細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生檢驗種類及標(biāo)準(zhǔn)

1、1,第七章 細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生檢驗種類及標(biāo)準(zhǔn),2,主要內(nèi)容,3,臨床感染性疾病的診斷和治療,應(yīng)用良好的檢測技術(shù)和方法，提供準(zhǔn)確的結(jié)果或報告,確定檢查目的和方法,臨床檢驗流程,4,細(xì)菌學(xué)鑒定方法,1、形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查 2、細(xì)菌生長特性檢查如菌落 3、生化試驗 4、血清學(xué)試驗 5、藥敏試驗 6、細(xì)菌毒素檢測 7、分子生物學(xué)檢測 8、噬菌體分型試驗 9、動物試驗,5,臨床標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢驗程序,標(biāo)本選擇,標(biāo)本采集與運(yùn)送,觀察標(biāo)本、前處理,直接涂片,快速檢驗,分離培養(yǎng),增菌培養(yǎng),可疑菌落,血清學(xué)鑒定,藥物敏感試驗,生化反應(yīng),形態(tài)觀察,結(jié)果報告,6,細(xì)菌學(xué)檢驗報告原則,分級報告 一級報告：直接涂片染色結(jié)果及培養(yǎng)結(jié)果

2、 二級報告：分離培養(yǎng)及藥敏結(jié)果 三級報告：細(xì)菌種屬、藥敏結(jié)果、結(jié)果評價和建議,7,8,無菌原則,正確采 樣時間,正確采 樣部位,足夠樣本量,多樣性采集 做好記錄,標(biāo)本采集的一般原則,9,一、血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 二、腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 三、穿刺液和引流液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 四、尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 五、膿液和分泌物標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 六、痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 七、生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗 八、糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,10,一、血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,11,（一）血液標(biāo)本的采集與送檢 1. 采樣時間：發(fā)熱期、用藥之前、 病情發(fā)展 2. 采樣部位及頻率：多部位、高頻率 例1：亞急性心內(nèi)膜炎：24h內(nèi)在三個不同部位采集3次

3、血標(biāo)本，兩次間隔不少于15分鐘，如培養(yǎng)陰性，就再采3次血標(biāo)本。 例2：急性膿毒血癥：在10分鐘內(nèi)在不同部位采23次血標(biāo)本。,12,3. 樣本采集的量：成人血量510ml，嬰兒1ml2ml，兒童3ml5ml；當(dāng)懷疑為真菌感染時，應(yīng)采集雙份量，分別作雙相培養(yǎng)(37/28)。 4. 樣本的送檢：盡快，室溫 5. 操作：直接采血注入含増菌肉湯的培養(yǎng)瓶或用不含防腐劑的肝素抗凝管至實驗室接種，需同時做需氧和厭氧培養(yǎng),13,血培養(yǎng),一級報告,二級報告,三級報告,“檢出*菌”，藥敏試驗結(jié)果； 7天仍無生長現(xiàn)象，報告為“7 天培養(yǎng)無細(xì)菌生長”（結(jié)核可 培養(yǎng)8周報告陰性）,14,（二）細(xì)菌學(xué)檢驗,15,（一）標(biāo)本

4、的采集與送檢 1. 采樣：腰椎穿刺術(shù)無菌采集腦脊液3-5ml，床邊接種或放入無菌試管中，立即送檢（采樣到送檢不超過1h）； 2.注意保溫，不可置冰箱保存，因為會使病原菌死亡，尤其是腦膜炎奈瑟氏菌、肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌； 3、腦膿腫吸出物尚須檢測厭氧菌和寄生蟲 培養(yǎng)基選擇：普通血培養(yǎng)瓶、厭氧血培養(yǎng)瓶、血平皿、中國藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿等。,二、腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,16,（二）細(xì)菌學(xué)檢查 1涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌，尤其腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和鏈球菌多見?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。墨汁染色：查找新型隱球菌。 2細(xì)菌培養(yǎng)：腦脊髓液培養(yǎng)多數(shù)需34天，在此期間如有細(xì)菌生長，經(jīng)鑒定報告

5、“菌”，同時報告藥敏試驗結(jié)果。,17,床邊接種,報告單,18,三、穿刺液和引流液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,（一）標(biāo)本的采集與送檢 1、標(biāo)本來源：胸腔積液、腹水、心包積液、關(guān)節(jié)液、膽汁、鞘膜液深部組織液等 2、標(biāo)本量：心包積液、關(guān)節(jié)液為1-5ml，胸腔積液、腹水為5-10ml 3、收集送檢：無菌收集并置于無菌抗凝試管送檢，無法立即送檢可冷藏；標(biāo)本還可床邊接種或置厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢，無法立即送檢可室溫保存。,19,（二）細(xì)菌學(xué)檢查,1、標(biāo)本處理：漿液離心沉淀物涂片；膿液直接涂片；含血細(xì)胞，加等量蒸餾水破壞紅細(xì)胞后，離心沉淀物涂片 2、涂片檢查：這類標(biāo)本因原部位是無菌的，只要檢出細(xì)菌即可診斷感染的類型，故直

6、接涂片很重要。革蘭染色：查找一般細(xì)菌?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。 3、分離培養(yǎng)及鑒定：離心沉淀物分別接種增菌肉湯、血瓊脂平板、中國藍(lán)或麥康凱瓊脂平板、厭氧血瓊脂平板。如有細(xì)菌生長，需進(jìn)一步鑒定和藥敏試驗后報告。,20,四、尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,（一）標(biāo)本的采集與送檢 1、采集方法：防止尿液被尿道口菌群污染，采用中段尿采集法、導(dǎo)尿法和膀胱穿刺法采集標(biāo)本 無菌導(dǎo)尿管采集尿液，在排出15ml尿液后收集，有潛在引入尿道菌的危險；留置導(dǎo)尿管采尿，先以75%酒精消毒導(dǎo)管口，用無菌注射器收集10ml；長期留置導(dǎo)尿管患者，應(yīng)在更換新尿管時留取尿標(biāo)本。,21,2、采集時間：通常應(yīng)采集早晨起床后第一次尿液，在抗菌

7、藥物應(yīng)用之前采集尿液10-15ml 3、送檢：及時送檢，室溫不超過2h；冷藏不超過8h；淋病奈瑟菌和厭氧菌培養(yǎng)應(yīng)保溫送檢。,22,（二）細(xì)菌學(xué)檢查,1、顯微鏡檢查：離心沉淀物涂片。根據(jù)臨床情況選擇染色方法如革蘭染色和呂氏美藍(lán)染色（淋球菌）、抗酸染色（結(jié)核分枝桿菌）、暗視野顯微鏡直接觀察（鉤端螺旋體）。 2、分離培養(yǎng)及鑒定：必須做傾注培養(yǎng)法計數(shù)尿液菌，培養(yǎng)結(jié)果才有臨床意義。 離心沉淀物分別接種血瓊脂平板、中國藍(lán)或麥康凱瓊脂平板或疑似菌相應(yīng)培養(yǎng)基，可疑菌落進(jìn)行涂片、染色、生化鑒定、藥敏等。,23,3、結(jié)果報告 涂片鏡檢，報告形態(tài)特點和染色情況； 尿液細(xì)菌計數(shù)，如為革蘭陽性菌104CFUm1；如為革

8、蘭陰性菌105CFUm1，可診斷為泌尿系感染。 10的尿路感染者可能在同份尿標(biāo)本中分離到兩種細(xì)菌，并都是病原菌。但當(dāng)檢出3種或以上不同微生物，認(rèn)為標(biāo)本被污染。 分離到的細(xì)菌，經(jīng)鑒定及藥敏試驗后，可報告“檢出*菌，藥敏結(jié)果是*”；48h無細(xì)菌生長，報告陰性。報告“2天培養(yǎng)無細(xì)菌生長”。,24,尿液檢查,尿液標(biāo)本,離心沉淀涂片,可疑菌落,血清學(xué)鑒定,藥物敏感試驗,生化反應(yīng),形態(tài)觀察,尿液菌落計數(shù),接種平板分離培養(yǎng),報告 結(jié)果,25,（一）標(biāo)本的采集與送檢 拭子采集法、紗布條采集法、注射器抽吸法 開放式膿腫 封閉式膿腫 大面積燒傷 瘺管采樣 樣品不能及時送檢可冷藏； 厭氧培養(yǎng)要床邊接種或厭氧運(yùn)送。,

9、五、膿液和分泌物標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,清洗后，棉拭子直接采樣,切開排膿時用無菌棉拭子采樣或注射器抽吸,可多部位棉拭子采集創(chuàng)面分泌物,紗布條塞入瘺管或棉拭子采樣,26,（二）細(xì)菌學(xué)檢查,1、涂片檢查：革蘭染色：可檢查一般細(xì)菌，特別注意真菌及放線菌存在。 抗酸染色：找結(jié)核分枝桿菌(部分奴卡菌也可陽性) 2、分離培養(yǎng)及鑒定：分泌物或膿液分別接種血瓊脂平板、中國藍(lán)或麥康凱瓊脂平板或疑似菌相應(yīng)培養(yǎng)基，可疑菌落進(jìn)行涂片、染色、生化鑒定、藥敏等。 3、結(jié)果：一般培養(yǎng)2日，以為諾卡菌培養(yǎng)7天，厭氧菌3-5天，報告結(jié)果。,27,28,（一）標(biāo)本的采集與送檢 1、采樣時間及類型：使用抗生素前采集。用清水反復(fù)漱口后取第2

10、或3口的晨痰；就診時深呼吸后咳出的即時痰；送痰前一日，晚間咳出的痰液。 2、采樣方法 自然咳痰法 拭子采集法 小兒取痰法 特殊取痰法,呼吸道深部痰，可霧化使痰易排出,壓住舌根，棉拭子反復(fù)涂抹咽后壁或懸雍垂后側(cè),壓舌，棉拭子深入咽部，刺激咳出分泌物,胃內(nèi)采痰法、支氣管鏡等特殊方法,六、痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,29,3、送檢：樣品不能及時送檢室溫不超過2h；結(jié)核或真菌痰液冷藏。 4、標(biāo)本質(zhì)量：標(biāo)本量一般在3-5ml，標(biāo)本性狀屬于干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、粘液痰者為合格的標(biāo)本,30,（二）痰液細(xì)菌學(xué)檢查,痰液標(biāo)本,膿性或帶血 部分涂片,可疑菌落,血清學(xué)鑒定,藥物敏感試驗,生化反應(yīng),形態(tài)觀察

11、,稀釋后接種平 板分離培養(yǎng),報告 結(jié)果,31,（一）標(biāo)本的采集與送檢 1、采樣方法 生殖道分泌物 穿刺液標(biāo)本 懷疑梅毒患者 前列腺液 2、送檢 普通細(xì)菌、衣原體、支原體 淋病奈瑟球菌 厭氧菌,清洗尿道口外陰，棉拭子深入尿道口2-3cm采集；陰道分泌物在陰窺鏡下采集,盆腔膿腫者及子宮分泌物需穿刺采集,清洗生殖器，從潰瘍底部擠出少許組織液,按摩前列腺后采集,七、生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,無法及時送檢可冷藏保存,床邊接種或保溫后及時送檢,室溫，厭氧送檢或床邊接種,32,（二）細(xì)菌學(xué)檢驗 1、顯微鏡檢查 2、分離培養(yǎng)及鑒定 3、結(jié)果報告,33,（一）標(biāo)本的采集與送檢 1、采樣方法 1、常規(guī)培養(yǎng)不主張用肛拭子，自然排便后，挑取有膿液、粘液部位的糞便2-3g或液狀糞便1-2ml； 2、直腸拭子法：不易獲得糞便時或排便困難的患者及幼兒，可采用直腸拭子方法采集； 2、送檢 不能及時送檢放入卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0磷酸鹽甘油運(yùn)送或保存。疑似霍亂弧菌，堿性蛋白胨水運(yùn)送保存。,八、糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗,34,（二）細(xì)菌學(xué)檢