水中細菌總數(shù)的測定

1、水中細菌總數(shù)的檢測1. 實驗目的1、學習并掌握水的細菌學檢測方法2、了解水質狀況與細菌數(shù)量在飲用水檢測中的重要性。2. 菌落總數(shù)standard plate-count bacteria水樣在營養(yǎng)瓊脂上、有氧條件下37C培養(yǎng)48 h后，所得1 mL水樣所含菌落的總數(shù)。細菌總數(shù)是評價水質污染程度的主要衛(wèi)生指標，所測定的細菌總數(shù)增多說明水被生活廢棄物污染。由于結果不能說明污染的來源，因此必須結合總大腸菌群數(shù)來判斷污染源和安全程度。3. 培養(yǎng)基與試劑2.1 營養(yǎng)瓊脂成分蛋白胨10 g牛肉膏3 g氯化鈉5 g瓊脂1020 g蒸餾水1000 mL2.2 制法：根據(jù)實際需要量，按照上述配方稱取各成分混合后

2、，加熱溶解，調整pH為7.47.6，分裝于玻璃容器中（如用含有較多雜質的瓊脂，應先過濾。），經103.43 kPa（121C,15 lb）濕熱滅菌20 min，儲存于冷暗處備用。4. 儀器和材料4.1 儀器：高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、水熱恒溫培養(yǎng)箱、電爐、天平、冰箱。4.2 材料：滅菌平皿（直徑9 cm）、滅菌試管、刻度吸管、三角燒瓶、采樣瓶、酒精燈、消毒水、鑷子、試管架等。4.3 放大鏡或菌落計數(shù)器、pH計或精密pH試紙、火柴或打火機。5. 樣品采集5.1 自來水的取樣：先將自來水龍頭用酒精棉擦拭，再用酒精燈火焰滅菌，打開龍頭放水3-5 min，用無菌空三角瓶接取水樣200 ml。5.2

3、純凈水取樣：用消毒酒精棉擦拭純水機出口后，先放走部分水，再用無菌空三角瓶接取水樣200毫升。5.3 地表水的取樣：應取距水面1015 cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存。6. 檢驗步驟6.1 生活飲用水（自來水、純凈水）：以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1 mL充分混勻的水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，傾注約15 ml已融化并冷卻到45C左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗時應做一平行接種，同時另用一個平皿只傾注培養(yǎng)基作為空白對照。待冷卻凝固后

4、，翻轉平皿，使底面向上，置于36C1C條件下連續(xù)培養(yǎng)48 h，進行菌落計數(shù)，即為1 ml水樣中的菌落總數(shù)。6.2 水源水：以無菌操作方法吸取1 ml充分混勻的水樣，注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:10稀釋液。吸取1:10稀釋液1 ml，注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:100稀釋液。按同法依次稀釋成1:1000、1:10000稀釋液備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支刻度吸管。用滅菌吸管吸取1 ml未稀釋的水樣和23個適宜稀釋度的水樣，分別注入滅菌培養(yǎng)皿內，其余操作同6.1 生活飲用水的檢驗步驟。7. 菌落計數(shù)及報告方法7.1 作平皿菌落計數(shù)時，可用眼睛直接觀察，

5、必要時用放大鏡檢查以防遺漏。在記下各平皿的菌落數(shù)后，應求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計算時應用。在求同稀釋度的平均數(shù)時，若其中一個平皿有較大片狀菌落產生時，則不宜采用，而應以無片狀菌落產生的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。7.2 不同稀釋度的選擇及報告方法7.2.1 首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進行計算，若只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中實例1）。7.2.2 若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，則

6、視二者之比值來決定：若其比值小于2，應報告兩者的平均數(shù)（如表1實例2）；若比值大于2，則報告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（如表1實例3）。若等于2亦報告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（見表1實例4）。表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式實例不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（CFU/ml）報告方式（CFU/ml）10-110-210-3113651642016 40016 000或1.610422760295461.637 75038 000或3.810432890271602.227 10027 000或2.7104415030821 5001 500或1.51035多不可計16505135

7、13 000513 000或5.3105627115270270或2.71027多不可計3051230 50031 000或3.11047.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中實例5）。7.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中實例6）。7.2.5 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在30300之間，則應以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中實例7）。7.2.6 若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，則以“未檢出”報告之。7.2.7 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計”報告，而應在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個平板1 cm2中的菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內平均菌落總數(shù)，乘以皿底面積63.6 cm2，再乘以其稀釋倍數(shù)報告之。7.2.8 菌落計數(shù)的報告：菌落數(shù)在100以內時，按實有數(shù)報告；大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入法計算；為了縮短后面的零數(shù)，也可以用1