細(xì)胞遺傳學(xué)檢測在白血病中的應(yīng)用

1、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測在白血病中的應(yīng)用遺傳學(xué)應(yīng)用論文（8篇核心期刊范文）之第八篇關(guān)鍵詞：慢性粒細(xì)胞白血病,遺傳學(xué)應(yīng)用,BCR/ABL融合基因,熒光原位雜交慢性粒細(xì)胞白血病(chronic granulocytic leukemia,CML)是一種起源于造血干細(xì)胞的獲得性克隆性疾病。1960年首次發(fā)現(xiàn)Ph染色體(Philadelphia chromosome),后經(jīng)顯帶技術(shù)證實(shí)是9和22號(hào)染色體的相互易位t(9;22)(q34;q11)。目前,Ph染色體或BCR/ABL融合基因是CML診斷的特征性標(biāo)志,骨髓染色體R顯帶核型分析和熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence in situ hybridiz

2、ation,FISH)是細(xì)胞遺傳學(xué)檢測的兩種主要方法1。我們同時(shí)利用這兩種方法檢測初診和急變期CML患者的染色體核型和BCR/ABL融合基因,探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。1 資料與方法1.1 研究對(duì)象60例CML為2007年1月2013年12月我院門診及住院患者,其中男性37例,女性23例,年齡2071歲,平均年齡47歲。其中初診慢性期(CP)44例,急變期(BC)16例。CML的診斷和分期參照血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)。1.2 研究方法1.2.1 細(xì)胞遺傳學(xué)分析(R顯帶技術(shù))取患者骨髓細(xì)胞,采用直接法和短期培養(yǎng)法制備染色體,R顯帶技術(shù)進(jìn)行染色體核型分析。每例至少分析20個(gè)中期分裂相,核型異常按人類細(xì)胞遺傳

3、學(xué)國際命名體制ISCN(2005)加以描述。剩余細(xì)胞懸液保存于-20備用。1.2.2 熒光原位雜交(FISH技術(shù))采用熒光素標(biāo)記的位點(diǎn)特異性探針GLP BCR/GLP ABL(北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司)。實(shí)驗(yàn)方法按說明書操作。1.2.3 圖像掃描用Olympus BX51熒光顯微鏡(日本Olympus公司)在UV/Rhodamine/FITC三色濾光片的激發(fā)下觀察間期細(xì)胞的熒光雜交信號(hào),每例分析300個(gè)細(xì)胞左右,并用染色體自動(dòng)分析系統(tǒng)Imstar FISH 3.0進(jìn)行圖像采集和保存。1.2.4 圖像分析采用BCR/ABL融合基因探針:BCR基因位于22號(hào)染色體長臂1區(qū)1帶斷裂點(diǎn)集中區(qū),由綠色

4、熒光素標(biāo)記;ABL基因位于9號(hào)染色體長臂3區(qū)4帶,由紅色熒光素標(biāo)記。正常細(xì)胞為兩紅兩綠,異常細(xì)胞為一紅一綠一黃一小紅或一紅一綠一黃。5%以上的細(xì)胞出現(xiàn)異常的雜交信號(hào)方被判斷為陽性結(jié)果。2 結(jié)果2.1 染色體核型分析結(jié)果60例CML患者中,染色體R顯帶核型分析57例(占95%)患者Ph(+),3例Ph(-)。其中44例初診的患者中,2例染色體為Ph(-)。16例急變期的患者中,1例染色體為Ph(-)。其中8例急變期患者核型分析有額外的染色體變化(表1),包括染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的異常,分別為+7,+8,t(4;22),t(1;3),t(4;11)及雙Ph染色體等;其中染色體核型為i(17q10)的患

5、者Ph(-)。表1 8例伴有額外染色體異常的CML患者2.2 熒光原位雜交結(jié)果(FISH技術(shù))60例CML患者中,FISH技術(shù)檢測58例患者BCR/ABL融合基因(+),2例BCR/ABL融合基因(-)。其中44例初診患者中,1例BCR/ABL融合基因(-)。16例急變期的患者中,1例BCR/ABL融合基因(-)。57例患者為Ph(+)/BCR/ABL(+),1例初診患者為Ph(-)/BCR/ABL(+),1例初診患者為Ph(-)/BCR/ABL(-),1例急變期患者為Ph(-)/BCR/ABL(-)。3 討論慢性粒細(xì)胞白血病(CML)是一種造血干細(xì)胞高度異質(zhì)性疾病,Ph(+)和/或BCR/A

6、BL(+)是診斷CML客觀準(zhǔn)確的依據(jù),也是臨床伊馬替尼治療的重要依據(jù)2。資料顯示,90%95%的CML患者可檢出Ph染色體3,4;急變期除Ph染色體存在外,70%80%出現(xiàn)額外染色體異常,預(yù)示疾病向加速及急變期進(jìn)展,目前額外染色體異常的出現(xiàn)被認(rèn)為是預(yù)示CML疾病進(jìn)展的獨(dú)立指標(biāo)5,6。本文60例CML患者中,95%CML患者染色體呈Ph(+);在44例慢性期CML患者中,未發(fā)現(xiàn)有額外染色體異常;16例急變期CML患者中,8例(占50%)CML患者核型發(fā)生額外染色體異常,其中包括數(shù)目與結(jié)構(gòu)的異常,+7,+8,t(4;22),t(1;3),t(4;11)及雙Ph染色體等,有2例均是發(fā)生在4號(hào)染色體的

7、平衡易位。臨床隨訪發(fā)現(xiàn),部分患者檢出額外異常發(fā)生在臨床或血液學(xué)急變之前。因此,CML病程中監(jiān)測R顯帶核型分析可預(yù)測CML病情進(jìn)展。約5%左右的CML患者常規(guī)染色體核型分析檢測不到Ph染色體,經(jīng)FISH檢測或定量PCR檢測BCR/ABL融合基因,發(fā)現(xiàn)可表達(dá)下列兩種類型,Ph(-)/BCR/ABL(+)和Ph(-)/BCR/ABL(-)。前者實(shí)質(zhì)上仍屬Ph(+)慢粒,與典型CML的臨床表現(xiàn)、治療反應(yīng)及生存期相似,而Ph(-)/BCR/ABL(-)的患者則可排除CML診斷7,8。44例初診CML患者中1例為Ph(-)/BCR/ABL(+),染色體核型分析為t(9;10),證實(shí)為變異易位的Ph(+)C

8、ML,可能涉及3條染色體,染色體核型可修正為t(9;22;10)。另一例為Ph(-)/BCR/ABL(-),則考慮為不典型的其他骨髓增殖性疾病。1例Ph(-)/BCR/ABL(-)急變期CML患者,經(jīng)了解臨床病史,為伊馬替尼治療后復(fù)查的CML患者,核型分析發(fā)現(xiàn)有染色體異常i(17q10)。自2002年Andersen等首次報(bào)道伊馬替尼治療CML出現(xiàn)Ph(-)額外染色體異常,國內(nèi)外陸續(xù)有文獻(xiàn)報(bào)道9,10,其中+8,-Y和-7/7q-,20q-最為常見,發(fā)生率約為3%9%。發(fā)生原因和臨床意義尚不清楚,有待進(jìn)一步跟蹤隨訪。綜上研究,染色體核型分析和FISH技術(shù)在CML的診斷中有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值;F

9、ISH技術(shù)在初診CML患者中判斷變異易位和Ph(-)/BCR/ABL(-)患者有重要意義;CML急變期患者染色體核型分析可以提供更多的信息,預(yù)示病情進(jìn)展。參考文獻(xiàn)1江倩,黃曉軍.中國慢性粒細(xì)胞白血病診治現(xiàn)狀和展望J.中華內(nèi)科雜志,2013,52(10):803-805.2中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì).中國慢性髓系白血病診斷與治療指南(2011年版)J.中華血液學(xué)雜志,2011,32(6):426-432.3Chen Y,Peng C,Li D,et al.Molecular an cellular bases of chronic myeloid liukemiaJ.Protein Cell,2010,1(2):124-132.4Kantarjian HM,Cortes J,La Rosee P,et al.Optimizing therapy for patients