免疫SOP：proBNP作業(yè)指導(dǎo)書

1、66文件編號：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導(dǎo)書 COBAS E601/E 411乙腦利鈉肽前體(proBNP)1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程18分鐘完成。 第1步：20l標本、生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體和釕（Ru）標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電

2、倍增管進行測定。Elecsys自動將標本產(chǎn)生的光電信號與從腦利鈉肽前體定標液得出的Cutoff值相比較。2. 標本要求血清：按標準常規(guī)方法采集或用含有分離膠的試管。血漿：含肝素鋰或肝素胺抗凝劑。標本穩(wěn)定性：2025穩(wěn)定3天，在28度可穩(wěn)定6天，-20oC可穩(wěn)定12個月。含沉淀的標本使用前需離心；不要使用加熱滅活的標本；標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前的溫度應(yīng)與室溫平衡；放入儀器后應(yīng)在2 小時內(nèi)測定以避免蒸發(fā)的影響。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M： 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6

3、.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，含防腐劑。R1：生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體（灰蓋），1瓶，9ml，濃度1.5ug/l，磷酸緩沖液40mmol/l，pH7.4含防腐劑。R2：Ru(bpy)32+標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體（黑蓋），1瓶，9ml。濃度高于1.7ug/ml，磷酸緩沖液40mmol/l，pH7.4含防腐劑。校準品：Cal 1 陰性定標液（白蓋），2*1mlCal 2 陽性定標液（黑蓋），2*1ml質(zhì)控品：Elecsys 腦利鈉肽前體質(zhì)控品1和2 （PreciControl Cardiac）貨號03530477其他所需材料：cobas e 411 分析儀需要：貨號116

4、62988，Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）6X380毫升貨號11662970，Elecsys 測量池清洗液（CleanCell）6X380毫升貨號11930346，Elecsys 添加劑液（SysWash）1X500毫升貨號11933159，Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（Adapter for SysClean）貨號11706802，Elecsys 2010 反應(yīng)杯（Assay Cup）貨號11706799，Elecsys 2010 吸樣頭（Assay Tip）cobas e 601分析儀需要：貨號12135019，Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell M）貨號12135

5、027，Elecsys 測量池清洗液（CleanCell M）貨號03023141，Elecsys 系統(tǒng)緩沖液/測量池清洗液預(yù)熱杯（PC/CC-Cup）貨號12102137，Elecsys 反應(yīng)杯/吸樣頭盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)貨號03023150，Elecsys 廢物盒(wasteliner)貨號03027651，Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架(SysClean Adapter M)各種分析儀均適用的材料貨號11298500，Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean），5100ml系統(tǒng)洗液4. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)CO

6、BAS E601/E 411全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：每批腦利鈉肽前體試劑盒必須用新鮮試劑和腦利鈉肽前體 Cal 1,Cal 2定標一次。另外，以下情況需要再次定標： 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時；根據(jù)規(guī)定進行多次標定。5. 操作步驟（以COBAS E601為例）5.1 校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單Calibration中進行即可。3.2進入CalibrationStatus

7、菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點定標（BLANK鍵）或兩點定標（TWO POINT鍵）、跨距定標（SPAN鍵）、多點定標（FULL鍵），再選擇其它項目進行相應(yīng)選擇，最后點SAVE，將定標物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點Start，再點Start，儀器開始定標。 在CalibrationStatus菜單中看定標結(jié)果，點Calibration Result鍵看定標結(jié)果，點Reaction Monitor鍵看每個定標物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測程序： 單個樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence N

8、o欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點SAVE鍵，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點REPEAT，輸入該批標本的最后一個標本號，點OK即可。進樣分析，將標本按在Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。6. 質(zhì)量控制用Elecsys 腦利鈉肽前體質(zhì)控品1和2 （PreciControl）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至

9、少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法儀器會自動根據(jù)Cal 1和Cal 2的測定值計算Cut-off值。每一個標本的結(jié)果以有反應(yīng)性或無反應(yīng)性以及Cutoff指數(shù)形式（標本信號/ Cutoff）報告。8. 參考范圍從參考組的信息中得出最合適的域值125pg/ml。9. 分析性能精密度嚴格按照修訂方案的NCCLS EP-5A文件規(guī)則：每天6次，10天；E170上批內(nèi)精確性，n21。使用試劑，人血清和質(zhì)控測定得到重復(fù)性。SD及CV值如下表所示：e411批內(nèi)精密度總精密度均值標準差CV

10、%標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/l pg/mlpmol/l 人血清117520.74.670.552.75.60.663.2人血清235541.98.6812.410.41.22.9人血清3106812620.52.41.927.63.32.6人血清4496258686.910.31.811413.52.3proBNP質(zhì)控143451.27.690.911.810.31.22.4proBNP質(zhì)控2678180011813.91.814617.22.2E601批內(nèi)精密度總精密度均值標準差CV%標準差標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/l pg/mlpmo

11、l/lpg/mlpmol/l人血清147455.94.330.510.949458.328.73.395.8人血清2800594585101.1782792432137.884.1人血清3136821614118.513.980.913143155149057.83.7proBNP質(zhì)控120825.51.740.210.820023.68.951.064.5proBNP質(zhì)控23786447114.513.534002472144173.6分析靈敏度5pg/ml(0.6pmol/L)分析靈敏度只能區(qū)分空白與最低限。功能靈敏度50pg/ml (5.9pmol/L)功能靈敏度指NT-proBNP檢測

12、在CV為20%時的最低限。分析特異性Elecsys proBNP檢測時，對于下列物質(zhì)無交叉反應(yīng)10. 干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素35mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.4g/dl）、脂血（脂質(zhì)4000mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8 小時后才能采血；不受類風濕因子干擾（1500U/ml）；proBNP濃度在300,000ng/ml以內(nèi)無鉤狀效應(yīng)；在51種常用藥上進行體外測試，未發(fā)現(xiàn)干擾。測試品和少數(shù)血清間潛在免疫相互作用引起的干擾風險已通過合適的添加劑降到最小。極少情況下，由極高濃度Streptavidin 和ruthenium引起的干擾可發(fā)生。ProB

13、NP含添加劑減小這些影響。11. 臨床意義左心室功能不全發(fā)生在冠心病，動脈高血壓，瓣膜疾病，原發(fā)性心臟病等疾病之后。如果左心室功能不全得不到治療或進展，由于心臟猝死的原因，其潛在的死亡率較高。慢性心功能不全是由心臟泵功能受損引起的臨床綜合征?？梢愿鶕?jù)臨床癥狀進行分級。如：紐約心臟協(xié)會（NYHA）分級為I，II，III，IV。臨床檢測及影像檢測用于診斷左心室功能不全。利鈉肽類物質(zhì)在心血管系統(tǒng)功能的控制中的意義已經(jīng)得到證實。早期的研究顯示利鈉肽類物質(zhì)可用于診斷與左心室功能不全相關(guān)的疾病。該類物質(zhì)如下列：心鈉肽（ANP），腦鈉肽（BNP），C-型利鈉肽（CNP）。ANP與BNP，通過其促尿鈉排泄、利尿的作用，以及作為腎素-血管緊張素-醛固酮的拮抗物質(zhì)，從而影響人體的電解質(zhì)-體液平衡。ProBNP由108個氨基酸構(gòu)成，主要由心室分泌。然后被裂解為具有生物活性的BNP（77-108氨基酸）和N-端proBNP（1-76氨基酸）。Elecsys proBNP試劑含有多克隆抗體，可以識別N