菠菜中草酸的測定

1、菠菜中草酸的提取及含量測定 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 學(xué)會沉淀法提取操作，進(jìn)一步熟悉過濾，離心，提取等操作, 掌握均勻沉淀法的原理。 2. 學(xué)習(xí)文獻(xiàn)資料的查詢方法，學(xué)會制作實(shí)驗(yàn)方案，綜合運(yùn)用各種分 析方法解決實(shí)際問題。 3. 學(xué)習(xí)食品采樣方法，綜合分析菠菜中草酸的含量分布情況。 二、實(shí)驗(yàn)原理 草酸是一種二元羧酸，是植物體內(nèi)普遍存在的一種組分，在菠菜、 莧菜、生菜等許多蔬菜作物體內(nèi)都有較高的含量。 從環(huán)境毒理學(xué)和食 品營養(yǎng)學(xué)角度看，草酸在蔬菜作物可食部位的大量累積會影響到人類 的身體健康本實(shí)驗(yàn)采取靈敏度較高的比色法測菠菜中草酸含量。采 用722型分光光度計(jì)測定，F(xiàn)e在pH值1.82.5的KCL-HCL緩

2、沖液 中與磺基水楊酸（SSAL ）和草酸均生成絡(luò)合物，F(xiàn)e3+和草酸的絡(luò)合 物能使與Fe3+磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺，測定Fe3+的磺基 水楊酸絡(luò)合物的吸光度，隨著草酸量的增加而降低，據(jù)此可計(jì)出樣品 中草酸根的含量。 三、儀器和試劑 儀器部分：榨汁機(jī)，722型分光光度計(jì)，水浴鍋，電子天平，臺 秤，100mL容量瓶3個(gè)，250mL容量瓶4個(gè)，200mL燒杯2個(gè), 500mL燒杯2個(gè)，離心機(jī)及離心管，長頸漏斗，鐵架臺，濾紙。試 劑部分：新鮮菠菜，磺基水楊酸（分析純）（S）, FeCL（s），草酸鈉（s）， KCL （s）, 12mol/L濃鹽酸，0.5mol/L稀鹽酸，去離子水，pH試紙。

3、四、實(shí)驗(yàn)步驟 1.鐵標(biāo)準(zhǔn)液的制備（0.5mg/mL）:稱取0.4gFeCI3于500mL燒杯 中，加入250mL去離子水溶解。 2.磺基水楊酸（SSAL）的配制（0.5%）：稱取0.5g磺基水楊酸（分 析純）于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。 3.草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配制（2mg/mL）:稱取0.2000g草酸鈉于200mL 燒杯中，加入去離子水，稍加熱，使其溶解，移入100mL容量中, 用去離子水定容。 4.緩沖液的配制（pH值2）:稱取3.7g左右KCL于500mL燒杯中, 加入去離子水少量，在水浴鍋上微熱溶解，加 12mol/L濃鹽酸用pH 試紙使pH值為2，移入250mL容量瓶中，用去離

4、子水稀釋至刻度。 5.草酸的待測液制備：將菠菜在去離子水中洗滌2次，晾干。稱取 菠菜可食部位100g，加入100ml水，壓榨23min，每2g勻漿折 算為1g試樣，稱取1份勻漿50g，用100mL水洗入250mL容量瓶, 加入0.5mL濃度為0.5mol/L的HCL溶液，澄清，置于7080度水 浴上加熱30min，其間搖動數(shù)次，取出冷卻，加水至刻度，搖勻過濾, 將濾液經(jīng)10000r/min離心10min，得到的即是草酸待測液。 6.比色法測定菠菜中草酸含量的條件研究 該最大吸收波長即為測定時(shí)所要選擇的最佳波長 508nm。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照以上確定的條件，按下列順序: 加液：2mLFe3+，

5、20mL緩沖液，1.2mL磺基水楊酸，從容量瓶中 依次取出已經(jīng)配制的草酸鈉溶液體積為：0、0.1、0.2、0.4、0.8mL , 再用蒸餾水定容至lOOmL容量瓶中，顯色30min后，以蒸餾水為參 比液，在508nm波長處進(jìn)行比色測定。根據(jù)測定結(jié)果，繪制草酸含 量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過計(jì)算機(jī)擬合，獲得該標(biāo)準(zhǔn)曲線 A關(guān)于x的方程。 其中式中，x為顯色體系的草酸的質(zhì)量濃度（mg/mL），A為吸光度。 7.菠菜中的待測液中草酸含量的測定：用菠菜待測液替代草酸根溶 液，依次取0，0.2,0.4,0.6mL用蒸餾水定容至100mL容量瓶中。顯 色30min后，以蒸餾水為參比液，在 510nm波長處進(jìn)行比色測定, 其余按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法，進(jìn)行顯色反應(yīng)，并測定其吸光度, 填入表下中。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算待測液中草酸含量。 波長（nm） 508 508 508 508 菠菜待測液 體積（mL） 0.00 0.20 0.40 0.60 吸光度 五、注意事項(xiàng)： 1 .比色實(shí)驗(yàn)的選擇：在顯色30min后進(jìn)行比較合適。 2 .在比色測定時(shí)，都是要以蒸餾水為參比溶液注意不能用1號溶 液作為參比。 3 .加液時(shí)要按順序加入，分光光度計(jì)使用之前要預(yù)熱。 4 .用標(biāo)