丹參營養(yǎng)器官中脂溶性成分的動態(tài)變化規(guī)律.

1、丹參營養(yǎng)器官中脂溶性成分的動態(tài)變化規(guī)律作者：秦海燕，索志榮，劉文哲 【摘要】目的測定丹參營養(yǎng)器官中丹參酮 I 和丹參酮UA的含量，并揭示丹參生長過程中，丹參酮 I和丹參酮UA的動態(tài)變 化規(guī)律。方法采用反相高效液相色譜法，以 Zorbax SB - C18(150 mm x 4.6mm, 5.0卩m)為色譜柱；甲醇-0.4%磷酸為流動相，作者：秦海燕，索志榮，劉文哲【摘要】目的測定丹參營養(yǎng)器官中丹參酮I和丹參酮U A的含量，并揭示丹參生長過程中，丹參酮I和丹參酮UA的動態(tài)變化規(guī)律。方法采用反相高效液 相色譜法，以Zorbax SB - C18 (150 mm x 4.6 mm, 5.0 卩為色譜

2、柱；甲 醇-0.4%磷酸為流動相，梯度洗脫，流速為 1.0 ml/min ；二極管陣列檢測器： 檢測波長分別為246, 270 nm ;柱溫為30C。結(jié)果丹參葉和莖中均未檢出丹參 酮I和丹參酮U A,根中丹參酮UA和丹參酮I的含量變化呈“單峰”曲線，丹 參酮UA的含量在7月份最高，為2.94%,丹參酮I含量在5月份最高，為 0.78%。結(jié)論 4 月至 7 月是丹參根中丹參酮積累的關(guān)鍵時期?！娟P(guān)鍵詞】 丹參；營養(yǎng)器官；丹參酮；高效液相色譜Abstract ：ObjectiveTo determine the content of TanshinoneUA andtanshinone I in d

3、ifferent vegetative organs of Salvia miltiorrhizaBge and discover the accumulati on of Tanshinone U A and tanshinone I within a whole growth period. MethodsHigh performance liquid chromatography was used. The separation was performed on Zorbax SB -C18 (150 mm x 4.6 mm, 5.0卩 m) column by gradient elu

4、tion . Themobile phase consisted of CH3OH - 4% aqueous phosphoric acid. The flow rate was 1.0 ml/min. The detection was done at 246, 270 nm and column temperature was 30C .ResultsThere were no tanshinone in thestem and the leaf. Tanshinone UA and tanshinone Iroughly assumed the single peak in the ro

5、ot within a growth period.The highest content of tanshinone UA was in July, up to 2.94% and tanshinoneIwas in May,up to 0.78%.ConclusionApril to July is the critical period of tanshinone accumulation in Danshen root.Key words：Salvia miltiorrhiza Bge;Vegetativeorgans; Tanshinone; High performance liq

6、uid chromatography丹參( Salvia Miltiorrhiza Bunge)為唇形科( Labiatae )鼠尾草屬多年生草本植物，傳統(tǒng)以根入藥。其活性成分可分為脂溶性的二萜醌類和水溶性的 酚酸類成分，鄰醌型的丹參酮I、丹參酮UA 在丹參中的量較高，有較強的生理 活性 , 是丹參主要有效成分之一 1，具有擴張血管 , 降低血液黏度 , 抗血小板 聚集, 改善微循環(huán) , 保護心肌細胞以及抗菌消炎、抗癌等作用 2。目前，關(guān)于 丹參藥用成分的藥理、提取工藝、檢測方法的研究較多，但有關(guān)丹參藥用成分 在整個營養(yǎng)器官動態(tài)變化的研究很少。本文采用高效液相色譜二極管陣列檢 測器(HPLOD

7、AD，研究了丹參脂溶性成分丹參酮I和丹參酮UA在根中的積 累規(guī)律，旨在為丹參的種植、管理、采收、品質(zhì)鑒定及控制丹參藥材質(zhì)量提供 理論依據(jù)。1 儀器與試藥HP1100 高效液相色譜儀(美國 Aglient 公司)，包括四元梯度泵(G1311A ,二極管陣列檢測器(G1315A); DL-180型超聲清洗器(浙江省象山 縣石浦天電子儀器廠)；FZ102微型植物試樣粉碎機(河北省黃驊市齊家務(wù)振興 電器廠); Milli - QG 超純水制備儀(美國 Millipore 公司)。甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為分析純。丹參酮I和丹參酮UA對照品純度均大于 99.5%，購自中國藥品生物制品檢定所。丹參(

8、 Salvia Miltiorrhiza Bunge )實驗材料采于西北大學(xué)苗圃內(nèi)的栽培 植株(2006年3月自商洛天士力丹參藥材基地移栽)。于 2007-0412期間 每月 20 日以隨機抽樣的方式選擇丹參植株 6 株，摘取各樣品株的根、葉片和 莖，分別整理，60C的恒溫箱內(nèi)烘干至恒重，研細，過 6號篩后備用。2 方法2.1 對照品溶液的配制分別精密稱取對照品丹參酮 I 1.1 mg 和丹參酮 IIA2.2 mg,分別置10 ml量瓶中，用二氯甲烷甲醇(V/V = 1/9 )混合溶劑 溶解并定容，搖勻，得丹參酮I濃度為0.11 mg ml-1和丹參酮IA濃度為 0.22 mg ml-1的單一

9、成分對照品溶液，作為儲備液，其它不同濃度的對照品 溶液由儲備液稀釋得到。2.2供試品溶液的制備精密稱量丹參根、莖、葉粉末約120 mg,置25 ml燒瓶中，準確加入二氯甲烷甲醇(V/V = 1/9 )混合溶劑10 ml，稱重，超聲 提取 30 min ，冷卻至室溫，再稱重，用提取液補足減失的質(zhì)量，搖勻，取適量 用0.45卩m微孔濾膜濾過，即得丹參脂溶性成分供試品溶液。2.3 色譜條件美國 Zorbax SB - C18 (150 mm x 4.6 mm, 5.0卩 m)色譜柱；流動相為甲醇 0.4%磷酸，梯度洗脫，其時間程序為 0-10-13 min， 甲醇體積分數(shù)相應(yīng)為72%-87%-72%

10、流速1.0 ml min-1 ;二極管陣列檢測 器：檢測波長分別為246, 270 nm ;柱溫30 C。丹參酮I和丹參酮IA的保留 時間分別為 8.1 ， 10.8 min 。對照品和丹參樣品色譜圖見圖 1。2.4線性關(guān)系考察精密移取“ 2.1 ”項所配的丹參酮I和丹參酮UA儲備液 一定體積于 10 ml 量瓶中，稀釋，配成丹參酮 I 濃度分別為 0.44，0.88， 1.76 , 3.52 , 7.04 , 14.08 卩 g ml-1 及丹參酮 UA 濃度分別為 4.4 , 8.8 , 17.6 , 26.4 , 35.2 , 70.4卩g ml-1的混合對照品溶液，將上述混合對照品溶

11、液分別平行測定3次（均進樣10.0卩l(xiāng) ），以平均峰面積丫對濃度C（卩g ml- 1）進行線性回歸，丹參酮I和丹參酮UA回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：丫 = 74.61C - 118.86 ， r= 0.999 4 ；丫 = 55.58C - 94.75， r = 0.999 6 。線性范圍分別為 0.44 14.08 , 4.4 70.4 卩 g ml-1。2.5 精密度實驗 精密吸取丹參（ 6月根）脂溶性成分供試品溶液 10.0卩l(xiāng)，重復(fù)進樣6次，進行測定，丹參酮I和丹參酮UA峰面積積分值的RSD分 別為 1.7%， 1.9%。2.6 穩(wěn)定性實驗 對丹參（ 6月根）脂溶性成分供試品溶液在 8 h 之內(nèi)每隔 1 h進行考察，結(jié)果丹參酮I和丹參酮UA峰面積積分值的RSC分別為2.1%, 2.1%（n = 9 ）。2.7重復(fù)性實驗 精密稱量丹參（6月根）粉末約200 mg共6份，按 “2.2”項操作制備脂溶性成分供試品溶液，進行測定，丹參酮 I和丹參酮UA 含量的RSD分別為2.