溴酞鈉,碘量法含碘藥物（例鹽酸胺碘酮,分光光度法含氟藥物 例氟尿嘧啶含氟量測(cè)定：取15mg樣品，經(jīng)氧瓶燃燒破壞后加水稀釋至100ml。要求含氟量應(yīng)為13.1% -14.6,氟尿嘧啶M=130.08 氟的原子量為18.9984 理論含氟量為： 18.9984/ 130.08*100%=14