常見植物的脫毒與快速繁殖技術(shù)

1、第9章 常見植物的脫毒與快速繁殖技術(shù),植物組織培養(yǎng),本章主要內(nèi)容(4學(xué)時(shí),蔬菜的脫毒與快繁 果樹的脫毒與快繁 花卉植物的脫毒與快繁 農(nóng)作物的脫毒與快繁 藥用植物的試管快繁 樹木的脫毒與快繁,第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),1)掌握馬鈴薯的生物學(xué)習(xí)性，掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的過程以及馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法；掌握番茄的生物學(xué)特性及快速繁殖方法； (2)掌握蘋果的脫 毒方法與快繁技術(shù)；掌握葡萄的脫毒與快技術(shù)；掌握草莓的脫 毒與快繁技術(shù)； (3)掌握蘭花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牽牛、百合等花卉的生物學(xué)特性，組培快速繁殖方法及自然繁殖法； (4)掌握甘薯的生物學(xué)特性，脫毒與快繁的方法及技術(shù)； (5

2、)掌握蘆薈、桔梗等藥用植物的快繁技術(shù)； (6)掌握毛白楊、河北楊等綠化苗木的快繁技術(shù),第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),本章教學(xué)目的與要求,第一節(jié) 蔬菜的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),馬鈴薯,蕃茄,一、馬鈴薯的組織培養(yǎng),第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,微型薯,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯是一種全球性的重要經(jīng)濟(jì)作物。適應(yīng)性廣，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，耐貯藏適運(yùn)輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調(diào)節(jié)市場(chǎng)供應(yīng)的重要蔬菜。馬鈴薯原產(chǎn)于拉丁美洲，當(dāng)被發(fā)現(xiàn)可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,危害有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病

3、毒、紡錘形塊莖病毒等。 馬鈴薯病毒可使塊莖產(chǎn)量減少50%80,馬鈴薯病毒的種類,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,1、形態(tài)特性 根 根系由出生根和匍匐根組成。 莖 分地上部分和地下部分。 葉 全緣，心臟形。 花 為聚傘花序。 果實(shí) 漿果,一）、馬鈴薯特性和生物學(xué)習(xí)性,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫和霜凍。 發(fā)芽適溫為1218。 地上莖葉生長(zhǎng)溫度為1721。 塊莖形成要求晝溫1424，夜溫1214。 結(jié)薯期要求12h左右的短日照和疏松、濕潤(rùn)、肥沃以及通氣良好的土壤條件。土壤板結(jié)，薯塊表面粗糙和薯形不整,2、 生物學(xué)習(xí)性,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,通過微莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)能從馬鈴薯體內(nèi)脫除P

4、LRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒,二）、馬鈴薯脫毒技術(shù),第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,全國(guó)現(xiàn)有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒,我國(guó)的馬鈴薯平均單產(chǎn)僅為13.60噸/公頃，是世界單產(chǎn)最高國(guó)這瑞士（48.80噸/公頃）的1/4。最主要的因素就是種薯質(zhì)量差，品種布局不合理,我國(guó)馬鈴薯栽培現(xiàn)狀,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,微莖尖組織培養(yǎng)-誘導(dǎo)出苗-聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法或指示植物方法鑒定-脫毒試管基礎(chǔ)苗。 固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合-擴(kuò)繁基礎(chǔ)苗-在防蟲網(wǎng)室栽植或封閉溫室扦插-原原種（或稱脫毒小薯）。原原種-原種1代-原種2代-

5、良種1代-良種2代,1脫毒種薯生產(chǎn)程序,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,1）莖尖消毒,一般在室內(nèi)發(fā)芽，芽經(jīng)熱處理（38）2周。然后取1厘米的莖尖，水洗干凈，無菌條件下先用70的酒精浸組織15-20秒，再用2次氯酸鈉溶液浸泡4-5min，然后用無菌水沖洗3次,2莖尖培養(yǎng)脫毒,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,把消毒芽在解剖鏡下逐層剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長(zhǎng)點(diǎn)，留1-2個(gè)葉原基，0.20.3毫米，隨即接種于MS液體培養(yǎng)基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，p H值5.8,取材和接種,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,溫度：2125 光照度：2000-3000 lx 光照時(shí)間：12h/d 2-

6、3周長(zhǎng)愈傷，4-5周長(zhǎng)綠點(diǎn)，3-6月長(zhǎng)成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉,培養(yǎng)條件,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,培養(yǎng)成功的馬鈴薯脫毒苗，經(jīng)ELISA（試劑盒）鑒定后（試管苗應(yīng)每3月檢測(cè)一次，每年4次）采用固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合方法擴(kuò)繁。 取試管苗單節(jié)切段扦插在（或平放）固體培養(yǎng)基上，每瓶可插20個(gè)左右莖段，經(jīng)20d左右發(fā)育成510cm高小植株，繼續(xù)進(jìn)行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖58倍，試管苗多節(jié)接種在液體培養(yǎng)基上，進(jìn)行淺層靜止液體培養(yǎng),2） 繼代和生根,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖； 20-25，3000-4000LX，14-16hr光

7、照； 每3周繼代一次，單芽莖段約1厘米； 原則試管苗用2年3年,馬鈴薯繼代培養(yǎng)基,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯試管苗,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,煉苗室溫度：白天2327，夜間不低于14。 煉苗具體方法：移植前7d左右，將長(zhǎng)有35片葉、高23cm的試管苗，在不開瓶口的狀態(tài)下，從培養(yǎng)室移至溫室排好。為防止強(qiáng)光、高溫灼傷試管苗，在溫室頂上加蓋一層黑色遮陽網(wǎng),3) 馴化,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,1、指示植物鑒定 在馬鈴薯的病毒鑒定中，汁液鑒定是最常用的方法，病毒、病毒和紡錘塊狀病毒很容易通過汁液來接種。 2、鑒定寄主的準(zhǔn)備 馬鈴薯常用的鑒定寄主植物有莧科的千日紅，茄科的洋酸漿、毛曼佗羅等。寄主植物應(yīng)在

8、無蟲網(wǎng)室中培養(yǎng),三）、馬鈴薯無病毒苗的鑒定材料,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,葉片洗凈后。在消毒的研缽中研成糊狀，用紗布濾出汁液，再用蒸餾水稀釋倍作為接種物(混入目的金剛砂)。 用左手心緊靠在鑒定寄主植物的背面，以右手指蘸取接種液，均勻的在葉背面擦過，以不造成葉片產(chǎn)生傷痕為度，最后把葉面上多余的接種物用清水洗凈，放置在的防蟲室中，一般天可發(fā)病,接種液制備及接種,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,直接塊莖繁殖 （） 扦插繁殖 （） 組織培養(yǎng)切段繁殖 A：繼代培養(yǎng) B：低溫保存,四）、馬鈴薯無病毒株的繁殖,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,二、番茄的組織培養(yǎng),一）、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性,番茄的葉片為長(zhǎng)羽狀，在葉軸上生有裂片，

9、頂生裂片，小裂片，間裂片，這些裂片是葉的深裂，缺刻的變化。兩性花，聚傘花序，漿果。 蕃茄耐低溫，喜光照，對(duì)水分需求量極大，喜肥，適于微酸性或中性土壤,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,二）、番茄的組織培養(yǎng),1、外植體：幼嫩葉片 。 2、消毒：用0.1%升汞浸泡4min，再用無菌水沖洗3-4次 。 3、愈傷組織培養(yǎng)條件：MS + BA2mg/L + IAA1mg/L ，溫度25，每天光照10h，光照度2000lx 。 4、分化培養(yǎng)：分化培養(yǎng)基MS+BA4中。 5、生根培養(yǎng)：MS+IAA2 mg/L。 6、煉苗栽植：將培養(yǎng)有根試管苗的瓶口打開。煅煉3d后取出，洗去根上帶有的培養(yǎng)基，移栽到營(yíng)養(yǎng)土中，澆透水，并罩

10、上塑料薄膜，以保溫保濕，4-5d后去掉薄膜，新葉長(zhǎng)出時(shí)即定植田間,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,三）、番茄的胚培養(yǎng),1、外植體制備：授粉后30-40d收獲果皮完整的果實(shí)，果實(shí)放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用無菌蒸餾水充分淋洗。果實(shí)放在無菌吸水紙上，除去種子上的膠狀復(fù)被。 2、培養(yǎng)基：?jiǎn)?dòng)：MS+硫胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰乳100ml/L，pH6.0；繼代： MS+ 2,4-D2mg/L；分化：MS+BA1.5mg/L；生根：MS+NAA2mg/L。 3、培養(yǎng)條件：愈傷組織啟動(dòng)和繼代，用暗培養(yǎng)，27。芽再生和生根在室溫20-30.16h/d 的光照，2000l

11、x,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,第二節(jié) 果樹的脫毒與快繁,葡萄,蘋果,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),草莓,一、蘋果的脫毒與快繁,一）、蘋果的形態(tài)特性和生物學(xué)特性,蘋果（Malus pumila）屬落葉喬木，樹木高大。果實(shí)為假果。 蘋果喜涼；喜光；適合在微酸性到中性土壤中栽種,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,二）、脫毒技術(shù),1、病毒種類：蘋果褪綠葉斑病毒、蘋果莖痘病毒和蘋果莖溝病毒等 。 2、微尖嫁接脫毒：砧木：去頂?shù)碾x體培養(yǎng)幼苗，接穗：試管培養(yǎng)的無毒新稍；嫁接后培養(yǎng)生葉，移栽即可。 3、熱處理脫毒：把植株置于38 下25-50天。 4、莖尖培養(yǎng)脫毒：把0.1-0.3mm的莖尖離體培養(yǎng)。 5、脫毒苗的鑒

12、定：抗血清法，電子 顯微鏡法，ELISA法、指示植物法,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,三）、蘋果莖尖脫毒快繁技術(shù),1、材料與消毒：帶芽或莖尖的莖段；常規(guī)消毒，用無菌水洗35次 ；切莖尖約0.10.5mm。 2、芽的誘導(dǎo)：MS或LS+BA2+300500CH或LH+3%蔗糖的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)芽的分化。 3、繼代增殖培養(yǎng)：MS+BA0.51+CH300 培養(yǎng)基上增殖。 4、生根培養(yǎng)：1/2MS或 White，Nitsh附加IAA1、IBA0.2和GA33 等,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,四）蘋果花粉培養(yǎng),1、選材與預(yù)處理：選取中心花蕾吐紅，周圍花蕾明顯增大，但花序尚未分離的花蕾，置于冰箱中1-3預(yù)處理。 2、消毒

13、：70%的酒精浸約0.5min，再在10%漂白粉上清夜中浸1520min。 3、胚狀體誘導(dǎo)：接種到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 38%蔗糖培養(yǎng)基上，2530下培養(yǎng)。 4、生根：同莖尖脫毒中所用方法,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,五）胚培養(yǎng),1、取材消毒：取授粉3050d內(nèi)的幼果，用70%酒精擦拭。取出種子，剝出幼胚或成熟胚。 2、啟動(dòng)培養(yǎng)：接種在BA0.25+IAA0.5的1/2MS培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為2530和15002000lx光照14h。 3、分化增殖：移植到加有BA0.51.0和CH300的1/2MS培養(yǎng)基上 ，在光下培養(yǎng)條件同上。 4、生根培養(yǎng)：同莖尖培養(yǎng),第二節(jié)

14、果樹脫毒與快繁,二、葡萄的脫毒與快繁,一）、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性 葡萄屬落葉木質(zhì)藤本植物，葡萄地上部分的莖細(xì)。節(jié)上具有卷須，可向上攀援。葉近圓型或卵型，35裂。 葡萄原產(chǎn)于溫帶地區(qū)，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在57時(shí)即受凍,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,二）、葡萄的組織培養(yǎng),1、選材接種：從生長(zhǎng)旺盛的葡萄新梢頂端取12的莖尖。消毒。分離出約2長(zhǎng)的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。 2、培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基（無機(jī)鹽減半為好），再添加BA12，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，瓊脂0.6%，而B5培養(yǎng)基愈傷組織化嚴(yán)重，莖尖生長(zhǎng)不好。 3、苗分化：BA0.5，同時(shí)添加GA30.2，黑暗處理可促進(jìn)幼莖的伸成，提高

15、成苗率。 4、根分化：將苗轉(zhuǎn)入MS+IAA0.4+NAA0.05培養(yǎng)基中進(jìn)行生根,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),葡萄受到26種病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的長(zhǎng)勢(shì)減弱，產(chǎn)量降低，果實(shí)的糖分含量減少，風(fēng)味變劣。葡萄卷葉病是危害最大的病毒病,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),1、熱處理脫毒： （1）葡萄無性系處理：材料置于38，CO2120010-6的人工空氣侯箱內(nèi)。經(jīng)30min處理，較易從枝條尖端或休眠芽中除去扇葉病毒。 （2）將感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38的環(huán)境中保持2個(gè)月，以后取出枝條和接種芽繼續(xù)生長(zhǎng)。 （3） 直接將葡萄蔓浸泡在50的

16、 溫水中1020min，可以治療皮爾斯病，但不能治療黃點(diǎn)病及卷葉病,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,2、組織培養(yǎng)脫毒技術(shù) （1）、莖尖接種后變綠、增大期的培養(yǎng)：在25，相對(duì)濕度80%，16h的長(zhǎng)日照條件下水培生成的嫩莖取0.20.3mm 莖尖接種于 1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，瓊脂6.0，pH5.8培養(yǎng)基上。 （2） 從畸形葉和莖葉伸長(zhǎng)期：采用1/2MS，添加IAA0.2，BA0.1，KT0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L的培養(yǎng)基。 （3）地上部和地下部的伸長(zhǎng)期：Galzy（1964）培養(yǎng)基，添加NAA0.1,三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),第二節(jié)果樹

17、脫毒與快繁,三、草莓的脫毒與快繁,一）、形態(tài)特征和生物習(xí)性 草莓（Fragaria）屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長(zhǎng)，基生三出復(fù)葉。果實(shí)為聚合瘦果生于花托上。 草莓喜光但又較耐陰，要求肥沃、疏松、透水、通氣的中性微酸性或微堿性土壤,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,二）、草莓脫毒苗的培養(yǎng),1、熱處理脫毒 將草莓植株在4041溫度下處理46周。 2、微莖尖脫毒 （1）、初代培養(yǎng) ：取草莓頂芽，用自來水流水沖洗24h，然后剝?nèi)ネ鈱尤~片，消毒， 切取0.2mm的莖尖。接入MS + BA0.25 + NAA0.25培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件為2225，日照1618h光強(qiáng)3000lx,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,二）

18、、草莓脫毒苗的培養(yǎng),2) 繼代培養(yǎng)：把芽叢割成芽叢小塊，轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中，令其長(zhǎng)大 。并進(jìn)行分株，擴(kuò)大繁殖。 (3) 生根培養(yǎng)：在培養(yǎng)基中加入NAA1或IBA1,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,第三節(jié) 花卉植物的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、蘭花的脫毒與快繁,蘭花系蘭科(Orchidaceae)植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長(zhǎng)期進(jìn)行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長(zhǎng),第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),1、莖尖的培養(yǎng) (1) 取材消毒：將芽除去葉后，用水沖洗，再用10的漂白粉表面滅菌15min。除

19、去葉原基后，用5的漂白粉中滅菌l0min，以后用無菌水沖洗35次。切取莖尖和腋芽，約23mm，接種到培養(yǎng)基中。 (2)培養(yǎng)基：采用Vacin和Went培養(yǎng)基，添加15CM進(jìn)行液體培養(yǎng)，或加9gL的瓊脂進(jìn)行固體培養(yǎng)。 (3)培養(yǎng)條件：為溫度25，光照強(qiáng)度2000Lx，照明1624h。液體培養(yǎng)基用60rmin的速度進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)1個(gè)月即可形成原球莖球狀體，即可進(jìn)行繼代增殖,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),2.花梗腋芽的培養(yǎng) (1)采芽：將帶腋芽的花梗進(jìn)行沖洗，用10的漂白粉溶液表面滅菌20min，除去腋芽的苞葉，再在5的漂白粉溶液中表面滅菌3min，無菌水沖洗凈。僅取腋芽，

20、接種到培養(yǎng)基上。 (2)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：用德蘭屬1號(hào)培養(yǎng)基培養(yǎng)原球狀體，育苗用卡德蘭屬1號(hào)加10香蕉汁；培養(yǎng)條件是光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間每天13h，保持恒溫25。 (3)繼代培養(yǎng)：用原球莖球狀體繁殖。 (4)育苗：不切塊繼續(xù)培養(yǎng)即可分化產(chǎn)生葉片，移到育苗的培養(yǎng)基，36個(gè)月可得到能栽植的苗,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),3.葉片的培養(yǎng)： (1)取材：葉片是從試管內(nèi)培養(yǎng)的材料上切取。取展開葉最上部先端、中央或基部約68mm2 。 (2)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：用 Kyoto改良培養(yǎng)基，加復(fù)合肥料3.5gL、肌醇1000、煙酸1、維生素B11、NAAl、腺嘌呤10、BAl0

21、、蔗糖2、瓊脂1.0。 25恒溫，光照500Lx,日照16h。 (3)繼代培養(yǎng)：用改良的Kyoto培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，或在Vacin和Went培養(yǎng)基中去掉蔗糖和瓊脂，加20的CM的液體培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。 (4)育苗：原球莖球狀體23個(gè)月即可萌芽，形成細(xì)苗，以后轉(zhuǎn)移到Kyoto培養(yǎng)基，加10的香蕉汁，經(jīng)數(shù)月后可得到能移f栽的大苗,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、卡特蘭的培養(yǎng),1.取材和消毒：選擇510cm長(zhǎng)的嫩莖，從基部采芽。先用流水沖洗，切去葉片酒精，漂白粉等消毒。 2.培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：MS基本培養(yǎng)基，附加維生素，氨基酸，NAA0.186mgL，Kt0.02mgL，GA30.173m

22、gL，蔗糖30gL，瓊脂6gL，不加CM。啟動(dòng)培養(yǎng)溫度1520，成活以后，則保持在25。光照強(qiáng)度500-2000Lx，照明1622h。 3.防止培養(yǎng)材料變褐方法：(1)采芽后，用無菌水沖洗再接種 (2) 在培養(yǎng)基中加(50100)10-6蕓香甙。 (2) 開始培養(yǎng)到成活，保持溫度1520。 (4) 調(diào)pH值至5.5，減輕褐化，提高成活率。 (5)避免68月采芽（由于多酚類物質(zhì)的積累，褐化較嚴(yán)重,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二、香石竹的組織培養(yǎng),香石竹為石竹科石竹屬草本植物，原產(chǎn)南歐地中海北岸。須根系，莖直立，多分枝，株高70100cm，莖部半木質(zhì)化。葉線狀披針形，全緣，葉質(zhì)較厚，上半部向外

23、彎曲，對(duì)生，基部抱莖?；ㄍǔ紊?3朵聚傘狀排列。 石竹是一種中日性花卉。喜干燥、通風(fēng)，喜冷涼，最適宜的生長(zhǎng)溫度為1921，忌高溫多濕。喜保肥、通氣、排水良好的腐殖質(zhì)或砂質(zhì)壤土，最適宜的土壤pH值為66.5,一）形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、組織培養(yǎng)育苗,1、取材滅菌： 取長(zhǎng)勢(shì)健壯植株上較為粗壯的嫩芽，剝?nèi)コ墒烊~片，在清水中清洗后，常規(guī)消毒，切取0.3-0.4mm的莖尖。 2、培養(yǎng)基：選用MS或White培養(yǎng)基。附加BA或KT 052mgL(單位下同)；NAA、IAA濃度為022，2,4-D為0.11。 3、分化增殖： 于MS附加BA2，IAA0.5進(jìn)行分化；于

24、MS附加BA0.52、IAA0. 5進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)。 4、生根：于1/2MS上，溫度2025，光照強(qiáng)度20001x光照1012h/d,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,三、菊花的組織培養(yǎng),菊花系多年生植物，株高60-180cm，莖直立粗壯，多分枝。葉形大，互生，葉片有深缺刻。花序單生或聚生，邊緣為舌狀花，中部為筒狀花，也有全為舌狀或筒狀花的，形狀各異，種子為細(xì)小的瘦果，中間膨大，兩端突出。 適宜的生育溫度為15-25，喜陽光充足，通風(fēng)良好，在光照條件下生長(zhǎng)健壯。比較耐旱，不耐潮濕，忌低洼積水。秋菊、冬菊為典型的短日照植物，只有光照長(zhǎng)度在12h以下時(shí)才能開花,一）形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉

25、植物的 脫毒與快繁,二）、菊花的組織培養(yǎng)快速繁殖,1、取材：外植體很多，如莖段、側(cè)芽、葉、花序梗、花序軸等，但最好采用莖尖或側(cè)芽，其次是花序軸。經(jīng)一般 滅菌過程后即可接種。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：MS、B5、N6、White 均可，多用MS。附加BA23mgL，NAA00202mgL。 于2228（2426最佳）。光照1216h/d，光強(qiáng)10004000Lx,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、菊花的組織培養(yǎng)快速繁殖,3、繼代培養(yǎng) ：可通過莖尖直接分化出新芽，或經(jīng)愈傷組織分化出新芽；也可用莖切段作微型扦插繁殖（MS或MS+NAA0.1） 。 4、生根和移栽 ：將無根幼苗轉(zhuǎn)入12 MS+NAA

26、(或IBA)0.1的培養(yǎng)基中，經(jīng)兩周即可生根（培養(yǎng)條件同上）,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,三）、菊花花瓣的培養(yǎng),1、取材：在菊花開花前23d將整個(gè)花蕾剪下，沖洗十幾分鐘，用75的酒精浸泡1015min進(jìn)行表面滅菌，后用無菌水沖洗兩次，再用10的漂白粉澄清液浸泡20min后。切取舌狀花約5mm見方大小 。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：MS培養(yǎng)基，添加BAl3mg/L，NAA0.52mgL。置于溫度25左右，光照強(qiáng)度2000Lx，每天照光12h的條件下培養(yǎng)，或獲得愈傷組織,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,四）、菊花的脫毒,危害菊花的病毒有：菊花斑紋病毒；菊花矮縮類病毒；菊花輕斑駁病毒；番茄不孕病毒。

27、此外還有畸花病毒、綠花病毒、褪綠斑駁病毒、花葉病毒等,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,1、莖尖培養(yǎng)脫毒：取頂芽或腋芽經(jīng)表面消毒后，切取0.5mm以下莖尖進(jìn)行培養(yǎng)脫毒。 2、熱處理脫毒：在3536的條件下栽培2個(gè)月，可以達(dá)到脫毒的效果（但是熱處理只能除去菊花矮縮類病毒和番茄不孕病毒,四、非洲菊的組織培養(yǎng),非洲菊(Gerbera hybrida)屬菊科大丁草屬，多年生宿根草本花卉。全株具細(xì)毛，葉片基生，橢圓至長(zhǎng)橢圓形?；ㄐ蝽斏?，舌狀花較大，排列成一輪或數(shù)輪。 非洲菊性喜冬季溫和，夏季涼爽的氣候條件。最適生長(zhǎng)溫度為2025。45月和810月為盛花期。喜陽光充足的環(huán)境。土壤要求有機(jī)質(zhì)豐富、排水良好、p

28、H值為66.5的微酸性壤土,一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、非洲菊組織培養(yǎng)育苗,1、取材消毒：常用花托作為外植體，用0.1的吐溫浸泡1015min，取出洗凈后再放入0.1氯化汞中消毒20min。將花托切成2-3mm見方的小塊。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：初代培養(yǎng)基為MS+BA2mgL(單位下同)十NAA0.2 + IAA0.2。培養(yǎng)條件為24土2，光照強(qiáng)度為200030001x，每天光照1216h。 3、分化生根：轉(zhuǎn)入MS+Kt5+IAA0.2培養(yǎng)基進(jìn)行分化培養(yǎng)。待苗高2cm時(shí)，轉(zhuǎn)移到I2 MS 十 NAA0.1生根培養(yǎng)基中生根,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,五

29、、矮牽牛的組織培養(yǎng),矮牽牛(Petunia bybrida)，又名碧冬茄，茄科，矮牽牛屬。多年生草本植物，株高4060cm，莖直立或臥倒，全身被短毛。上部葉片對(duì)生，中下部葉片互生，卵圓形?；▎紊谥敾蛉~腋間，花冠喇叭狀，花色豐富，朔果卵形。 矮牽牛原產(chǎn)南美洲。喜溫暖，向陽和通風(fēng)良好的環(huán)境條件，不耐寒，耐暑熱，在炎熱的夏季仍能正常開花，要求排水良好疏松的酸性沙質(zhì)土地,一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、矮牽牛組織培養(yǎng)育苗,1、葉片培養(yǎng) ：選擇嫩葉作為外植體，進(jìn)行常規(guī)消毒后將其切成5mm見方，接種到MS + BA0.5的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織及叢生芽。所得芽叢接種于M

30、S+BA0.05的繼代培養(yǎng)基上,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,2、莖尖莖段接種：選擇莖尖、帶芽的莖段作為外植體。消毒后，切取莖尖0.5cm或帶腋芽莖段lcm接種到MS+BA1+IBA0.02的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。1周后，芽開始萌動(dòng)，逐漸長(zhǎng)大成新梢。繼代可用切割莖段法進(jìn)行,六、百合的組織培養(yǎng),百合是百合科(Liliaceae)百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草本植物。鱗莖無皮，廣卵形，白色或黃白色，莖高3090cm，直立，上葉多而散生，披針形?；▎紊驍?shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香。 百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以利于鱗莖發(fā)育。百合喜微酸性土壤，土壤pH值在5.56

31、.5最為適宜,一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,二）、繁殖方法,1、分球：使用百合老鱗莖(母球)生長(zhǎng)過程中于莖軸上逐漸形成小鱗莖 進(jìn)行繁殖。 2、鱗片扦插：使用成熟鱗葉進(jìn)行扦插。 3、葉插及分珠芽：使用地上莖進(jìn)行扦插，或使用腋生珠芽進(jìn)行繁殖。 4、播種,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,1、花器的組織培養(yǎng) (1)、取材和滅菌：采取開花前數(shù)日的花蕾。花蕾的表面用酒精滅菌，再在酒精燈上灼燒數(shù)秒鐘，在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)剝開花蕾，花絲，子房，花柱等分別切取35mm長(zhǎng)，接種到培養(yǎng)基上。也可用花瓣和萼片培養(yǎng)。 (2)、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件：采用MS，KC等培養(yǎng)基，蔗糖濃度以7.0為適，發(fā)芽和

32、子球形成率可達(dá)90左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保溫20,三）、百合組織培養(yǎng)育苗,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,2、鱗片組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng)：切取0.5cm見方鱗片小塊接人MS+2,4-D1+IAAI+Kt0.5培養(yǎng)基中，置于20土2，照光9-10hd，光強(qiáng)1200Lx條件下培養(yǎng)。 誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽,三）、百合組織培養(yǎng)育苗,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,繼代培養(yǎng)：將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基（MS + NAA2 + IBAO.4 + Kt0.05）上，10周后，可分化出許多大小不等的鱗莖，并在小鱗莖的基部長(zhǎng)出許多粗壯的根,第四節(jié) 農(nóng)作物的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速

33、繁殖技術(shù),一、甘薯的脫毒與快繁,甘薯（Ipomoea batatas L. Lam）屬于旋花科，是一年生植物。我國(guó)近年來甘薯種植面積達(dá)到666.7萬公頃，占世界的80%以上。病毒病成為我國(guó)甘薯生產(chǎn)的最大障礙之一。 如：甘薯花椰菜花葉病毒（SPCLV），甘薯羽狀斑駁病毒（SPFMV），甘薯潛隱病毒（SPLV），甘薯脈花葉病毒（SPVMV），甘薯輕斑駁病毒（SPMMV），甘薯黃矮病毒（SPYDV），煙草花葉病毒（TMV），煙草條紋病毒（TSV），黃瓜花葉病毒（CMV）等,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,一）、甘薯脫毒,1、取材：取枝條，去葉切成數(shù)段。每段帶一個(gè)腋芽。 2、消毒：常規(guī)消毒。 3、剝離莖

34、尖：剝?nèi)ロ斞亢鸵秆可陷^大的幼葉，切取0.3-0.5毫米含1-2個(gè)葉原基的莖尖組織，接種在培養(yǎng)基上。 4、莖尖培養(yǎng)培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基為MS+0.1-0.2mg/L IAA+0.1-0.2mg/L BA ；培養(yǎng)于溫度25-28，光照度1500-2000lx，光照14h/d的條件下。 5、莖尖苗的初級(jí)快繁：將小植株切段進(jìn)行短枝扦插。切段直插于MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同莖尖培養(yǎng)。 6、脫毒鑒定：病毒病癥狀學(xué)診斷法、指示植物檢定法、電子顯微鏡檢定法、血清學(xué)檢測(cè)法,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,二）、甘薯的快繁,1、脫毒苗的快繁：可使用1/2或1/4MS（大量元素）培養(yǎng)基進(jìn)行增殖。 2、原原種的繁育

35、：在無病毒土壤上種脫毒苗，讓其結(jié)薯，即為原原種薯 。 3、原種的繁育 ：以原原種為種植材料在無病毒土壤中栽種，結(jié)薯即為原種。 4、種薯的繁育 ：種薯可分為不同的等級(jí)，一級(jí)種薯的生產(chǎn)要求：在隔離地塊上栽培原種，地塊四周500米以內(nèi)的范圍內(nèi)不栽甘薯，種薯每種一年降一級(jí),第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,三）、脫毒試管苗的大規(guī)模移栽技術(shù)及管理方法,1培育壯苗 2適當(dāng)煉苗 3精心移栽 4控制濕、溫、光等條件 5適時(shí)定植 6嚴(yán)防病蟲害,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,第五節(jié) 藥用植物的試管快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、蘆薈的試管快繁,百合科蘆薈屬植物共有300多種， 為多年生常綠植物，分布于

36、熱帶和來 熱帶地區(qū)。由于蘆薈具有多種藥用功效 和保健美容作用，近年來，蘆薈產(chǎn)業(yè)已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外成為新的開發(fā)熱點(diǎn)。 蘆薈植株生長(zhǎng)數(shù)年后才開花結(jié)實(shí)，種子一般也很少，而且種子細(xì)小，又不耐保存，存放一年后發(fā)芽率就很低。 生產(chǎn)上常用的扦插和分株法都不能在短時(shí)間內(nèi)提供大量種苗。因此，只有通過組織培養(yǎng)快繁方法，才能生產(chǎn)出大小一致、性狀穩(wěn)定的優(yōu)良種苗,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,一、蘆薈的試管快繁,1初代培養(yǎng)物的建立：采用莖段和腋芽作為外植體 ，以MS為基本培養(yǎng)基，NAA為0.2mg/L，BA3-5mg/L 2取材與消毒 ：截取上端嫩芽或側(cè)芽，將生長(zhǎng)點(diǎn)切成1-2cm的小塊，沖洗干凈，然后用2%洗潔精或飽和洗衣粉

37、搖動(dòng)5分鐘。然后用70%的酒精滅菌1分鐘，立即用0.15%升汞溶液再滅菌10分鐘。最后用無菌水沖洗4-5次。 3培養(yǎng)條件：溫度263，光照10-12h/d，照度為1000-1500lx，空氣濕度大，有利蘆薈生長(zhǎng),第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,二、桔梗的組織培養(yǎng),桔梗為桔?？茖俣嗄晟荼局参?。株高3090cm。根肥大肉質(zhì)，圓錐形，莖直立，葉片卵狀至卵狀披針形，先端尖，基部楔形或近圓形，邊緣有不規(guī)則鋸齒，花單生或數(shù)朵成疏生的總狀花序；花冠呈狀，藍(lán)紫色或白色，大型，直徑35cm。蒴果倒卵圓形，成熟時(shí)先端裂開。 桔梗喜歡生長(zhǎng)在陽光充足，溫暖濕潤(rùn)，雨量充沛的丘陵地區(qū),一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第五節(jié)

38、藥用植物的 試管快繁,二）、桔梗的快繁,播種：用種量0.5-1公斤/畝，播后畦面蓋稻草保濕。播后半月左右即可發(fā)芽出苗。 、 組織培養(yǎng)：一般用莖尖和莖段作為外植體，接種和培養(yǎng)方法參照其他作物的方法。 、 移栽：桔梗喜肥，生長(zhǎng)期間宜多施追肥，一般結(jié)合中耕除草時(shí)追肥。第一次畝施稀淡人畜糞廢水10001500公斤，第二次畝施豬烘水15002000公斤，促進(jìn)根部生長(zhǎng)肥大，注意雨季排水,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、毛白楊的快繁,1、無菌苗的建立 采用休眠芽作外植體，經(jīng)消毒后，削取2mm長(zhǎng)，帶有23個(gè)幼葉的莖尖 ，接種于MS + 0.5m

39、g/LBA + 水解乳蛋白100mg/L的預(yù)培養(yǎng)基上，經(jīng)56d后，選擇未污染的莖尖轉(zhuǎn)MS + 0.5mg/LBA + 0.02mg/LNAA + 賴氨酸100mg/L上。 培養(yǎng)室溫度2527,日光燈連續(xù)照光，光照度為1000lx左右。經(jīng)23個(gè)月培養(yǎng)，部分莖尖即可分化出芽,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,一、毛白楊的快繁,2、擴(kuò)大繁殖 （1）莖切段生芽擴(kuò)大繁殖法：取誘導(dǎo)出的幼芽，從基部切下，轉(zhuǎn)接到新的生根培養(yǎng)基上。（MS + 0.25mg/L IBA + 鹽酸硫胺素10mg/L + 蔗糖濃度為1.5%）。 （2）葉切塊生芽擴(kuò)大繁殖法：從葉基部中脈處切取11.5cm并帶有約0.5cm長(zhǎng)葉柄的葉切塊，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（MS+0.25mg/L IAA+3%蔗糖+7%瓊脂）。約經(jīng)10d培養(yǎng)，即可從葉柄的切口處觀察到有芽出現(xiàn)，之后逐漸增多成簇,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,一、毛白楊的快繁,3、移栽與管理：打開瓶口煉苗，逐漸降低濕度，并逐漸增強(qiáng)光度，進(jìn)行馴化，使新葉逐漸形成蠟質(zhì)，產(chǎn)生表皮毛，逐漸恢復(fù)氣孔功能，減少水分散失。初始光照應(yīng)為日光的1/10