黑木耳培養(yǎng)加工課件

1、1 食用菌生產(chǎn)技術(shù)課程組 2 第一節(jié) 菌種生產(chǎn)類型及生產(chǎn)流程 第二節(jié) 一級菌種制作技術(shù) 第三節(jié) 二、三級菌種制作技術(shù) 食用菌菌種制作技術(shù) 3 第一節(jié) 菌種生產(chǎn)類型及生產(chǎn)流程 一、菌種概念 二、菌種生產(chǎn)類型 三、菌種生產(chǎn)流程 四、菌種生產(chǎn)場所及設(shè)備 4 一、菌種概念 廣義廣義：是指以保藏、試驗、栽是指以保藏、試驗、栽 培和其它用途為目的，具有繁衍能力，培和其它用途為目的，具有繁衍能力， 遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子、組織或菌遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子、組織或菌 絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體。絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體。 菌種是一種重要的生物資源，椐其使 用的目的不同，可以分為保藏用菌種、試驗 用菌種

2、和生產(chǎn)用菌種。 從食用菌栽培的角度而言，所謂的菌種 就是指生產(chǎn)用菌種。 5 6 菌 種 一級菌種 二級菌種 三級菌種 從孢子分離培養(yǎng)或組織分離 培養(yǎng)獲得的純菌絲體。 由一級菌種擴大繁殖成的 菌絲體。 由二級菌種擴大繁殖成的菌絲 體，是直接用于栽培的菌種。 7 8 種菇種菇 一級菌種一級菌種 二級菌種二級菌種 三級菌種三級菌種 栽培栽培 菌種為何要 經(jīng)過三級逐 步擴大培養(yǎng) ？ 9 三、菌種生產(chǎn)工藝流程 斜面 一級種培 養(yǎng)基制備高壓滅菌接種培養(yǎng) 篩選 提純原始種 中試后確 定一級種保存 孢子或組織分離 一級種轉(zhuǎn)管、擴大 菌種瓶 二級種培 養(yǎng)基制備高壓滅菌接種培養(yǎng)二級菌種 罐頭瓶 菌種袋 三級種培

3、養(yǎng)基制備高壓或 常壓滅菌 接種三級菌種栽培培養(yǎng) 10 菌種制作流程菌種制作流程 一級菌種（配制培養(yǎng)基滅菌接種培養(yǎng)） 二級菌種（配制培養(yǎng)基滅菌接種培養(yǎng) ） 三級菌種（配制培養(yǎng)基滅菌接種培養(yǎng)） 栽 培 11 配制培養(yǎng)基 滅菌 接種 培養(yǎng) 12 （一）菌種場設(shè)計基本要求一）菌種場設(shè)計基本要求 1 1、確、確定制種級別及規(guī)模定制種級別及規(guī)模 良種選育對人員素質(zhì)、設(shè)備條件、種質(zhì)資源的積累、工良種選育對人員素質(zhì)、設(shè)備條件、種質(zhì)資源的積累、工 作的連續(xù)性等都有很高的要求。在菌種生產(chǎn)中，由于前一級作的連續(xù)性等都有很高的要求。在菌種生產(chǎn)中，由于前一級 菌種是后一級菌種的種源，前一級菌種出現(xiàn)質(zhì)量問題比后一菌種是后

4、一級菌種的種源，前一級菌種出現(xiàn)質(zhì)量問題比后一 級菌種出現(xiàn)質(zhì)量問題危害更大。因此對生產(chǎn)和供應(yīng)較前級菌級菌種出現(xiàn)質(zhì)量問題危害更大。因此對生產(chǎn)和供應(yīng)較前級菌 種廠家的條件和責(zé)任的要求更高。種廠家的條件和責(zé)任的要求更高。 目前，我國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)頒布包含這方面內(nèi)容的菌種管理目前，我國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)頒布包含這方面內(nèi)容的菌種管理 行政法規(guī)。今后，各菌種廠在制定規(guī)劃時，應(yīng)根據(jù)本身的技行政法規(guī)。今后，各菌種廠在制定規(guī)劃時，應(yīng)根據(jù)本身的技 術(shù)力量及設(shè)備條件，確定適宜的菌種生產(chǎn)級別和規(guī)模。術(shù)力量及設(shè)備條件，確定適宜的菌種生產(chǎn)級別和規(guī)模。 13 2、制種場地的選擇、制種場地的選擇 水、電、路三通，遠離禽舍、畜欄、廁水、電、

5、路三通，遠離禽舍、畜欄、廁 所等污染源。所等污染源。 3 3、菌種場設(shè)置要求、菌種場設(shè)置要求 菌種場應(yīng)設(shè)原輔料倉庫，原料處理場地，菌種場應(yīng)設(shè)原輔料倉庫，原料處理場地， 洗滌室，配料室，滅菌室，冷卻室，接種室，培洗滌室，配料室，滅菌室，冷卻室，接種室，培 養(yǎng)室養(yǎng)室, ,質(zhì)檢室和菌種儲藏室。質(zhì)檢室和菌種儲藏室。 14 應(yīng)根據(jù)微生物易于在空氣中傳播及其應(yīng)根據(jù)微生物易于在空氣中傳播及其 傳播的特點規(guī)劃廠房，布設(shè)流水線，以使傳播的特點規(guī)劃廠房，布設(shè)流水線，以使 制種的工藝流程既便于流水作業(yè)，節(jié)約勞制種的工藝流程既便于流水作業(yè)，節(jié)約勞 力和投資，又有利于對微生物傳播的控制，力和投資，又有利于對微生物傳播的

6、控制， 提高菌種生產(chǎn)的成品率。下面分別介紹簡提高菌種生產(chǎn)的成品率。下面分別介紹簡 易菌種廠和規(guī)范化菌種廠的平面布局。易菌種廠和規(guī)范化菌種廠的平面布局。 15 配制培養(yǎng)基設(shè)備：切片機、粉碎機、過篩機、 拌料機、裝 瓶或裝袋機 滅菌設(shè)備：高壓滅菌鍋（手提式、立式、臥 式）、常壓滅菌灶 接種設(shè)備：凈化工作臺、接種箱、接種室 培養(yǎng)設(shè)備：培養(yǎng)箱（電熱恒溫、恒溫恒濕）、 培養(yǎng)室、培養(yǎng)架、空調(diào) 菌種保藏設(shè)備：電冰箱、貯藏室（二、三級菌種） 1、制種設(shè)備 16 2 2、基本器具、基本器具 玻璃器皿 衡量器具 基礎(chǔ)設(shè)備 3 3、基本藥品、基本藥品 17 配置必要的生產(chǎn)設(shè)備。配置必要的生產(chǎn)設(shè)備。 生產(chǎn)能力與生產(chǎn)設(shè)

7、備配套生產(chǎn)能力與生產(chǎn)設(shè)備配套 選用質(zhì)量合格、價格適宜的玻璃器皿、塑選用質(zhì)量合格、價格適宜的玻璃器皿、塑 料袋、消毒藥品等低值易耗品。料袋、消毒藥品等低值易耗品。 18 19 20 21 二、一級菌種培養(yǎng)基的配制 1、培養(yǎng)基的概念及分類 根據(jù)食用菌對營養(yǎng)、水分、酸堿度的要求，人為配制成 的供食用菌生長發(fā)育的基質(zhì)。 類 型 天然：天然有機物 合成：已知成分的化學(xué)藥品 半合成：？ 原料 來源 狀態(tài) 液體：營養(yǎng)液 固體 固體：天然固體原料 固化：加1.5%2%瓊脂 表面 形狀 斜面培養(yǎng)基 平板培養(yǎng)基 概念 22 2、一級菌種培養(yǎng)基常用配方 PDA培養(yǎng)基 PSA培養(yǎng)基 馬鈴薯（去皮） 200g 馬鈴薯（

8、去皮） 200g 葡萄糖 20g 蔗糖 20g 瓊脂 1823g 瓊脂 1823g 水 1000ml 水 1000ml PDA培養(yǎng)基和PSA培養(yǎng)基是一級菌種最常用的培養(yǎng)基， 適用于大部分食用菌菌種的分離、培養(yǎng)和保藏，既是一種 廣泛培養(yǎng)基，也是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 注：一級菌種培養(yǎng)基配方眾多，可參考課本或其他書籍。 23 粉狀 條狀 屬天然植物多糖 融點96以上 凝點40 以下 冷水中不溶 透明度好、粘著力強 不被微生物分解利用 特性 24 煮沸20min，取定量濾液 制馬鈴 薯濾液 濾液沸時加入，融后加余料 融化瓊脂 調(diào)節(jié)pH值 勿污管口，控制裝量 分裝試管 準(zhǔn)備滅菌包扎成捆 1%NaOH或HCl

9、 3.一級菌種培養(yǎng)基的配制過程 25 26 （二）滅菌與消毒的方法滅菌與消毒的方法 1 1、常用的滅菌方法、常用的滅菌方法 火焰滅菌用于金屬器具，火焰灼燒至紅（在火焰2/3處燒） 干燥箱滅菌 用于玻璃器皿（培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、吸管）等。洗凈晾干包裝放入干燥箱升溫160 170，保持12h 關(guān)閉電源，自然降溫60以下打開干燥箱取出滅菌物品，盡快使用。 干熱滅菌 濕熱滅菌 常壓滅菌 間歇滅菌 第一次蒸，100保持1 h 28-37下培養(yǎng)24 h 第二次蒸，100，保持1 h 培養(yǎng)24 h 第三次蒸，100，保持1 h。不常用的原因：滅菌一鍋需要34天時間，且冬天需要 保溫。 持續(xù)滅菌 蒸，100

10、保持1214 h（方法：攻頭，控中間，保尾）。 普遍采用，特別用于大規(guī)模塑料袋制種和塑料栽培筒的滅菌。 注意：常壓滅菌鍋要設(shè)計合理，主要是滅菌徹底與否、燃料費用、周轉(zhuǎn)速度、勞動強度 、污染率的高低，直接影響經(jīng)濟效益。 高壓滅菌 手提式高壓滅菌鍋：用于一級菌種培養(yǎng)基滅菌。 臥式或立式高壓滅菌鍋：用于二、三級菌種培養(yǎng)基滅菌。 27 2 2、常用的消毒方法、常用的消毒方法 空間消毒 藥液噴霧 藥劑薰蒸 紫外線照射 0.25%的新潔爾滅，5%的石碳酸，0.25%的多菌靈等。 用量不小于30ml/m3；霧粒越細越好；適時更換藥液（防止抗藥性）。 1020ml的甲醛+58g的高錳酸鉀/ m3；氣霧消毒盒，

11、26g/ m3； 照30min后，再過30min開照明燈 器具消毒 藥液浸泡 煮沸消毒 75%的酒精；藥物揩擦 煮沸20min以上 培養(yǎng)料消毒熟石灰拌料；殺菌劑拌料（0.1%0.2%的多菌靈）；巴氏消毒（發(fā)酵） 分離材料消毒75%的酒精棉球擦拭；0.1%升汞浸泡0.51min無菌水沖洗3次無菌紙吸干 28 （三）一級菌種培養(yǎng)基的滅菌（三）一級菌種培養(yǎng)基的滅菌 1 1滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備 手提式高壓滅菌鍋手提式高壓滅菌鍋 2 2滅菌要求滅菌要求 1.1kg/cm1.1kg/cm2 2，121121 保持保持2020 30min30min 手提式高壓滅菌鍋手提式高壓滅菌鍋 29 3 3操作過程操作過程

12、 加水加水裝鍋裝鍋蓋蓋蓋蓋加熱加熱當(dāng)壓力升為當(dāng)壓力升為 0.5kg/cm20.5kg/cm2時排放冷空氣時排放冷空氣正式升壓正式升壓保壓保壓 （1.1kg/cm21.1kg/cm2，121121，保持，保持20-30min20-30min）停停 止加熱止加熱自然降壓至零自然降壓至零排放余汽排放余汽開蓋開蓋 取出滅菌物品取出滅菌物品趁熱擺斜面趁熱擺斜面檢驗滅菌效果檢驗滅菌效果 （3232空白培養(yǎng)空白培養(yǎng)48h48h）。）。 30 31 無菌操作要點 接種環(huán)境消毒滅菌 酒精棉球消毒雙手 操作器具消毒滅菌 開啟的管口、瓶口靠近燈焰 拔出的棉塞勿觸及任何地方 動作快、準(zhǔn)、穩(wěn) 要點 必 備 32 （三）

13、菌種分離的設(shè)備（三）菌種分離的設(shè)備 1接種箱：操作規(guī)程 2凈化工作臺：操作規(guī)程 3接種室：操作規(guī)程 33 接種工具 凈化工作臺 34 （四）菌種分離的方法（常用三種）（四）菌種分離的方法（常用三種） 組 織 分 離 法 將食用菌的部分組織移接 到斜面培養(yǎng)基上獲得純培 養(yǎng)的方法 簡單易行 保持原菌種性狀 適用于大型肉質(zhì)子實體 重復(fù)多易退化 種菇選擇種菇消毒 切取組織塊移接組織 塊至斜面中央培養(yǎng) 特點 概念 操作過程 （以傘菌為例） 35 孢 子 分 離 法 概念 特點 操作 過程 利用子實體產(chǎn)生的成熟 有性孢子分離培養(yǎng)獲得 純菌種的方法 屬于有性繁殖，后代易發(fā)生變 異，可用此法培育新品種 分離過

14、程較復(fù)雜，適用于膠質(zhì) 菌類和小型傘菌 孢子的采集孢子的分離 孢子的萌發(fā) 36 孢 子 分 離 法 多個孢子萌發(fā)后自由交 配獲得純菌種的方法 多孢分離 單孢分離 單個孢子萌發(fā)獲得純單個孢子萌發(fā)獲得純 菌種的方法菌種的方法 整菇插種法 鉤懸法 孢子印法 平板稀釋法 連續(xù)稀釋法 毛細血管法 37 基 內(nèi) 菌 絲 分 離 法 概念 特點 適用 范圍 從生長子實體的培養(yǎng)基中分離 菌絲獲得純培養(yǎng)的方法 易感染雜菌 子實體已腐爛，但又必須保留 該種菌種 子實體小而薄，用組織分離法 和孢子分離法較困難 混合菌絲培養(yǎng)類型，如銀耳， 多采用此法 38 操作示范 選種菇 外觀典型、大小適中、無病蟲害、 八成熟、第1

15、2茬的子實體 取組 織塊 取組織塊：縱剖（撕）菇體，在柄 蓋交界處取綠豆粒大的組織 種菇 消毒 用75%的酒精棉球擦拭子實體 接組 織塊 培養(yǎng) 移接至斜面中部 25培養(yǎng)箱 39 純 化 概 念 措 施 是指對分離獲得的菌種進 行再提純，成為生產(chǎn)所需 要的菌種的方法 菌絲的再提純菌絲的再提純 污染物的排除污染物的排除 正常的菌種在固體培養(yǎng)基上， 菌絲逐漸向四周呈輻射狀生長，邊緣整 齊一致，菌絲濃密健壯！ 40 是菌種投入生產(chǎn)前必須做的結(jié)實 性鑒定試驗 進一步確定菌種，以避免菌種選 育不當(dāng)而造成不可估量的損失 形態(tài)特征、生理特性、栽培性 狀、經(jīng)濟效益等 41 轉(zhuǎn)管 過程 取直徑3-5mm的母種塊

16、移入新斜面中部 轉(zhuǎn)管 目的 擴大繁殖，增加母種數(shù) 量，以滿足生產(chǎn)需要 注意 種塊勿太大 原老種塊勿再接入 傳代次數(shù)勿太多 42 母種 培養(yǎng) 設(shè)備 注意 條件 經(jīng)常檢查，及時剔除污染管 控制菌齡（即將長滿斜面） 外觀檢查：菌絲白、整齊、 粗壯、有彈性、萌發(fā)快則質(zhì)量 好，否則質(zhì)量差 電熱恒溫培養(yǎng)箱 25左右、干凈、干燥、 黑暗、通風(fēng) 43 （一）保藏目的及原理 使菌種不死亡不生長不污染， 不降低或不喪失其優(yōu)良性， 以盡量延長使用時間。 保藏目的 保藏原理 創(chuàng)造不利于菌種生長的一切 條件，使其代謝處于休眠狀 態(tài)。 44 45 （二）菌種保藏方法（常用） 特點 簡便 保藏時間短 易污染及退化 不適于草

17、菇等菌類 1.斜面低溫法 斜面菌種置46冰箱中（36個月） 2.礦油保藏法 3.自然基質(zhì)保藏法 自學(xué)！ 46 （三）菌種保藏注意事項 u用保種培養(yǎng)基 u及時保藏（菌絲占斜面2/3） u最好換膠塞 u用時活化 u嚴防棉塞受潮 47 復(fù)習(xí)思考題 1什么是一級菌種？簡述一級菌種制作的工藝流程。 2一級菌種培養(yǎng)基常用的配方是什么？簡述其制作過程 3名詞解釋：消毒、滅菌、提純。 4如何對一級菌種培養(yǎng)基進行滅菌？如何檢驗其滅菌效果？ 5什么是菌種分離？菌種分離有哪幾種方法？ 6簡述組織分離法的操作過程。 7為什么要進行出菇試驗？ 8什么叫轉(zhuǎn)管？為什么要轉(zhuǎn)管？ 9什么是無菌操作？怎樣才能做到無菌操作？ 48

18、 49 配制培養(yǎng)基 滅 菌 二級菌種 培 養(yǎng) 接 種 培 養(yǎng) 接 種 滅 菌 配制培養(yǎng)基 三級菌種 一級菌種 二級菌種 50 （一）配制原則（一）配制原則 1選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)。 2營養(yǎng)物質(zhì)間配制的比例要恰當(dāng)。 3選擇經(jīng)濟實用、來源廣泛的原料。 4適宜的pH值和含水量。 51 木屑培養(yǎng)基 闊葉樹木屑 78% 麩皮(或米糠) 20% 蔗 糖 1% 石膏粉 1% 料水比 1:1.11.3 棉籽殼培養(yǎng)基 棉籽殼 78% 麩皮(或米糠) 20% 蔗 糖 1% 石膏粉 1% 料水比 1:1.11.3 52 稱料 拌料 調(diào)節(jié)pH值 分裝培養(yǎng)料 清潔（洗或擦）瓶、袋外壁 封口 1.不溶性主、輔料混拌均勻 2.可溶性輔料溶于水后拌入主輔料 3.注意檢查含水量（手測法等） 比實際要求的pH值調(diào)高1左右 容器：菌種瓶、菌種袋 要求：上緊下松，外緊內(nèi)松，中間一個洞 53 臥式高壓蒸汽滅菌鍋 54 分析原因 ？ 55 三.二、三級菌種的接種 概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過程 關(guān)鍵：無菌操作 接種 接種環(huán)境消毒滅菌 酒精棉球消毒雙手 操作器具消毒滅菌 開啟的管口、瓶口靠近燈焰 拔出的棉塞勿觸及任何地方 動作快、準(zhǔn)、穩(wěn) 無菌 操作 要點 56 接 種 方 法 二級種 三級種 用接種耙取蠶豆大母 種放于瓶中料面上 用接種匙（鑷、鏟） 取棗大原種放于袋中 或瓶中