RotorGeneQ實時熒光定量PCR分析儀Qiagen

1、Rotor-Gene? Q 實時熒光定量 PCR 分析儀更多應(yīng)用盡在其中Sample & Assay Technologies出色的 real-time PCRRotor-Gene Q 您實驗成功的保障實時定量 PCR 是一門精確的技術(shù)， 它對儀器、試劑和軟件都有極高的要求。高度的溫度和光學(xué)均一性、 短時間內(nèi)的溫度平衡，以及快速的升降溫對于精確和快速的定量分析都是極其重要的。同樣，檢測的靈敏度、速度和特異性也高度依賴于 DNA聚合酶和反應(yīng)組份。QIAGEN 公司的實時定量 PCR 分析儀 Rotor-Gene Q 將多種優(yōu)化的設(shè)計相結(jié)合，為您精密的研究需求提供出色而可靠的實驗結(jié)果。配合 QIA

2、GEN 專為定量 PCR 而優(yōu)化的試劑盒， Rotor-Gene Q 可以讓您直接、高效的將其應(yīng)用于廣泛的研究領(lǐng)域。Rotor-Gene Q 可以帶給您： 離心式的設(shè)計帶給您出色的溫度和光學(xué)表現(xiàn) 寬廣的光譜范圍，從紫外到紅外波長 堅固耐用的設(shè)計，確保低維護和高度方便性 HRM 遺傳分析功能與定量擴增相結(jié)合 配合 QIAGEN 試劑盒，在多種應(yīng)用方向都有出色表現(xiàn)廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域Rotor-Gene Q 與 QIAGEN 試劑盒相結(jié)合，實現(xiàn)所有定量 PCR 的應(yīng)用，?以及高分辨率熔解（ HRM）分析： 基因表達分析 基因分型 病原體檢測 基因掃描 DNA 甲基化分析 miRNA 研究 物種、品種鑒定

3、 HLA 配型分析詳細應(yīng)用參見第 8 頁。訪 問 /PCR-applications 并 瀏覽 Rotor-Gene Q 模 擬世界，體驗超過 20 個儀器與軟件的動畫演示。2 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011離心式的設(shè)計，出色的表現(xiàn)Rotor-Gene Q 獨特的離心轉(zhuǎn)子式設(shè)計讓她成為在精確和通用性方面都非常出色的實時定量 PCR分析儀（圖 1）。每個 PCR管在反應(yīng)倉里勻速旋轉(zhuǎn)，空氣不斷高速流動，所有樣品在快速的升降溫過程中始終處于高度一致的溫度下。信號檢測也具有同樣的均一性。當(dāng)管子對準(zhǔn)檢測光路

4、時，樣品就被激發(fā)，熒光信號快速通過單一的短光路被 PMT（光電倍增管）收集。溫度和光學(xué)上的均一性保證了定量 PCR 分析的靈敏、精確和快速（圖 2）。并且這種離心式的設(shè)計還消除了管和管之間的差異及邊緣效應(yīng)，而傳統(tǒng)板式儀器由于板塊內(nèi)部溫度的差異和復(fù)雜的光路系統(tǒng)無法具備 Rotor-Gene Q 的這些出色性能。離心式的設(shè)計保證了： 孔間溫度差異小于 0.01 （比板式設(shè)計小 20 倍） 均一的檢測無需使用 ROX 校正染料 加樣后直接上機，不用擔(dān)心掛壁和氣泡 快速的升降溫和可忽略不計的平衡時間縮短了反應(yīng)時間圖 2. 精確的定量 PCR 分析。nA 30 ng （10,000 拷貝）人基因組 DN

5、A 兩倍梯度稀釋至 0.06 ng 圖 1. Rotor-Gene Q 的剖面圖。 升降溫通過反應(yīng)倉內(nèi)快速（20 拷貝），用于定量擴增。每個梯度五次重復(fù)，使用自己設(shè)計的 TaqMan 的空氣流實現(xiàn)。 PCR 管每 150 毫秒通過激發(fā) / 檢測光路， ? 方法，用 Rotor-? 方法，用 Rotor-Gene Probe PCR Kit 在 Rotor-Gene Q 上分析 IL1R2 基因。各稀釋度之間 CT 值的平均差異為 實現(xiàn)高速的數(shù)據(jù)采集。多達 6 個獨立的 LED 可與 6 個不同1.07 個循環(huán)。 nB 以人基因組 DNA 為模板，重復(fù) 72 次定量擴增，使用自己設(shè)計的 TaqM

6、an的檢測濾光片相組合，檢測元件使用高靈敏度光電倍增管。方法在 Rotor-Gene Q 上擴增 BCL2 基因，不用 ROX 校正。平均 CT 值 24.94 ，標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為 0.05 ，相當(dāng)于 CV 值0.2% 。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 3寬廣的光學(xué)范圍和靈活的規(guī)格極寬的光學(xué)范圍允許更多的應(yīng)用?不論您的應(yīng)用是基于 SYBRGreen 一類的內(nèi)摻染料、諸如水解探針（ TaqMan ）的探針類、雜交探針（ FRET），或其它復(fù)雜的標(biāo)記方法， Rotor-Gene Q 都能滿足您的要求。有了從

7、紫外到紅外多達 6 個的通道， Rotor-Gene Q 為您提供了極為寬廣的光譜范圍（表 1）。并且，軟件允許您通過對不同激發(fā)光源與濾光片的組合而建立新的通道，這為未來新品種染料的應(yīng)用提供了空間。表 1. 光學(xué)檢測通道通道 激發(fā) (nm) 檢測 (nm) 可檢測的熒光素舉例藍 365 20 460 20 Marina Blue? , Edans, Bothell Blue, Alexa Fluor ? 350, AMCA-X綠 470 10 510 5 FAM?, SYBR Green I, Fluorescein, EvaGreen? , Alexa Fluor 488黃 530 5 55

8、7 5 JOE?, VIC? , HEX, TET?, MAX?, CAL Fluor ? , Gold 540, Yakima Yellow ?橙 585 5 610 5 ROX?, CAL Fluor Red 610, Cy ? 3.5, Texas Red ? , Alexa Fluor 568紅 625 5 660 10 Cy5, Quasar? 670, LightCycler ? , Red640, Alexa Fluor 633深紅 680 5 712 high pass Quasar 705, LightCycler Red705, Alexa Fluor 680HRM 460

9、 20 510 5 SYBR Green I, SYTO? 9, LC Green ? , LC Green Plus+, EvaGreen靈活的規(guī)格配合您的工作流程Rotor-Gene Q 支持多種 PCR 管以滿足不同的需求，用戶只需按一下轉(zhuǎn)子中部的彈簧扭，便可?輕松更換承載管子的轉(zhuǎn)子。同時還可配置 Rotor-Disc，提供更快的反應(yīng)體系構(gòu)建和更高的通量。Rotor-Disc 是一類整合的盤管，最多可達每盤 100 個孔，相比 96 孔板更增加了 4 個可用作對照的額外的孔。 Rotor-Disc 可以很方便的在 Rotor-Disc 熱封口儀上用塑料膜密封。?你可以手工進行反應(yīng)體系構(gòu)建

10、，或利用 QIAGEN 的自動化解決方案進行自動化構(gòu)建。 QIAgility是一臺經(jīng)濟的自動化移液設(shè)備，可以進行快速、高精度的 PCR體系構(gòu)建；而 QIAsymphony? AS則是每天都進行 PCR檢測的實驗室的理想選擇。兩臺儀器都可以為 Rotor-Gene 進行自動化的反應(yīng)體系構(gòu)建，可以直接進行樣品列表的傳輸，并都配有經(jīng)過驗證的定量 PCR反應(yīng)體系構(gòu)建程序。很少的維護，高度的方便性Rotor-Gene Q 在機械設(shè)計方面盡可能地減少了對維護的需求，并不斷提高使用的方便性。這一特性為使用者節(jié)約了時間和成本， 用戶只需專注于研究， 而無需擔(dān)心如何維持儀器的性能。舉例而言，Rotor-Gene

11、 Q 配備了高度穩(wěn)定的 LED 激發(fā)光源，并有終身質(zhì)保，用戶無需為需要定期購買及更新光源和煩惱。Rotor-Gene Q 的特性包括： 更少的運動組件，短且固定的光路以提高耐用性 無需進行光路對齊、校準(zhǔn)或光源更換的操作 儀器小而輕，易于運輸，更高的靈活性4 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011方便的常規(guī)驗證有些實驗室可能需要對溫度的準(zhǔn)確性進行經(jīng)常性的驗證。對于大多數(shù)的熱循環(huán)儀而言，這需要工程師的介入。 Rotor-Gene Q 是唯一一臺可以提供 Rotor-Disc OTV （光學(xué)溫度校驗）試劑盒的熱循環(huán)儀，它無需工程師，用戶自

12、己就可以自動化的檢驗溫度的準(zhǔn)確性。試劑盒包括一個特殊的Rotor-Disc ，預(yù)裝有熱敏液態(tài)晶體，和專用的分析軟件。整個操作步驟只需不到 30 分鐘。可靠的支持同時作為儀器和試劑的生產(chǎn)商， QIAGEN 的技術(shù)支持部門不僅為您提供儀器方面的支持服務(wù)，還為您提供試劑方面的咨詢，一站式的服務(wù)讓您的 PCR 實驗后顧無憂。 QIAGEN 售后服務(wù)提供多種靈活的支持協(xié)議，使您能享受全方位的服務(wù)并更好的控制成本。我們的售后服務(wù)和培訓(xùn)計劃能夠讓您靈活地使用您的設(shè)備、拓展應(yīng)用。我們擁有 ISO 9001/ISO 13485 認(rèn)證及大批資深的、經(jīng)驗豐富的技術(shù)支持專員，作為 QIAGEN 的用戶，您可以享受到最

13、高水平的服務(wù)。Rotor-Gene Q 的參數(shù)看一看 Rotor-Gene Q 出眾的技術(shù)性能（表 2）表 2. Rotor-Gene Q 參數(shù)尺寸和重量 寬370 mm (14.6 in.) x 深 420 mm (16.5 in.) x 高 286 mm (11.3 in.)深（開門時） : 538 mm (21.2 in.)重 : 12.5 kg (27.6 lb)溫度表現(xiàn) 溫度均一性： 0.02 C（標(biāo)準(zhǔn)偏差）溫度分辨率： 0.02 C溫度范圍： 3599 C光學(xué)系統(tǒng) 多達 6 個通道（ 365680 nm 激發(fā)， 460750 nm 檢測）固定光路，每個通道獨立的高強度激發(fā) LED和

14、濾光片高度靈敏的光電倍增管（ PMT）檢測器，帶有增益設(shè)定（靈敏度控制）動態(tài)范圍： 10 個數(shù)量級（依賴于實驗）轉(zhuǎn)子和孔規(guī)格 Rotor-Disc 100: 30 l x 100 孔，推薦反應(yīng)體積 1525 lRotor-Disc 72: 0.1 ml x 72 孔，推薦反應(yīng)體積 2025l排管 0.1 ml: 0.1 ml x 72 孔，推薦反應(yīng)體積 1050 l，4 聯(lián)管及蓋PCR管 0.2 ml: 0.2 ml x 36 孔，推薦反應(yīng)體積 2050l，單個帶蓋管子典型運行時間 用 QIAGEN Rotor-Gene 試劑盒， 40 個循環(huán) 4560 分鐘（依賴于檢測方法）電源要求 100

15、240 V AC, 50/60 Hz; 560 VA （峰）質(zhì)保 儀器 1 年質(zhì)保， LED 激發(fā)光源終身質(zhì)保Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 5功能全面的軟件，安全的數(shù)據(jù)功能全面的 Rotor-Gene Q 軟件包支持所有最先進的從基礎(chǔ)到高級算法的實時定量分析功能。它為您自如的分析寶貴的數(shù)據(jù)提供了高度的方便性和可靠的保障。從運行開始到結(jié)果輸出，全程的操作均可追蹤，為數(shù)據(jù)提供了高度的安全保障。Rotor-Gene 軟件支持的分析步驟易于使用的軟件可為您提供： 無限制的安裝拷貝次數(shù)，可進行個人化管理 每

16、個結(jié)果文件都有數(shù)字簽名，確保數(shù)據(jù)安全可靠 對文件的每一次操作、修改都可進行追蹤 提供多種結(jié)果報告模式和輸出功能 可輸出原始數(shù)據(jù)，以備查詢、確認(rèn)HRM?C TRotor-Gene Screen?Clust HRMLinRegPCRREST* REST利用不同的 PCR 效率和多組內(nèi)參基因進行標(biāo)準(zhǔn)化，可以在 /rest 網(wǎng)站上免費下載? 軟件需另行購買6 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011出色的 HRM 分析HRM 高分辨率熔解，拓展您的應(yīng)用高分辨率熔解分析（ HRM）是一種新興的 PCR 后分析技術(shù)。該

17、技術(shù)以其簡單、快速、靈敏、低成本、真正實現(xiàn)閉管操作和在基因分型領(lǐng)域的應(yīng)用而引起了廣泛的關(guān)注。 HRM 根據(jù)雙鏈 PCR 產(chǎn)物解鏈（熔解）時的表現(xiàn)來分析樣品，它與傳統(tǒng)的熔解曲線類似，卻能提供更多的信息，因而具有更廣泛的應(yīng)用。 HRM 根據(jù) PCR產(chǎn)物的序列、 長度、GC 含量區(qū)分樣品，其靈敏度可區(qū)分單個堿基的差別。以前未知的、甚至復(fù)雜的序列現(xiàn)在都可以通過這種高效、直接的方法進行檢測和分析。 HRM 因其檢測方法簡單、速度快、通量大、成本低、不受檢測位點局限、既可分析已知突變又可對未知突變進行掃描，成為近年來最受關(guān)注的 SNP 及突變檢測新方法。Rotor-Gene Q 離心式的設(shè)計，以及其卓越的

18、溫度和光學(xué)表現(xiàn)令其成為 HRM 分析的理想選擇。Rotor-Gene Q 具備 HRM 應(yīng)用所要求的性能： 特殊調(diào)校的高強度 HRM 光學(xué)通道0.02 的溫度分辨率圖 3. 成 功 的 A/T 第 IV 類 SNP 的基 因 分 型。 用 Type-it?HRM Kit 對人 GYS1 基因的 SNP（rs22970938 ）分型得到 高速的數(shù)據(jù)采集速率了高度重復(fù)和準(zhǔn)確的結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)化熔解曲線和差異視圖顯示 全面的 HRM 軟件出對全部三種基因型（藍：野生型；綠：雜合型；紅：突變型）的成功與可靠的分辨。 nA 標(biāo)準(zhǔn)化熔解曲線。 nB 用野生型樣品進行標(biāo)準(zhǔn)化的差異視圖。在 Rotor-Gene Q

19、 上應(yīng)用 HRM 技術(shù)可以實現(xiàn)對極小的遺傳差異的分辨，比如在熔解點上的差異小于 0.2 的 A/T 第 IV 類 SNP（圖 3 和 4）。HRM 應(yīng)用包括如： 基因分型 病原體分型 基因掃描 定量熔解分析圖 4. 用 HRM 分析純合子等位基因之間差異不到 0.1 的第 IV 類 SNP。用野生型（藍） ，純合突變型（綠）和雜合子（紅）樣品的基因組 DNA 分析 AHRR 基因上的一個人類 A/T SNP 。實驗采用 Type-it HRM Kits ，Rotor-Gene Q HRM 儀器及 Rotor-Gene ScreenClust? HRM 軟件。 nA 標(biāo)準(zhǔn)化溶解曲線：純合子的曲線

20、幾乎一致。 nB ScreenClust HRM 聚類圖：所有的假 - 末知樣品，包括純合等位基因均準(zhǔn)確無誤地被歸類，聚類結(jié)果完全符合真實的基因型。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 7針對您的各種應(yīng)用而優(yōu)化的試劑QIAGEN 為您提供一系列針對 Rotor-Gene Q 的試劑盒，讓您無需對反應(yīng)體系進行任何優(yōu)化，便可得到可靠的定量 PCR實驗結(jié)果。QIAGEN 實時熒光定量 PCR試劑盒的特點和優(yōu)點+K+和 NH 4的平衡組合減少了非特異性的引物退火，保證擴增的高度特異性。通過使用一種全新?的 PCR

21、 添加劑 Q-Bond ，在有效縮短反應(yīng)時間至 45 分鐘的同時保持同樣出色的結(jié)果，對于極具挑戰(zhàn)性的多重 PCR，合成的 MP 因子能夠讓不同的擴增子都能以同等的高效率進行擴增。 MP 因子是一種創(chuàng)新的 PCR 添加劑，能夠在模板的區(qū)域提高引物的濃度并穩(wěn)定特異性結(jié)合的引物，從而讓 DNA 聚合酶得以有效地延伸引物。表 3. 針對各種應(yīng)用的檢測試劑應(yīng)用 檢測方法 步驟 QIAGEN 試劑盒 數(shù)據(jù)基因表達分析 SYBR Green PCR和 2-step RT-PCR Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit 表 4SYBR Green 1-step RT-PCR Rotor-G

22、ene SYBR Green RT-PCR Kit 圖 5SYBR Green 2-step RT-PCR array Pathway-Focused RT2 Profiler PCR Arrays 圖 9探針 ( 單重 ) PCR和 2-step RT-PCR Rotor-Gene Probe PCR Kit 圖 2探針 ( 單重 ) 1-step RT-PCR Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit探針 ( 多重 ) PCR和 2-step RT-PCR Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 圖 7探針 ( 多重 ) 1-step RT-PCR Roto

23、r-Gene Multiplex RT-PCR Kit 圖 8探針 ( 雙重 ) 2-step RT-PCR 和1-step RT-PCRQuantiFast? Probe Assays and Kits 圖 6miRNA 檢測 SYBR Green Two-step RT-PCR miScript SYBR Green PCR Kit 圖 10病原體檢測 探針 ( 多重 ) PCR, 2-step RT-PCR QuantiTect 和1-step RT-PCR? Virus +ROX Vial Kit探針 ( 雙重 ) PCR或 1-step RT-PCR QuantiFast Patho

24、gen +IC Kits 圖 11包括通用內(nèi)質(zhì)控食品安全檢測 探針 Real-time PCR assays mericon ? food testing portfolio 圖 12病原體分型 EvaGreen HRM Type-it HRM PCR Kit 圖 13基因分型 探針 PCR Type-it Fast SNP Probe PCR Kit 圖 14EvaGreen HRM Type-it HRM PCR Kit 圖 15, 3甲基化分析 探針 PCR EpiTect? MethyLight PCR Kit 表 5EvaGreen HRM EpiTect HRM PCR Kit 圖

25、 168 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011基因表達分析Rotor-Gene SYBR Green 試 劑 盒、QuantiTect Primer Assays 和 Rotor-Gene Q 的組合為基因表達分析提供了一套完整的可直接使用的解決方案。QuantiTect Primer Assays 是經(jīng)生物信息學(xué)方法驗證的引物組，覆蓋?人、小鼠、大鼠及許多其它物種的所有基因。用戶可以在 GeneGlobe上（/GeneGlobe ） 進 行 查 找。 當(dāng) 其 與 Rotor-GeneSYBR Gree

26、n 試劑盒配合使用時，您無需任何優(yōu)化即可得到高靈敏度和特異性的擴增結(jié)果（圖 5 和表 4）。表 4. 用 SYBR Green 法進行 RT-PCR 分析的出色表現(xiàn) Amplification plot (Supplier R)QIAGEN Supplier A II3.20.66CT 平均偏差 CT 平均偏差0.50BAX（與 BCL2 相關(guān)的 X蛋白） 24.84 0.05 29.57 0.46BCL2（凋亡基因） 26.96 0.05 32.83 0.29MYC （原癌基因） 28.42 0.21 35.26 0.72-Action （看家基因） 20.24 0.03 24.39 0.1

27、2)035(ecnecseroulF2.62.01.40.8Td/Fd0.340.180.020.1366 70 74 78 82 86 90 94Temperature ( )以人白細胞 cDNA （1 ng ）作為模板用基于 SYBR Green 方法的兩步法 RT-PCR實時擴增。用QuantiTect Primer Assays 對 4 個不同目標(biāo)（ BAX、BCL2、MYC 和 -Actin ）進行擴增，每0.2個重復(fù) 3 次。Rotor-Gene Q 和 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit 表現(xiàn)出了很高的檢測靈敏度，1 5 10 15 20 25 30 35

28、 40 45比廠家 All 的儀器和試劑有更小的 CT 值和平均偏差。 Cycle圖 5. 用 SYBR Green 進行特異、靈敏的檢測。 人白細胞RNA（100 ng 到 10 ng ）10 倍 梯 度 稀 釋， 在 基 于 SYBR當(dāng)用探針進行基因表達分析檢測時， QuantiFast Probe Assays 帶有一組預(yù)混引物及雙標(biāo)記探針（ TaqMan 探針），可以與專用于 Rotor-GeneGreen 的實時 RT-PCR 中用作模板。用 QuantiTect PrimerAssays 檢測 BCL2（B-cell CLL/lymphoma 2 ），nA 每個重復(fù)Q 的預(yù)混試劑共

29、同使用，進行快速和高靈敏度的定量分析。 QuantiFast兩次。 Rotor-Gene Q 和 Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit可以高靈敏度的檢測 10 pg 的RNA，得到特異的擴增產(chǎn)物 （如Probe Assay 采用專利算法進行設(shè)計，可以對小于 100 bp 的 RNA 和cDNA 的進行高效、 可靠的擴增與檢測， 并高度適用于有降解的起始樣本，圖內(nèi)熔解曲線所示） 。 nB 相反， 廠家 R的儀器和試劑僅在優(yōu)2+化過 Mg濃度后才能檢測到模板。而檢測的下限為 100 pg如福爾馬林固定，石蠟包埋（ FFPE）的樣品。（圖 6）。RNA，并可觀察到非特異性

30、的產(chǎn)物（如圖內(nèi)熔解曲線所示） 。圖 6. 高效定量 RT-PCR 檢測 FFPE樣本 RNA 。 用 RNeasyFFPE 試 劑 盒 從 FFPE樣 本 中 純 化總 RNA（1 ng,100 pg,10 pg 和 1 pg ）。擴增得到人 MUC1 基因的轉(zhuǎn)錄本，并在Rotor-Gene Q 上 用 QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit 和QuantiFast Probe Assay （ 藍色 曲 線 ） 或廠家 All（ 紅 色 曲線）預(yù)設(shè)計的引物探針組進行檢測。相比廠家 All 的結(jié)果，QuantiFast Probe Assay 有較小的 CT 值和較高的

31、靈敏度。即使是低至 1 pg 的樣本也被 QuantiFast Probe Assay 檢測到（廠家 All 無法檢測到 1 pg 的樣品）。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 9Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 和 Rotor-Gene Q 為快速、可靠的基因表達分析提供了最終解決方案。多達 4 個 cDNA 目標(biāo)可以在一個管子里同時、快速的定量，增加了通量并節(jié)約了寶貴的樣品（圖7 和 8）。不同表達水平的基因在同一個管子內(nèi)以同等的高效率得到擴增，保障了可靠的基因表達相對定量。

32、圖 7. 可靠的多重分析。 人白細胞 cDNA （10 ng 至 10 pg ）10 倍梯度稀釋，在 4 重實時定量 PCR 中用作模板。用 Rotor-Gene Q 和 Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 及廠家 S的儀器和試劑進行擴增， 每個重復(fù)三次。目標(biāo)基因： TNF（腫瘤壞死因子） ，IFNG （干擾素， gamma ），MYC （v-myc 髓細胞瘤病毒原癌基因同系物（鳥類） ），HSP90AA1 （熱休克蛋白 90 kDa alpha （細胞溶質(zhì)），class A member 1 ）。nA 4 個目標(biāo)均得到了 CT 值（廠家 S 的儀器和試劑沒有成功的檢測到

33、 IFNG ；N.D. ）。Rotor-Gene Q 上的較小的 CT 值說明了更高的檢測靈敏度。 nB IFNG 的擴增曲線（內(nèi)部小圖顯示為廠家 S 的擴增曲線） 。圖 8. 高效的 4 重分析。 用 Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 和自己設(shè)計的 TaqMan assays 對目標(biāo)進行 4 重實時定量一步法RT-PCR檢測。樣本為 100, 10, 1, 或 0.1 ng 的 HeLa 細胞 RNA ，反應(yīng)在 Rotor-Gene Q 上進行。 CT 值比模板量對數(shù)值的曲線相互平等，說明所有 4 個目標(biāo)均以同等的效率得到擴增。 GAPDH ：3- 磷酸甘油醛脫

34、氫酶； RPS27A：核糖體蛋白 S27a ；NFKB：B 細胞 K 輕鏈多肽基因增強子的核因子。10 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011專注于通路和疾病的 PCR array2專注于通路的 RTProfiler PCR Arrays 是研究特定基因群表達的非常可靠的工具。每個 100 孔Rotor-Disc PCR Array 包含了經(jīng)優(yōu)化的 SYBR Green 引物組（經(jīng)過實驗驗證） ，這些引物組針對已經(jīng)經(jīng)過充分研究的一組相關(guān)的、專注于通路的或?qū)Ｗ⒂诩膊〉幕蛉海糜谠?Rotor-Gene Q 上進行檢測。 RT 2 p

35、rofiler PCR Array 也可進行客戶訂制，以覆蓋與您特殊研究興趣相關(guān)的一組基因。2我們高質(zhì)量的引物合成和反應(yīng)液組份，可以讓 RTprofiler PCR Array 在同樣的循環(huán)條件下同時擴增 96 個不同的基因特異性產(chǎn)物。這一組合使 RT 2 profiler PCR Array 具備了準(zhǔn)確的 SYBR定量 PCR實驗（見圖 9）* 所要求的特異性和高擴增效率。 RT 2 Profiler PCR Array 的易用性使每個實驗室都可以將它應(yīng)用到日常工作中。PCR array 技術(shù)的新發(fā)展使 RT 2 Profiler PCR Array 針對不同來源的樣本均有優(yōu)異的表現(xiàn)。包括從

36、常規(guī)樣本（ 0.1 5g RNA ）、FFPE樣本和微量樣本（ 1100 ng RNA）中獲得的 RNA。參見 PCRArray 操作手冊獲取更多信息。圖 9. 正常和癌性結(jié)腸組織的基因表達譜。 使用 Human Apoptosis RT2 Profiler PCR Array ，在 Rotor-Gene Q 上對正常（成人升結(jié)腸）和腫瘤（成人結(jié)腸惡性腫瘤）結(jié)腸進行基因表達分析。 nA 用正常和腫瘤組織的 C T 值（數(shù)據(jù)用 5 個看家基因的幾何平均數(shù)進行標(biāo)準(zhǔn)化） 繪圖。 nB 對所選取的基因中具有顯著性 （大于 2 倍）表達（腫瘤相對于正常組織） 變化的基因進行制圖。腫瘤相對正常組織進行比較

37、，總共有 36 個基因具有差異的表達模式，其中 30 個基因表現(xiàn)為下調(diào)， 6 個基因表現(xiàn)為上調(diào)。這些數(shù)據(jù)顯示了用 RT 2 Profiler PCR Array 在 Rotor-Gene Q 上對腫瘤與正常組織的差異基因表達譜研究的強大能力。* 專注于通路的 RT 2 Profiler PCR Array 的數(shù)據(jù)分析軟件可以在 /pcarraydataanalysis.php 上免費獲得。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 11miRNA 檢測miRNA 在不同

38、的生物學(xué)過程中扮演了很重要的角色， miRNA 的表達失調(diào)與一些癌癥和疾病相關(guān)。對這一令人興奮的新興領(lǐng)域， QIAGEN 為您的研究提供了 miScript PCR System 這樣一個三組份系統(tǒng)，它包含了將 miRNA 、mRNA 及其它非編碼 RNA 轉(zhuǎn)錄為 cDNA 以及之后用 SYBR Green 法進行 miRNA 定量檢測的各個步驟。用 miScript Reverse Transcription Kit 快速、簡單的逆轉(zhuǎn)錄之后用 miScript SYBR Green Kit 和 miScript Primer Assay 在 Rotor-Gene Q 上對 miRNA 進行高

39、靈敏度和特異的檢測。使用正確的 assay 可以檢測到成熟的 miRNA 或 miRNA 前體（圖 10 ）。關(guān)于miScript PCR System 的更多信息，請訪問 /miRNA 。圖 10. 用 miScript PCR 系統(tǒng)在 Rotor-Gene Q 上對 miR-15 和 RNU6B 進行定量。 nA 對寬廣范圍模板量的靈敏與特異的定量。用 miScript Reverse Transcription Kit 合成 HeLa S3 細胞的 cDNA 。用 miScript PCR 系統(tǒng)和一個檢測 RNU6B 的 miScriptPrimer Assa

40、y 對從 1 pg 到 10 ng 范圍的 cDNA 進行檢測。定量 PCR 擴增在 Rotor-Gene Q 上進行。擴增曲線顯示低濃度到高濃度的模板均得到了靈敏和準(zhǔn)確的擴增。熔解曲線（內(nèi)插圖）表現(xiàn)為單峰，說明了特異的檢測。 nB 準(zhǔn)確檢測低至 10 個拷貝的 miRNA 。合成的 miR-15 用 miScript Reverse Trasnscription Kit 合成 cDNA 。從 10 個拷貝到 10 6 拷貝的不同數(shù)量的模板用miScript PCR 系統(tǒng)進行實時定量 PCR 擴增。實時定量 PCR擴增在 Rotor-Gene Q 上進行。 CT 值隨著 miRNA 拷貝數(shù)的增

41、加而呈線性降低，說明能從寬廣范圍的模板量中進行靈敏的檢測。 C T 值與拷貝數(shù)的對數(shù)做圖，顯示對不同起始量的模板的靈敏和線性的檢測。病毒檢測不論被檢測的是病原體或是其它材料，標(biāo)準(zhǔn)病原體的檢測都是從一個簡單的判斷目標(biāo)物有或無的篩查實驗開始的。如果篩查結(jié)果顯示病原體的存在，那么進一步地對病原體的分型可能是非常有必要的。實時定量 PCR的方法是準(zhǔn)確可靠檢測病原體的一種選擇，并且 QIAGEN 的技術(shù)和方案使篩查步驟更加便利。為了加速檢測流程， QIAGEN 提供經(jīng)驗證的，可直接使用的引物與探針組，以及 QuantiTect Virus 和 QuantiFast Pathogen +IC RT-PCR

42、 Kits ，它們可以在同一個反應(yīng)管中通過多重 PCR 檢測多個目標(biāo)物。12 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011高度靈敏地檢測病毒 RNA 和 / 或 DNAQuantiTect Virus +ROX Viral Kit 與 Rotor-Gene Q 相結(jié)合可以高度靈敏與快速的同時檢測多達 4種病毒的 DNA 和 RNA。高度濃縮的預(yù)混液允許在反應(yīng)中加入大體積的模板，降低檢測的下限。病毒核酸可以通過單重檢測被單個的檢測，亦可在帶有內(nèi)對照的多重檢測中被同時檢測。QuantiFast Pathogen +IC Kits 與 Quan

43、tiTect Virus Kits 有同樣的表現(xiàn)，但它同時提供一個通用內(nèi)在質(zhì)控，以通過正確解析陰性結(jié)果（如檢測到 PCR抑制物）來確保高度的流程安全可靠性。與Rotor-Gene Q 相結(jié)合， QuantiFast Pathogen Kits 的多重檢測可以在很寬的線性范圍內(nèi)同時檢測多個 DNA 和 / 或 RNA 目標(biāo)及內(nèi)對照，而不降低檢測的靈敏度（圖 11 ）。圖 11. 在 Rotor-Gene 上靈敏精確地檢測 Norovirus 。nA Norovirus 的轉(zhuǎn)錄本經(jīng)梯度稀釋，用單重實時定量 RT-PCR檢測或用平行檢測 QIAGEN 國際對照的雙重 RT-PCR進行檢測。實時定量

44、PCR在 Rotor-Gene Q 上運行，使用 QuantiFast Pathogen+IC RT-PCR Kit ，未經(jīng)任何 PCR優(yōu)化。兩個反應(yīng)包含了一個固定量的 IC 對照。每個稀釋度都進行三次重復(fù)分析，這里選取了每個稀釋度的兩次重復(fù)的結(jié)果。 nB 6-log 范圍的 Norovirus RNA 單重檢測和 Norovirus/IC 雙重檢測均顯示了高度的準(zhǔn)確性和線性。三個實時定量 PCR重復(fù)子的誤差棒每個為 1 SD。在 Rotor-Gene Q 上快速鑒定動物病原體?QIAGEN 為您提供了病原體鑒定與分型的全部所需 試劑，酶和儀器。 cador實時定量PCR試劑用于在 Rotor

45、-Gene Q 上用 PCR 的方法靈敏鑒定特定的動物病原體（病毒和細菌） 。例如，cador TKP PCR Reagent 包 含 了試劑 和酶， 用于 同時 對 Taylorella equigenitalis , Klebsiellapneumoniae 和 Pseudomonas aeruginosa 基因組的保守區(qū)進行多重擴增。在 Rotor-Gene Q 上檢測同一管內(nèi)擴增子的綠色，橙色和深紅色熒光值。同時每管內(nèi)還包含一個內(nèi)置質(zhì)控用于監(jiān)測 DNA的純化和 / 或是否存在 PCR抑制物。 QIAGEN 是極少的幾家擁有針對動物檢測的全球通用的 PCR許可證的，對于用戶來說無需增加額

46、外的許可費用。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 13食品安全檢測的整體解決方案mericon 食品檢測系列是一套從樣品制備到檢測試劑的完整系統(tǒng)，它滿足了日益增長的對食品研究和監(jiān)測的需求。檢測采用實時定量 PCR的方法，可以對廣泛的病原體、遺傳修飾生物、食品中的植物和動物成份，動物飼料或制藥產(chǎn)品進行靈敏而準(zhǔn)確地檢測。采用 mericon 樣品制備試劑盒和 mericon PCR Assasy 對食品安全檢測的整個工作流程都是經(jīng)過驗證的。 mericon PCR Assays 在Rotor-Gene Q

47、上自動進行（圖 12 ）。圖 12. 對于諸如花生醬一類的高難度的食品基質(zhì)的高靈敏度的病原體檢測。 花生醬在緩沖蛋白胨水中勻漿，接種 C 突變（棕）和 c.37GT 突變（粉）的可靠的區(qū)分。使其能夠擴增最具挑戰(zhàn)性的微小序列差異，即使是腫瘤相關(guān)基因中高難高度可靠和可重復(fù)的區(qū)分無需優(yōu)化即可獲得。 nB 在用生產(chǎn)廠家 R 的 HRM 預(yù)混試劑擴增時，即使在經(jīng)過廣泛的鎂離子濃度的基因變異（圖 15 ）。度優(yōu)化和循環(huán)參數(shù)優(yōu)化后仍無法區(qū)分 c.35 GC 的突變。突變影響了第 12 位的氨基酸，導(dǎo)致了 p.G12A ，以及 13 位氨基酸，導(dǎo)致 p.G13C 。圖 14. 即使在低模板濃度下也能可靠地對

48、SNP 分型。 用 Type-it Fast SNP Probe PCR Kit 對一組 70 個不同的基因組 DNA （每種 1 ng ）進行等位基因區(qū)分的結(jié)果圖。用 TaqMan SNPgenotyping assay 在 Rotor-Gene Q 上擴增 rs 951134 和兩個無模板對照（ NTC）。黑色 ：NTC。綠色 ：雜合樣品。 紅色 ：VIC 熒光素標(biāo)記的同源基因（ A 等位基因）。即使使用低濃度的模板仍然可以得到緊密的聚類和可靠的分型結(jié)果。Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011 Sample & Assay Technologies 15DN

49、A 甲基化分析EpiTect HRM PCR Kit 利用 HRM 技術(shù)可靠篩查甲基化狀態(tài)的變化EpiTect HRM PCR Kit 利用高分辨率熔解（ HRM）技術(shù)對亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后 DNA 的 CpG 甲基化狀態(tài)的變化進行快速的篩查與準(zhǔn)確檢測。EpiTect HRM PCR Kit 提供： 高度特異的 PCR擴增，無需優(yōu)化 基于 EvaGreen 熒光染料的清晰熔解曲線 方便的預(yù)混試劑和優(yōu)化的程序 快速、方便地開發(fā)新的 HRM 甲基化檢測用 HRM 進行 CpG 甲基化分析時， DNA 必需經(jīng)過完全的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化才能在 HRM 分析時檢測到 DNA 熔解狀態(tài)的變化。未知樣品可以與標(biāo)準(zhǔn)對

50、照的熔解特征進行比對。 EpiTect HRM PCR Kit 所保證的靈敏度配合 Rotor-Gene Q 就可以實現(xiàn)對即使是低含量的甲基化 DNA 的檢測（圖 16 ）。EpiTect MethyLight PCR Kits 用于基于探針的實時定量 PCR 方法檢測甲基化狀態(tài)一旦確定了甲基化位點，基于探針的方法就可以用于高靈敏度的 CpG位 點 定量 分析。EpiTect MethyLight PCR Kit 在 Rotor-Gene Q 上可 以用 TaqMan 或其它雙標(biāo)記探針對甲基化狀態(tài)進行高靈敏度和可靠的分析。當(dāng)此試劑盒與基于探針的甲基化檢測試劑（如 EpiTect MethyLi

51、ghtAssay）相結(jié)合時，可以得到高度準(zhǔn)確的甲基化定量分析結(jié)果。 EpiTect 圖 16. 高靈敏度的結(jié)果 甚至在檢測低含量的甲基化DNA 時。 按照不同比例將甲基化與未甲基化的 DNA 混合，MethyLight Assay 包括了 PCR 引物和兩條探針，其中一條為甲基化特異作為模板。在 Rotor-Gene Q 上用 EpiTect HRM PCR Kit 擴增APC 基因（ adenomatosis polyposis coli ）啟動子區(qū)域的一探針，另一條為非甲基化特異探針，它們可以在同一反應(yīng)中同時檢測甲基化和未甲基化位點（表 5）。 個 CpG 島，甲基化程度通過 HRM 甲基

52、化分析獲得。 nA 標(biāo)準(zhǔn)化的熔解曲線 nB 以 50% 甲基化樣品為標(biāo)準(zhǔn)的差異視圖。表 5. 靈敏檢測微小的甲基化變化設(shè)定的試驗甲基化程度 平均 C T(CG) 值（FAM 探針） 平均 C T(TG) 值（VIC 探針）計算所得每個樣品的甲基水平 %0% 甲基化 45 30.37 0.00410% 甲基化 34.62 30.72 6.27850% 甲基化 31.27 31.67 56.88790% 甲基化 30.52 33.43 88.258100% 甲基化 30.05 45 99.99716 Rotor-Gene Q 實時熒光定量 PCR 分析儀 11/2011定購信息產(chǎn)品 規(guī)格 貨號Rotor-Gene Q 2plex Real-time PCR cycler with 2 channels (green, yellow), laptop computer, Inquiresoftware,