免疫SOP：乙肝e抗體作業(yè)指導(dǎo)書

1、33文件編號(hào)：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書 Elecsys E 170/E 411乙乙肝e抗體1. 分析原理采用競(jìng)爭(zhēng)法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。 第1步：35l標(biāo)本與加入的HBe抗原液混勻。標(biāo)本中的抗- HBe與HBe抗原結(jié)合 第2步：加入生物素化的和釕標(biāo)記的抗HBe抗體以及鏈霉親和素包被的微粒，HBe抗原上仍然游離的位點(diǎn)被占據(jù)。形成的免疫復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)

2、光，通過光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。Elecsys自動(dòng)將標(biāo)本產(chǎn)生的光電信號(hào)與從抗HBe定標(biāo)液得出的Cutoff值相比較。2. 標(biāo)本要求標(biāo)本采集和準(zhǔn)備：血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素鈉、EDTA-K3、枸櫞酸鈉或氟化鈉/草酸鉀抗凝。標(biāo)本在28度可穩(wěn)定5天，-20度可穩(wěn)定3個(gè)月。標(biāo)本可凍融6次。有沉淀的標(biāo)本使用前需離心。加熱滅活的標(biāo)本可使用。標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前的溫度應(yīng)與室溫平衡。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力： 470ng生物素

3、/mg粒子。含防腐劑。R1：HBeAg（灰蓋），1瓶，12ml：HBeAg（E.coli，rDNA）濃度高于7ng/ml，HEPES緩沖液0.036mol/l，pH7.4，含防腐劑。R2：生物素化的抗HBeAg抗體;Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗HBeAg抗體（黑蓋），1瓶，12ml：生物素化的抗HBeAg單克隆抗體濃度高于0.8mg/l；Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗HBeAg單克隆抗體濃度高于0.2mg/l；HEPES緩沖液0.036mol/l，pH7.4，含防腐劑。校準(zhǔn)品：Cal 1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶，1.0ml/瓶人血清, 含防腐劑Cal 2 陽性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶，1.0ml/

4、瓶, 抗HBe（人）濃度高于3PEIU*/ml,人血清, 含防腐劑。（注：* PaulEhrlich 研究所單位）質(zhì)控品：Elecsys 抗HBe質(zhì)控品1和2 （PreciControl 抗HBe）貨號(hào)1876384其他所需材料： Elecsys通用稀釋液貨號(hào)1732277 Elecsys2010分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）貨號(hào)1662988 Elecsys測(cè)量池清洗液（CleanCell）貨號(hào)1662970 Elecsys 添加劑液（SysWash）貨號(hào)1930346 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號(hào)12985004. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診

5、斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批試劑盒必須用新鮮試劑和抗HBe Cal 1,Cal 2定標(biāo)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)：Elecsys2010： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)； 根據(jù)規(guī)定進(jìn)行多次標(biāo)定。定標(biāo)液范圍：(電化學(xué)發(fā)光信號(hào)計(jì)數(shù)) 陰性（Cal 1） 300，000-1，500，000陽性（Cal 2） 1000-60005. 操作方法按儀器操作說明進(jìn)行操作。檢查試劑與消耗品是否充足。使用前需混勻微粒。儀器通過掃描試劑盒條形碼自動(dòng)輸入測(cè)試所需的特異性參

6、數(shù)，不需手工輸入。如果特殊情況下儀器無法閱讀條形碼，可以手工輸入15位數(shù)字。Elecsys2010：將冷藏試劑預(yù)溫到20 度后放置于儀器的試劑盤上，避免產(chǎn)生泡沫。系統(tǒng)自動(dòng)控制試劑溫度和開/關(guān)試劑瓶蓋。將抗HBeCal 1和Cal 2放在分析儀的標(biāo)本測(cè)試區(qū)。只在標(biāo)定時(shí)打開瓶蓋。條形碼自動(dòng)提供定標(biāo)所需的數(shù)據(jù)資料。定標(biāo)完成后，將Cal 1和Cal 2放回28 度保存。6. 質(zhì)量控制用Elecsys抗HBe質(zhì)控品1和2（PreciControl）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正

7、措施。7. 計(jì)算方法儀器會(huì)自動(dòng)根據(jù)Cal 1和Cal 2的測(cè)定值計(jì)算Cut-off值。每一個(gè)標(biāo)本的結(jié)果以有反應(yīng)性或無反應(yīng)性以及Cutoff指數(shù)形式（標(biāo)本信號(hào)/ Cutoff）報(bào)告。8. 參考范圍在隨機(jī)選擇的1000名健康供血者當(dāng)中，有14例（1.4%）抗HBe有反應(yīng)性；用該項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)251例慢性或曾經(jīng)感染過HBV的患者中，210例呈現(xiàn)有反應(yīng)性（83.7%）。9. 分析性能10. 干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素5mg/dl）、溶血（血紅蛋白2g/dl）、脂血（脂質(zhì)1500mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時(shí)后才能采血。不受類風(fēng)濕因子干擾（2400U/ml）

8、。19種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定無干擾。接受過小鼠單抗治療或診斷的病人可能會(huì)出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。偶爾會(huì)遇到抗鏈酶親和素抗體的干擾。Elecsys 抗HBe測(cè)定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進(jìn)行診斷。11. 結(jié)果解釋標(biāo)本的Cutoff指數(shù)1.0判斷為抗HBe無反應(yīng)性，可判定該標(biāo)本抗HBe陰性，不需進(jìn)一步的試驗(yàn)。標(biāo)本的Cutoff指數(shù)=1.0判斷為抗HBe有反應(yīng)性，可判定該標(biāo)本抗HBe有反應(yīng)性。12. 臨床意義乙肝e抗體（anti-HBe）是乙肝病毒在肝細(xì)胞中增殖時(shí)出現(xiàn)的前-C/C基因的產(chǎn)物。經(jīng)蛋白酶水解后，HBe蛋白質(zhì)以非顆粒形式（16kD-20kD）分泌入血清中。在急性HBV感染時(shí)，血清中可出現(xiàn)HBeAg，但維持可測(cè)水平的時(shí)間很短暫（數(shù)天-數(shù)周）。測(cè)出HBeAg一般提示有大量病毒存在。在急性乙肝的恢復(fù)期，HBeAg轉(zhuǎn)陰，取而代之的是相應(yīng)的抗體（抗HBe）。急性和遷延性乙肝