常見血液腫瘤FISH檢測小冊

1、常見血液腫瘤FISH檢測小冊一.FISH就是什么FISH即熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in血hybridizalionx就是在細(xì)胞遺傳學(xué)水平上檢測染色體及基因數(shù)目與結(jié)構(gòu)只常得一種分子嘉理檢測技術(shù)。其基木原理就是利用標(biāo)記了熒光素得核酸作為探針按照堿基互補原則.與待檢樣木中與之互補得核酸經(jīng)過變性退火而形成朵交雙鏈核酸然后通過熒光昭微鏡進(jìn)行檢測與分析。FISH技術(shù)具有區(qū)觀.快速、墩感性為與方便靈活等 特點目前已經(jīng)廣泛應(yīng)川于臨床御腫瘤遺傳學(xué)及各種基因 相關(guān)疾儲得分型與個體化治療等多個領(lǐng)域。2Ruoresence In Situ HytKidization -二、血液腫瘤得診斷分型MIC

2、M:血液腫瘤診斷得精確分型就是臨床選擇正確治 療方案御前提目前國際上通用御就是結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué) (Morphology) 免疫學(xué)(Immunology 細(xì)胞iS傳學(xué) Cyiogeneiics與分子生物學(xué)(Molecular)得 MICM 分型。形態(tài)學(xué)診斷(Morphology)細(xì)胞學(xué):外周血、骨髓涂片淋巴結(jié)穿刺 組織學(xué):骨儲、淋巴結(jié)活檢 免疫學(xué)檢査(Iininu nolog) 免疫組化(IHC) 流式細(xì)胞(FCM) 細(xì)胞遺傳學(xué)檢査Cytogenetics) 核型分析熒光原位雜交FISH) 分子生物學(xué)檢査(Molecular) PCR.DNA 測序三、FISH技術(shù)得作用及優(yōu)勢FISH作為一項很重要

3、得分子遺傳學(xué)檢測技術(shù)在血液 腫癇得診斷中有很大御作用得到了 NCCN等國內(nèi)外各大 血液腫癇診療指南得認(rèn)可與建議。目前與血液腫瘤相關(guān)斜FISH探針有接近100種常用 得就有60種左右包括急慢性白血摘、骨箭增生界常綜合 癥(MDS)、多發(fā)性骨儲瘤(MM)、淋巴瘤等多種血液腫瘤。FISH技術(shù)得相對優(yōu)勢： FISH技術(shù)3!敬感.可檢測出核型分析檢測不出得細(xì)微 缺失或易位如MDS中御5q缺失綜合征： FISH技術(shù)不需嬰中期分裂相細(xì)胞而核型分析需要培 養(yǎng)時間較長且需要較商得操作要求： FISH技術(shù)就是在細(xì)胞形態(tài)得基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)果判讀可 有效地降低假陰性或假陽性御風(fēng)險，而PCR技術(shù)經(jīng)過 倍増擴增不能在形態(tài)得基

4、礎(chǔ)上判讀對實驗要求商. 易產(chǎn)生假陰性或假陽性。四、常用得血液FISH檢測探針1急性粒細(xì)胞白血豹（AML）：樣本建議骨B AMLl/ETO融介基分型）PML/RARA融介加*1（M3分型） CBFB ffiW斷裂（M4分型） KMT2A（MLLWW斷做預(yù)后為治療失敗風(fēng)険5） 其她:Da 號染色體-UCBFB/MYHUCJRARA 基W析裂，DSq缺失、CHq缺失，CJEVI舉W斷裂2慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）：樣本優(yōu)先骨 BCR/ABL（DF滋介呈W檢測描導(dǎo)格列衛(wèi)用藥） 嗜酸性粒細(xì)胞增多癥格列衛(wèi)作用靶標(biāo)）:口PDGFRA舉W斷裂.PDGFRB 裂、FGFRl 基閑斷裂 其她:8CR/ABL(ES

5、) DBCR/ABLtSFj, i(17q. UASS 基因塊3急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)：樣本建議骨B EIV6(TELJ/AML1融介羞W后牧好，但易tt發(fā)) TCF3(E2AJ因斷裂(標(biāo)準(zhǔn)化療后易早期tt發(fā))BCR/ABL融介呈W(易迅速e發(fā),対挽救性化療反燉不佳) 兒審急性淋巴細(xì)胞白血柄染色體及因異常(4、10、17.TEL/AML1. KMT2A舉W斷裂BCR/ABL(DF),預(yù)后評估及治療方案得選廉) 其她: TCF3(E2A/PBX1. CM、10、17;DMYC 基丙斷裂、【GH基因斷裂.CJKIVITZA基因騎裂.CDKN2A(P16用因失4慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL):樣

6、本優(yōu)先外周血或骨M 慢性淋巴細(xì)胞白血病染色體及呈W舁ffi(P53、RBUnqWhArMllq22h D13525(13ql4h 12.預(yù)評估及治療方案得選擇) 其地:DLEUl(23ql4h DPS. ArM(llq22)、QWfC 舉因擴碼 口甸、L1TERC、L1GLL DlZ, BCLIGH. CCNDVIGH5骨a增生異常綜合癥(MDS):樣本建議骨Bi口 骨W增生HUSt煤合癥染色體及基W舁帑(5q、7q、207)7號染色體缺失或7q缺失與MDS得復(fù)發(fā)性異常相關(guān). 約發(fā)生于5-10%AML(M4及M6h約15%成人MDS、40% 兒童MDS及50%與治療相關(guān)得AML/MDS7/7q

7、得患者 預(yù)后較差，可用于抬導(dǎo)臨床進(jìn)行偵后判斷與治療方案得選 擇如可采用AML聯(lián)合化療與造血T細(xì)胞移植進(jìn)行治療。 20q(即 1)208108)20q缺失見于骨髓増殖性疾棘(MPDMDS(4%)/AM(l%)等 疾病中.-20/20q-得患者預(yù)后較好可用干指導(dǎo)臨床進(jìn)行預(yù) 后判斷與治療方案得選擇如可采用促進(jìn)造血、誘導(dǎo)分化與 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑等方式進(jìn)行治療。 +8( ap CSP8)+8就是原發(fā)性MDSM常見得核型只常國內(nèi)報道+8得檢出 概率.于國外(10%),可以出現(xiàn)于FAB分型得每一 種MDS亞型在IPSS積分系統(tǒng)中屬于中等預(yù)后指標(biāo)。7、多發(fā)性骨髓瘤(MM)常用FISH檢測靶標(biāo)：l3q7plq2l

8、擴增IGH基W斷裂多發(fā)性骨騒癇就是一種最常見得惡性漿細(xì)胞病占造 血系統(tǒng)惡性腫瘤御10% 其特征就是宋克隆漿細(xì)胞惡性増 生并分泌大a飛克隆免疫球蛋白引起骨痛、摘理性骨折、 造血界常.敢克隆球蛋白血癥及腎功能受損等一系列臨床 變化。目前通用斜MM診斷標(biāo)準(zhǔn)主要就是標(biāo)1E WHO(2001) 與國際MM X作組2003)。此種疾摘容易誤診誤診率商達(dá) 60% O臨床研處發(fā)現(xiàn).MM得發(fā)生發(fā)展中伴隨著多種特異御 細(xì)胞遺傳學(xué)層次上得相關(guān)基W數(shù)目或結(jié)構(gòu)斜改變。細(xì)胞遺 傳學(xué)改變在MM發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用MM常涉及多 種染色體牙常，主要為數(shù)目異常染色體核型界常分為超一 倍休與非超一倍體兩大類，其中超一倍休常見染色

9、體改變 就是+3、+5、+7、+9. +11、+15、+19、+21。非超一借體 主要累及& 13、-14. -17. -22等在MM架色休界常 中結(jié)構(gòu)改變較少見,主要有1號染色休Ip缺失或Iq擴増h 13q、14q(鄉(xiāng)為與I4q32有關(guān)得幾種重排等。染色休分析需要有校好得中期分裂相由干骨箭瘤細(xì) 胞為終末分化細(xì)胞增長率較低很難獲得足夠分裂ffi進(jìn)行 分析常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)檢出率低15%-20%.nSH技術(shù)可 提商至38%54%。13q（含 D13S319 與 RIH）13號染色體部分或完全缺失就是MM常見得染色體牙常. 在MM發(fā)插機制中校早發(fā)現(xiàn)就是該橋偵后及生存期偵測 重要指標(biāo)之一采用FISH

10、技術(shù)檢測檢出帑可達(dá)30%50%。 RBI缺失中位生存期為42、3個刀預(yù)后中等:DI3S3I9缺 失中位生存期為42、3個丿J預(yù)后中等。 P53P53基W界常在初診得MM臉出率約5%-10%= P53缺失 中位生存期為24. 7個丿人偵后差C P53基W參與細(xì)胞御刪 亡過程它得缺失將導(dǎo)致化療藥物得不敏感性臨床也證實 具有deK17p）界?；颊邿o論就是接受傳統(tǒng)化療還就是大劑 S化療甚至就是ASCT.療效與生存情況均比基W正常看 差。 Iq21lq2l（CKSIB）就是MM中最為常見御遺傳學(xué)界常-CKSIB基 因擴增導(dǎo)致細(xì)胞周期循環(huán)斜上調(diào)從而引起很多增殖性疾 韓lq2l擴増往往與得浸潤表型相關(guān)預(yù)后差

11、疾柄進(jìn)展 快。 K；H基因斷裂大約4060%得MM患者發(fā)生IGH基因斷裂及易位.IGH基W 易位得伙伴染色體,主耍包括llql3(BCLI/CCNDl)、4pl6、 3(FGFR3)、16q23(MAF), 20qll(MAFB)與6p2l(CCND3) 等。較常見御易位:l(ll:l4)ql3:q32h 4:l4)(pl6:q32)與 t(l4:l6)(q32;q23)分別大約20%、15%與5%患者存在。 l(M:l4Hql3:q32預(yù)后較好 a(4:14)(pl6：q32)f 患者與其竝遺 傳亞型斜患考相比具有械濟(jì)較差得預(yù)后。8、淋巴瘤常用FISH檢測靶標(biāo):CCNDI/IGH基丙融合.B

12、CL2/IGH 基W融合.MYC基W斷裂.BCL6基W斷裂、MALT 1基 W斷裂 CCND1/K；H基因融合t(l!:易位后形成CCND1/IG H融合基虬IGH基W附近得 增強子使CyciiiiDl過表達(dá)應(yīng)用范I科盤細(xì)胞淋巴瘤得診斷 性抬標(biāo).95%左右得MCL患者具有l(wèi)(ll:l4Hql3:q32染色休 易位可用于MCL與其她淋巴瘤CLL/SLL)鑒別診斷。 BCL2/I(；II基因融合1(14:18)易位后形成得BCL2/IG H基W能編碼完整貴白JGH 基W附近得增強子使BCL2過表達(dá):M14:為FL得標(biāo)忐(低 級別更易出現(xiàn))檢出率達(dá)93%。 基因斷裂約80%得BL摘例發(fā)生1(8:(q

13、24:q32):約15%得BL病例 發(fā)生 l2:8(pll:q24：約 5%發(fā)生 l8:22)q24:qM)。染色體易 位導(dǎo)致MYC基W斷裂重組可能就是BL御一個標(biāo)出可以 應(yīng)用于臨床上BL得輔助診斷指導(dǎo)高分級B細(xì)胞淋巴瘤得 治療偵后較差 山|(基因斷裂BCL6基W得重排可見于約30%-40%得彌漫大B細(xì)胞淋巴 瘤(DLBCU中。BCL6可能就是DLBCL發(fā)摘機制中特界得 原癌基l*BCL6重排偵后好于BCL2重排斜DLBCL患者 TMT1基因斷裂由于MALT淋巴癇缺乏特征性斜形態(tài)學(xué)與免疫表型特點. 常規(guī)采用排除性診斷:近年來御研處資料證實MALT淋巴 瘤中存在幾種遺傳學(xué)界常,主要包括染色體易位

14、 t(ll;18Mq2hq21)/API2-MALTl.t( 14:18Xq32;q2l )/IGH-MALTl、l:l4)(p22:q32)/IGHBCLlO 與非整倍休如 3、7、12、IS 三體)。伴/不伴染色休易位斜MALT淋巴瘤診斷、治療與 預(yù)后存在差別與MAlJTlU8q2l)基W斷裂相關(guān)御探針可川 于輔助診斷粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴W(MALT). 川基因斷裂IGH基W斷裂及易位發(fā)生于50%B細(xì)胞NHL中與多種其 她淋巴瘤類型中可與超過50種得基W發(fā)生相互易位可用 于輔助診斷淋巴癇。基因斷裂約60%-85%間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)病例表達(dá)間變性 淋巴瘤激酶(ALK)融合蛋白這就是由于2號染色休上得 ALK基W位點發(fā)生斷裂且與其她